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Jürschick, Johannes –

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes Abbildung 14: Schematische Darstellung der Verteilung der Chemoattraktant Konzentrationen auf die Kammern des µ-Slides Chemotaxis 3D zur Ermittlung der einzusetzenden Dosis. .............................................................................................................. 32 Abbildung 15: Schematische Darstellung der Verteilung der Chemoattraktand- Konzentrationen für Chemotaxis Versuche mit Kontrollexperimenten. .................................. 33 Abbildung 16: Vergleich der Phasenkontrastbilder unmittelbar nach Start eines Chemotaxisexperiments und nach 50 Minuten mit farbig markierten Zellspuren. .................. 34 Abbildung 17: Schematische Darstellung der Versuchsdurchführung zur Matrix-Interaktion von Fluoreszenzfarbstoffen in einer Kammer des Angiogeneseslide ...................................... 38 Abbildung 18: Verlauf der gemessenen Fluoreszenz-Intensität während der Versuche für Alexa 488 und FiTC-Dextran in Collagen Matrizes unterschiedlicher Stärke. ....................... 39 Abbildung 19: Lage der konfokalen Schnittebene in einer Kammer der Chemotaxis 3D µ- Slide.......................................................................................................................................... 41 Abbildung 20: Bilddaten einer LSM-Profilmessung bestehend aus 15*2 Einzelbildern und zugehöriges Intensitätsprofil. ................................................................................................... 42 Abbildung 21: Schematische Darstellung der Datenanalyse durch LSM-Messungen ........... 43 Abbildung 22: Konzentrationsprofile der Farbstoffe Alexa 488 und FITC-Dextran in einer CollagenI – Matrix. .................................................................................................................. 44 Abbildung 23: Die Gradienten von Alexa 488 und FiTC-Dextran aufgetragen über die Zeit von 0-36h. ................................................................................................................................ 45 Abbildung 24: Verdünnungsgraph für Alexa 488 zwischen C0 und C100 der eingesetzten Konzentrationen. ...................................................................................................................... 47 Abbildung 25: Positionierung der FCS – Messpunkte in einer Kammer des µ-Slide. ........... 48 Abbildung 26: Graphen der FCS-Messungen über einen Zeitrahmen von 15 min bis 48h.... 49 7.Abbildungsverzeichnis: 75

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes Abbildung 27: Entwicklung des Gradienten aus den FCS-Messungen .................................. 50 Abbildung 28: Mit dem Chemotaxis and Migration Tool erstellter Plot von Zellbewegungen .................................................................................................................................................. 53 Abbildung 29: Schematischer Vergleich der gemessenen FMI parallel und senkrecht zum Konzentrationsgradienten für den Chemotaxisversuch (+/-) aus drei Experimenten, sowie Negativ- (-/-) und Positiv-Kontrolle (+/+) zu je zwei Experimenten. ...................................... 54 Abbildung 30: Vergleich der Morphologie von HT-1080 Zellen in einem Hydrogel der Firma Qgel und einem Collagen I Gel. ............................................................................................... 56 Abbildung 31: HT-1080 Zellen in einer 2,5mg/ml Maleimid-BSA Matrix der Firma Cellendes. ................................................................................................................................. 57 Abbildung 32: Bilderreihe von Phasenkontrastaufnahmen zur Darstellung der morphologischen Anpassung der Zelle während der Migration durch eine Gelmatrix. .......... 61 Abbildung 33: Bewegungsmuster von HL-60 Zellen in einem Collagen I Gel mit 1,0mg/ml als Reaktion auf einen Stimulus mit 10nM fMLP. ................................................................... 61 Abbildung 34: Verlagerung der Position des Massenschwerpunkts in x und in y Richtung in Abhängigkeit der Zeit. ............................................................................................................. 62 Abbildung 35: HT-1080-Zelle mit LifeAct-tag RFP. ............................................................. 63 Abbildung 36: Vergleich zwischen Phasenkonstrast und Fluoreszenzaufnahme von HT-1080 mit Life Act-tag RFP in einer Collagenmatrix. ........................................................................ 64 Abbildung 37: Fluoreszenzaufnahme einer HL-60 Zelle mit LifeAct-tag GFP2 während einer ungerichteten Bewegung. ......................................................................................................... 64 Abbildung 38: Schematische Darstellung der erwarteten Konzentrationsverläufe. ............... 65 Abbildung 39: Schematischer Vergleich von FMI, p-Value (Rayleigh Test), Verschiebung des Massenschwerpunkts und Geschwindigkeit der Zellen in 2-dimensionalen und 3- dimensionalen Chemotaxisexperimenten. ................................................................................ 67 7.Abbildungsverzeichnis: 76

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