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Jürschick, Johannes –

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes Abbildung 24: Verdünnungsgraph für Alexa 488 zwischen C0 und C100 der eingesetzten Konzentrationen. Aufgetragen sind die eingesetzte Molarität gegen die Anzahl der gemessenen Fluoreszenz Signale. Der in Abbildung 24 dargestellte Verdünnungsgraph zeigt im Bereich des gesamten verwendeten Konzentrationsspektrums einen linearen Zusammenhang zwischen dem gemessenen FCS-Signal und der eingesetzten Molarität. Der ebenfalls linear ansteigende Fehleraufschlag resultiert aus dem erzwungenen Nulldurchgang des Graphen, der Abweichung in der zugrunde gelegten Steigung auslöst. Auf Grundlage dieser Messungen wird im Folgenden aus den FCS-Messwerten auf die Molarität der Lösung in Abhängigkeit der x-Position im Slide geschlossen. Für alle unternommenen Messungen wurden 5% Maximaloutput des unter 4.1.2. beschriebenen Argon/2 Lasers mit einer Wellenlänge von 488 nm verwendet. Als Fixparameter wurden eine Diffusionszeit von 46µs und ein Struktur-Parameter von 10.2 angenommen. Der verwendete Einstellungsparameter Datensatz „AC-Standard_488 BP 505- 550“ enthielt als Vorgabe außerdem einen Emissionsfilter für Wellenlängen zwischen 505 und 550 nm. Analog zu den LSM-Messungen wurde die Messebene wieder anhand des Unterschiedes im Brechungsindex zwischen Flüssigkeit im Slide und der Kunststoffschicht darüber ermittelt. Der definierte Schritt in z-Richtung betrug 35µm in den Innenraum des Kanalbereiches, so dass sich die Messebene in etwa in der Mitte des 70µm hohen Kanals 4. Ergebnisse 47

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes befand. Obwohl für die FCS-Messungen nur Signale einzelnen Moleküle integriert werden und die punktförmigen Messungen mit ihrer geringen Schichtdicke kaum anfällig für Störgrößen sind, spielt eine standardisierteGeben Sie hier eine Formel ein. und reproduzierbare Messposition eine wichtige Rolle. Durch auftretende physikalische Druck- oder Temperaturunterschiede der Lösungen während des Einfüllens oder nach dem Verschluss der Stöpsel kann es zu Konvektionseinflüssen kommen. Einflüsse durch lokale Konzentrationsverschiebungen in y- oder z-Richtung wurden durch die festgelegte Messposition ausgeschlossen. Die y-Position der Messpunkte wurde erneut auf die Fließlinie des Plastiks gelegt, die in der Draufsicht die horizontale Mitte des Kanals darstellt. In x-Richtung wurden die Messpunkte ausgehend von der Kanalmitte festgelegt, die bei einer Kanalbreite von 1mm durch einen definierten 500µm-Schritt vom rechten Rand bestimmt wurde. Gemessen wurde an Punkten 7 verschiedener x-Koordinaten von +/- 1000, +/-500 und +/-250 µm Entfernung, sowie am Kanalmittelpunkt, wie in Abbildung 25 dargestellt. Abbildung 25: Positionierung der FCS – Messpunkte in einer Kammer des µ-Slide. Innerhalb des vergrößerten Ausschnittes ist eine Bilderserie zu sehen, die aus 7 x 2 Einzelbildern einer LSM-Messung besteht und die Fließlinie des Plastiks in der horizontalen Kanalmitte zeigt. (horizontaler Streifen). Die äußeren Bilder zeigen den Grenzverlauf zwischen dem Kanal (heller Bereich) und den angrenzenden Reservoirs (dunkler Bereich). Die roten Querstriche deuten die Position der Messpunkte an. 4. Ergebnisse 48

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