Aufrufe
vor 4 Jahren

Download - Fakultät 06

Download - Fakultät 06

Jürschick, Johannes –

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes 4.2.3. Migrationsanalyse durch Aktinfärbung mit LifeAct-tag GFP2/RFP Neben Wildtyp Zellen wurden von den jeweiligen Zellkulturen auch LifeAct-tag GFP2/RFP transfizierte Stämme kultiviert und in Chemotaxis-Experimenten untersucht. Das LifeAct-tag lagert Moleküle des Green fluorescent protein (GFP) beziehungsweise des Red fluorescent protein (RFP) an die Aktinmoleküle der Zellen an. Die Migration der Zellen findet, wie in Punkt 1.3. beschrieben, durch Umlagerungen des Aktingerüsts innerhalb der Zelle statt. Durch den Einsatz fluoreszenzmarkierten Aktins ist es möglich die Umlagerung und Ausrichtung des Aktins während der Migration zu beobachten. Abbildung 35 zeigt die Aktinstrukturen einer HT-1080 Zelle mit LifeAct-tag RFP. Abbildung 35: HT-1080-Zelle mit LifeAct-tag RFP. In der Abbildung 35 ist eine Anhäufung des gefärbten Aktins im Zentrum des Zellkörpers zu erkennen. Die Fortsätze mit denen sich die Zelle in dem umgebenden Gel orientiert und festhält sind ebenfalls deutlich erkennbar. Für HT-1080 Zellen war während der durchgeführten Chemotaxisversuche keine Verlagerung der Fluoreszenzintensität in Bewegungsrichtung zu erkennen, obwohl die Zellen in ihrem Migrationsverhalten und der Reaktion auf den chemotaktischen Stimulus der Wildtyp- Variante gleichen. Erkennbar waren nur eine permanente dynamische Umlagerung der Aktinstrukturen im Inneren der Zelle während der Bewegung und eine deutliche Intensitätsanreicherung an dem hinteren Ende der Zellen beim Lösen von Verankerungen aus dem Gel. 4. Ergebnisse 63

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes Abbildung 36 zeigt Bilddaten eines HT-1080 Chemotaxis-Experiments im Phasenkontrast und als Fluoreszenzaufnahme. Abbildung 36: Vergleich zwischen (A) Phasenkonstrast und (B) Fluoreszenzaufnahme von HT-1080 mit Life Act-tag RFP in einer Collagenmatrix. Für HL-60 Zellen konnten wegen der undefinierten Migrationsparameter keine Fluoreszenzdaten von gerichteter Migration generiert werden. Man erkennt aber eine deutliche Anreicherung markierter Strukturen am Frontende der Zelle in Richtung einer zufälligen, ungerichteten Bewegung, wie in Abbildung 37 zu erkennen ist. Abbildung 37: Fluoreszenzaufnahme einer HL-60 Zelle mit LifeAct-tag GFP2 während einer ungerichteten Bewegung. Die Fortsätze mit denen das Gel durchdrungen wird (rote Pfeile), um Adhäsionspunkte für die folgende Bewegung zu schaffen weisen ebenfalls eine starke Fluoreszenzintensität auf. 4. Ergebnisse 64

Das Programm zum Download - Fakultät für Elektrotechnik und ...
Download Broschüre - Fakultät für Architektur - TUM
als Download - Fakultät Rehabilitationswissenschaften - TU Dortmund
Hochschultage Istanbul 2009 Download Präsentation - Fakultät für ...
Download lag-report 06 (2004) - Landesarbeitsgemeinschaft ...
Download Heft 06 / Juni 2011 - Tutzinger Nachrichten
Download Focus Werbebarometer 06/2013 - Gewista
Download Ausgabe 06/2009 - Deutscher Verband für Fotografie
Kostenloser Download aus unserem Online-Archiv Ausgabe 06/2012
Download 06 Jun - Lokale Zeitung Memmingen
Download: 06 Fliesenprofile - Repac
Download: 06 Fliesenprofile - Repac
Artikel aus der Zeitschrift tuph 01/06 downloaden - Kilian-emmerling ...
Download Flyer 01-06 (für DSL: 2,5 MB) - HZwei
Download Sport in bw Nr. 06/12 - Badischer Sportbund Nord ev