Protokoll 1 (Wallner)

Modul Immunologie Januar 2013
180 µl Tyrode´s Buffer in ein Epi vorlegen und 20 µl der 0,5 mg/ml Lösung
Extrakt zugeben.
1:5 Verdünnung
50 µl/mg *x = 200 µl * 10 µg/ml
x= 40 µl
160 µl Tyrode´s Buffer in ein Epi und 40 µl der 50 µg/ml Verdünnung zugeben.
Endvolumen 200 µl, Verdünnung 10 µg/ml.
17. Vorbereitung für die Zellaktivierung, Verdünnungsreihen:
Die Verdünnungsreihe wird zuerst in 1,5 ml Eppi´s vorbereitet und erst anschließend
auf die Platte übertragen!
Bet v 1 Verdünnungsreihe:
Vorlegen von 180 µl Tyrode´s Buffer in Eppi 2-7
Eppi 1 entspricht der hergestellten Verdünnung zu 1 µg/ml bet v 1.
Überführung von 20µl aus Eppi 1 in Eppi 2, resupsendieren.
Eppi 2-7: Überführen von Eppi (n-1) in Eppi 1 und resuspendieren.
Extrakt Verdünnungsreihe:
Vorlegen von 180 µl Tyrode´s Buffer in Eppi 2-7
Eppi 1 entspricht der hergestellten Verdünnung zu 10 µg/ml Extrakt.
Überführung von 20µl aus Eppi 1 in Eppi 2, resupsendieren.
Eppi 2-7: Überführen von Eppi (n-1) in Eppi 1 und resuspendieren.
18. Waschschritt nach der passiven Sensibilisierung:
Vorsichtiges ableeren des Überstandes, Zellen können durch klopfen ihre Interaktion
mit dem Plastik verlieren.
Zweimaliges Waschen mit 200 µl Tyrode´s Buffer pro Well.
19. Auftragen der Verdünnungsreihen:
Auftragung von 100 µl Tyrode´s Buffer in B 9, C 9, D2-9
Abb.8: Auftragungsschema für den Tyrode´s Buffer
Universität Salzburg 11 / 13