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4.

4. Ergebnisse.....................................................36 4.1 Untersuchungen des mPiezo1-Kanals in HEK-Zellen..36 4.1.1 Messergebnisse...........................................................36 4.1.2 Veränderung der Osmolaritäten zur Ergebnisverbesserung...........................................................38 4.1.3 Protokolländerungen zur Ergebnisverbesserung..........39 4.1.4 Verschiedene Erntemethoden zur Ergebnisverbesserung...........................................................40 4.1.5 Änderung der Passagiermethode zur Ergebnisverbesserung...........................................................41 4.1.6 Diskussion....................................................................42 4.2 Untersuchungen des VSOR-Chloridkanals in HeLa-Zellen...........................................................43 4.2.1 Charakterisierung der Stromantwort in isotoner Lösung.................................................................43 4.2.2 Untersuchung des Stromanstiegs.................................45 4.2.3 Volumenänderung der Zellen........................................49 4.2.4 Untersuchung des Stromabfalls....................................50 4.2.5 Chloridanteil der maximalen Stromantwort...................51 4.2.6 Einfluss von Arachidonsäure........................................54 4.2.7 Bindungseigenschaften von Arachidonsäure................55 4.2.8 Einfluss von FBS auf blockierte Kanäle........................56 4.2.9 Diskussion....................................................................58 5. Zusammenfassung........................................60 Quellen- und Literaturverzeichnis....................62 4

Abbildungsverzeichnis Abbildung 2.1: Biomembran 11 Abbildung 2.2: Ersatzschaltbild einer Biomembran 15 Abbildung 2.3: Angelegte Rechteckspannung und Stromantwort eines RC-Gliedes 16 Abbildung 2.4: Aufbau eines nikotinischen Acetylcholinrezeptors 17 Abbildung 2.5: Mögliche Piezo-Strukturen bzw. Aktivierungsmodelle 19 Abbildung 2.6: Klassische Patch-Clamp-Technik 21 Abbildung 2.7: Patch-Clamp-Konfigurationen 22 Abbildung 2.8: Planare Patch-Clamp-Technik 23 Abbildung 2.9: Ersatzschaltbild einer Zelle im Whole-cell-mode 24 Abbildung 3.1: Messaufbau für die Benutzung des Port-a-Patch 31 Abbildung 3.2: Chip für den Port-a-Patch 33 Abbildung 3.3: Messprotokoll für die Messung an VSOR-Chloridkanälen 34 Abbildung 4.1: Messprotokoll für die Messung an mPiezo1-Ionenkanälen 37 Abbildung 4.2: Spannungsimpuls in Form einer Rampe 43 Abbildung 4.3: Standardstromantwort von HeLa-Zellen auf eine Spannungsrampe 44 Abbildung 4.4: Vergleich von kaliumhaltiger und kaliumfreier internen Lösung 44 Abbildung 4.5: Stromantwort vor und nach Einwirken von hypotoner Lösung 46 Abbildung 4.6: Vergleich der Strommaxima vor und nach dem Austausch durch hypotoner Lösung 47 Abbildung 4.7: Vergleich der Stromminima vor und nach dem Austausch durch hypotoner Lösung 47 Abbildung 4.8: Aufzeigen der Darstellungsmethode folgender Graphen 48 Abbildung 4.9: Steigende Strommaxima und -minima nach dem Austausch isotoner gegen hypotoner, externer Lösung 49 5

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