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5. Zusammenfassung Im

5. Zusammenfassung Im Rahmen dieser Arbeit wurden zwei mechanosensitive Ionenkanäle untersucht. Bezogen auf die Möglichkeit, elektrophysiologische Untersuchungen mittels der planaren Patch-Clamp-Technik von Nanion durchzuführen, fielen die Ergebnisse gegensätzlich aus. Der in HEK-Zellen überexprimierte mPiezo1-Ionenkanal wird in erster Linie durch einen Druckunterschied zwischen intra- und extrazellulärer Umgebung aktiviert. Obwohl viele verschiedene Maßnahmen getroffen wurden, die Aktivierung zu erleichtern, konnte kein Stromfluss durch diese Kanalproteine festgestellt werden. Dies gilt für den On-cell- ebenso wie für den Whole-cell-mode. Hauptproblem bei On- cell-Messungen waren vermutlich Rundowneffekte. Diese Effekte können durch zu große oder lange Druckeinwirkung auf Zellen während des Ernte- oder Sealvorgangs die Kanäle permanent inaktivieren. Whole-cell-Messungen hingegen wurden in Papern vornehmlich mit Hilfe einer zweiten Pipette zur Druckgenerierung durchgeführt. Diese Möglichkeit war mit der von Nanion Technologies verwendeten Messapparatur nicht gegeben. Die Entwicklung neuer Verfahren im Hinblick auf vorzubeugenden Rundowneffekten ist das Ziel neuer Arbeiten. Die Öffnung der in die Zellmembran der HeLa-Zellen eingebauten VSOR (volume- sensitive outwardly rectifying) Chloridkanäle wurden in dieser Arbeit durch osmotisches Schwellen eingeleitet. Nach anfänglichen Schwierigkeiten konnte eindeutig ein steigender Stromfluss nach längerer Einwirkzeit extrazellulär zugeführter, hypotoner Lösung gezeigt werden. Ergebnis war ein Anstieg von 302±138% bei einer künstlich angelegten Spannung von +100mV und ein Anstieg von -303±146% bei -100mV (n = 12). Weiter konnte der erhöhte Strom durch erneuten Austausch mit extrazellulärer, isotoner Lösung innerhalb von 301±56s (bis

wie ein quantitativer Zusammenhang zwischen Zellgröße und Stromfluss. Weitere Arbeiten sollten diese Aspekte behandeln. 61

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