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4. Ergebnisse

4. Ergebnisse Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes 4.1. Errichtung und Messung von definierten Konzentrationsprofilen im µ-Slide Chemotaxis 3D. Die Aussagekraft von Zellmigrationsdaten ist stark von der Entwicklung des zur Verfügung stehenden Lockstoffgradienten abhängig. Die Untersuchung der zeitlichen Veränderung des Gradienten beziehungsweise dessen Langzeitstabilität ist daher von maßgeblicher Bedeutung. Anhand einer Versuchsreihe soll untersucht werden, ob sich das Diffusionsprofil im µ-Slide Chemotaxis unabhängig von der Größe der diffundierenden Partikel sowie dem Vernetzungsgrad der verwendeten Matrix verhält. Die Ermittlung des Konzentrationsprofils wurde durch ortsabhängige Integration und graphische Aufbereitung der Fluoreszenz-Signale realisiert. 4.1.1. Untersuchung von Sonden-Matrix Interaktionen Bevor Untersuchungen an den Diffusionsprofilen durchgeführt wurden, wurden die verwendeten Farbstoffe auf mögliche Wechselwirkungen mit den verwendeten Collagen Matrizes und dem Kunststoff der Slides geprüft. Auf diese Weise sollte ausgeschlossen werden, dass andere Faktoren als eine physische Diffusionsbarriere in Form der Strukturfasern der verwendeten Gelmatrix eine Einschränkung der Diffusion bewirken können. Zu diesem Zweck wurde untersucht, ob sich die verwendeten Fluoreszenz-Sonden, nach Eindiffusion in Collagen-Matrizes unterschiedlicher Vernetzungsgrade, wieder rückstandslos aus den Gelen waschen lassen. Im Folgenden werden Durchführung und Ergebnisse dieses Vorexperimentes kurz beschrieben. Für den Versuch wurden Collagen-Gele der Stärken 0,5mg/ml, 1mg/ml und 1,5mg/ml nach dem unter Punkt 3.4.1. beschriebenen Pipettierschema hergestellt und in Angiogenese-Slides der Firma Ibidi gefüllt. Die Gele wurden in die, in den Boden der Probenkammern des Angiogeneseslides eingebetteten 10µl Reservoirs eingebracht. Zur Polymerisation des Collagens wurden die Gele etwa 15 Minuten bei 37°C im Brutschrank inkubiert und anschließend mit 50µl PBS in den darüber liegenden Reservoiren überschichtet, um ein Austrocknen der Matrix zu vermeiden. 4. Ergebnisse 36

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