Real-Time PCRs anvendelse til diagnostik af endometritis - Elbo
Real-Time PCRs anvendelse til diagnostik af endometritis - Elbo
Real-Time PCRs anvendelse til diagnostik af endometritis - Elbo
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Sammendrag<br />
Formålet med undersøgelsen var at evaluere den diagnostiske styrke <strong>af</strong><br />
<strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> Polymerase Chain Reaction (<strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR) <strong>til</strong> direkte påvisning<br />
<strong>af</strong> Streptococcus equi subspecies zooepidemicus og Streptococcus<br />
equi subspecies equi fra prøvemateriale fra hoppers endometrium uden en<br />
forudgående bakteriologisk dyrkning (BU).<br />
Prøvematerialet bestod <strong>af</strong> 53 sæt prøver <strong>af</strong> følgende: En endometriesvaberprøve,<br />
en lav-volumen uterusskylleprøve og en endometriebiopsi. Prøverne<br />
var udtaget parrede, hvilket muliggjorde sammenligning <strong>af</strong> prøvetyperne<br />
indenfor og imellem hopperne. Samtlige 159 prøver blev undersøgt for<br />
<strong>til</strong>stedeværelse <strong>af</strong> Streptococcus equi subspecies zooepidemicus og Streptococcus<br />
equi subspecies equi, ved hjælp <strong>af</strong> SYBR ® Green <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR og et<br />
primersæt specifikt for det bakterielle superoxid dismutase A gen, sodA.<br />
Resultaterne viste 34 % positive svaberprøver, 38 % positive skylleprøver<br />
og 15 % positive biopsier. Til sammenligning var resultaterne for BU 17 %<br />
positive svaberprøver, 28 % positive skylleprøver og 15 % positive biopsier.<br />
Korrelation mellem <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR og BU positive resultater var lav, hvilket<br />
gav sensitiviteter på mellem 0,25 - 0,56.<br />
Det kan konkluderes, at <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR forøgede andelen <strong>af</strong> positive svaberprøver<br />
statistisk signifikant (p = 0,05) sammenlignet med BU. Andelen <strong>af</strong><br />
positive skylleprøver blev numerisk, men ikke signifikant øget. Andelen <strong>af</strong><br />
positive prøver var statistisk signifikant lavere for biopsier sammenlignet med<br />
de øvrige prøvetyper u<strong>af</strong>hængigt <strong>af</strong> påvisningsmetoden.<br />
Summary<br />
The aim was to investigate the diagnostic performance of <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> Polymerase<br />
Chain Reaction (<strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR) for direct detection of Streptococcus<br />
equi subspecies zooepidemicus and Streptococcus equi subspecies<br />
equi from sample material from mare endometrium without prior bacteriological<br />
culturing (BC).<br />
The sample material consisted of 53 sets of samples as follows, an<br />
endometrial swab, a low-volume uterine flush and an endometrial biopsy.<br />
The paired sampling enabled comparison of the different types of samples<br />
within and between mares.<br />
All 159 samples were examined for the presence of Streptococcus equi<br />
subspecies zooepidemicus and Streptococcus equi subspecies equi by<br />
means of SYBR ® Green <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR and primers specific for the bacterial<br />
superoxide dismutase gene, sodA.<br />
The results showed that 34 % of the swabs, 38 % uterine flushes and 15<br />
% of the biopsies were positive. In comparison the results from BC of<br />
swabs, uterine flushes and biopsies were 17 %, 28 % and 15 % respectively.<br />
The correlation between <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR positive results and BC positive<br />
results were low, and sensitivities ranged from 0.25–0.56.<br />
The <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR resulted in statistically significant (p = 0.05)<br />
increased number of positive swabs compared to BC. The number of positive<br />
uterine flushes was numerically but not significantly higher. On the<br />
biopsy material the number of positive samples was statistical significantly<br />
lower compared to the other types of samples independent of test<br />
method.<br />
bOLETTE SKIvE1 MORTEN RøNN PETERSEN2 ANDERS MIKI bOJESEN3 1DYRLÆGE, RÄvEKULLEvÄGEN 10,<br />
423 72 SÄvE, GÖTEbORG, SvERIGE<br />
2DYRLÆGE, PH.D., INSTITUT FOR<br />
PRODUKTIONSDYR OG HESTE/<br />
FAGGRUPPEN FOR REPRODUKTION OG<br />
ObSTETRIK, DET bIOvIDENSKAbELIGE<br />
FAKULTET vED KøbENHAvNS<br />
UNIvERSITET, LIFE KU<br />
3DYRLÆGE, PH.D, LEKTOR, INSTITUT<br />
FOR vETERIÆR SYGDOMSbIOLOGI/<br />
FAGGRUPPEN FOR MIKRObIOLOGI,<br />
DET bIOvIDENSKAbELIGE FAKULTET vED<br />
KøbENHAvNS UNIvERSITET, LIFE KU<br />
Indledning<br />
Bakteriel <strong>endometritis</strong> udgør et problem<br />
både for hesteavlen som industri og for<br />
den private hoppeejer. Lidelsen er anerkendt<br />
som en vigtig årsag <strong>til</strong> subfer<strong>til</strong>itet<br />
eller infer<strong>til</strong>itet hos hopper (1,2). Diagnosen<br />
s<strong>til</strong>les på baggrund <strong>af</strong> anamnese, kliniske<br />
tegn/undersøgelse og dyrkning <strong>af</strong><br />
prøvemateriale fra hoppens endometrium<br />
på blodagarplader ofte suppleret med en<br />
udstrygning <strong>af</strong> prøvemateriale <strong>til</strong> evaluering<br />
<strong>af</strong> cytologi for at bekræfte eller<br />
<strong>af</strong>kræfte et inflammatorisk respons (2-7).<br />
Escherichia coli (E. coli) og ß-hæmolytiske<br />
streptokokker er de hyppigst isolerede<br />
bakterier fra patologiske <strong>til</strong>stande i uterus<br />
(1,6), hvor det dominerende agens er<br />
Streptococcus equi subspecies zooepidemicus<br />
(1,8).<br />
Dyrkningsbaserede undersøgelser er<br />
tidskrævende, og resultaterne er ikke altid<br />
entydige. Der er <strong>til</strong>fælde <strong>af</strong> falsk negative,<br />
især blandt kronisk inficerede hopper (2,<br />
5). Det er derfor interessant at undersøge,<br />
om en molekylærbiologisk metode som<br />
<strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> Polymerase Chain Reaction<br />
(<strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> PCR) kan bruges <strong>til</strong> at påvise<br />
Streptococcus equi subspecies zooepidemicus<br />
og Streptococcus equi subspecies<br />
equi direkte fra klinisk prøvemateriale for<br />
derved at øge sensitiviteten, specificiteten<br />
og hastigheden, hvormed agens kan<br />
DVT 01 2012 21<br />
>