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Jürschick, Johannes –

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes Anhang C: Pipettierschema der Cellendes 3D-Matrix in Abhängigkeit der Zusatzpeptidkonzentration. [Cellendes, Hydrogel Userguide, v3.0, 2011] Anhang D: Pipettierschemata für unterschiedliche Medien aus dem Standardprotokoll zum Erstellen von Gelmatrizes unterschiedlicher Dichte aus Collagen bovine. [Ibidi GmbH, Application Note 26, 2011] 10. Anhang 81

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes Anhang E: Standardprotokoll zur Vorbereitung von Chemotaxis Experimenten im µ-Slide Chemotaxis 3D. [Ibidi GmbH, Application Note 17, 2011] Standardprotokoll zum Befüllen des µ-Slide Chemotaxis 3D: - Slides und Medium sollten zur Gas Equillibrierung am Vortag schon in den Brutschrank mit einer Atmosphäre von etwa 37 °C und 5% CO2 gestellt werden. Verschlossene Gefäße sollten dazu leicht geöffnet werden. - Zuerst wird die Gelmatrix in den Slide gefüllt (vgl. Anhang D). Dazu werden die Einfüllstutzen C,D,E und F jeweils mit den mitgelieferten Stöpsel verschlossen - Anschließend werden 6µl der Gelsuspension auf Reservoir A des Kanals pipettiert - Die Pipettenspitze muss dann so auf Reservoir B gesetzt werden, dass eine schlüssige Verbindung besteht. Von dort werden 6 µl Volumen abgesaugt, so dass sich der ganze Kanal mit Flüssigkeit füllt. - Nach Einfüllen des Gels werden die Stöpsel aus den Stutzen C-E entfernt und die Reservoirs A und B verschlossen - Die Polymerisation des Gels im System erfolgt druckentlastet ohne Stöpsel auf den seitlichen Reservoirs. Um die Verdunstung von Flüssigkeit zu vermeiden müssen die Slides während dieser Zeit in eine feuchte Umgebung, wie zum Beispiel eine Petrischale mit angefeuchteten Tüchern gelegt werden. - Nach der matrixabhängigen Polymerisationszeit werden die seitlichen Reservoirs mit Chemoattraktant – Lösung befüllt. Dabei wird je nach Bedarf zwischen zwei Vorgehensweisen unterschieden: 10. Anhang 82

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