Interaktion von Masernviren mit Dendritischen Zellen - OPUS ...

Ergebnisse 110
4.2.2.2 Die Masernvirusglykoproteine F und H interagieren mit DC-SIGN
In diesen Experimenten sollte untersucht werden, welches der beiden MV-
Glykoproteine an DC-SIGN bindet. Dazu wurden transfizierte Meljuso-Zellen
benutzt, die entweder das MV-H- oder das MV-F-Protein exprimieren.
Die aus den Zellen isolierten F- und H-Proteine wurden an fluoreszierende
Mikrokügelchen gebunden und mit CHO-Zellen, die das Oberflächenmolekül
DC-SIGN stabil exprimierten, inkubiert. Die Bindung der Mikrokügelchen an die
Zellen wurde durchflusszytometrisch bestimmt.
MV-Protein Bindung
(% posititve Zellen)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
F H
CHO -DC - SIGN
CHO - DC - SIGN + Mannan
CHO - DC - SIGN + EGTA
CHO (mock)
Abbildung 4—19: Bindung der MV-Glykoproteine an DC-SIGN. Transfizierte Meljuso-Zellen
exprimieren die MV-Glykoproteine F oder H. Die Zellen wurden lysiert, die Proteine F und H aus dem
Lysat immunpräzipitiert und an fluoreszierende Mikrokügelchen gebunden. Zur Untersuchung der
Wechselwirkung der MV-Proteine F und H mit DC-SIGN wurden die beladenen Mikrokügelchen mit DC-
SIGN exprimierenden CHO-Zellen inkubiert. Um die Spezifität der Bindung an DC-SIGN zu bestimmen,
wurden der DC-SIGN Ligand Mannan (1 mg/ml) und der Calciumchelator EGTA (10 mM) eingesetzt. Die
Menge an gebundenem Virus wurde durchflusszytometrisch bestimmt und ist in Prozent MV-positiver
Zellen dargestellt.
Wie aus der Abbildung 4—19 hervorgeht, bindet sowohl das MV-H- als auch
das MV-F-Protein an DC-SIGN. In beiden Fällen wurden in etwa 70 % positive