Antibiotika-haltige Knochenzemente: In vitro Untersuchungen der ...

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Antibiotika-haltige Knochenzemente: In vitro Untersuchungen der ...

Material und Methoden 33

3.5.3 Keim

Die Untersuchungen wurden mit 3 Staphylococcus epidermidis-Stämmen durchgeführt (siehe

Diffusionsversuche). Die Stammhaltung erfolgte auf Blutagar. Für die simulierte Infektion im

Grasso-Modell wurde ein 100ml-Kolben steriler TSB mit 5 Einzelkolonien beimpft und bei

37°C über 24h inkubiert. Danach wies die Kultur eine Keimzahl von ca. 10 7 - 10 8 Keimen/ml

auf.

3.5.4 Versuchsansatz

Im Grasso-Modell wurden 8 Gefäße plaziert und jedes Gefäß mit je 2 Testzylindern eines

Zementes beschickt. Die Einstellungen im Grasso-Modell waren analog den Einstellungen in

den Elutionsversuchen. Als Elutionsmedium diente TSB.

Nach dem Versuchsaufbau erfolgte mittels der Peristaltikpumpe ein Vorlauf von TSB. Nach

der Initialfüllung mit 20ml wurden die Inkubationsgefäße mit den Testzylindern beschickt:

Gefäß 1: 2 Plättchen Refobacin Palacos R

Gefäß 2: 2 Plättchen VersaBond AB

Gefäß 3: 2 Plättchen VersaBond mit 1g Clindamycin

Gefäß 4: 2 Plättchen Palacos R und 2 Plättchen VersaBond

3.5.5 Infektionsdosis

Die Gefäße wurden mit je 100µl der frisch angezüchteten 18-24h-Kultur des Testkeimes

beimpft. Dies ergab eine Konzentration von 10 4 bis 10 5 Keimen/ml.

3.5.6 Probenentnahme

Für die Probenentnahme wurden zu den oben angeführten Zeitpunkten die Gefäße aus dem

Versuch entfernt.

3.5.6.1 Testzylinder

Je ein Testzylinder wurde mit einer sterilen Pinzette dem Inkubationsgefäß entnommen, in ein

Reagenzglas mit 5ml steriler Ringerlösung überführt, Alukappe und Reagenzglasöffnung

abgeflämmt und das Reagenzglas kurz während 3 Sekunden mit dem Schüttelgerät

aufgeschüttelt, um locker anhaftende Bakterien von der Testzylinderoberfläche zu entfernen.

Nach einmaliger Wiederholung dieses Vorgangs wurde der Testzylinder in ein Reagenzglas

mit 1ml Ringerlösung überführt und während 1 Minute im Ultraschallbad bei maximaler

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