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Material und Methoden 56

2.2.3.3 Verdrängbarkeit der Bindung von Kininen am B 2 Rezeptor

Neben der Sättigbarkeit der Bindung von Kininen am B 2 Rezeptor sollte gezeigt werden,

dass sich Bradykinin durch die Verwendung von spezifischen Antagonisten bzw.

Agonisten wieder aus der Bindung verdrängen lässt. Eingesetzt wurde einmal der selektive

B 2 Rezeptor Antagonist HOE 140 sowie der B 1 spezifische Agonist [desArg 10 ]-

HOE 140, der in hohen Konzentrationen auch eine gewisse Affinität zum B 2 Rezeptor

aufweist. Von beiden Substanzen sollte die Konzentration bestimmt werden, mit der

50% des maximal gebundenen Bradykinins aus der Bindung verdrängt werden kann

(IC 50 ). Prinzipiell unterschied sich das experimentelle Vorgehen nicht von dem Sättigungsversuch,

allerdings befand sich hier eine feste Konzentration an [ 3 H] Bradykinin

im Bindungsansatz, während die Menge der verwendeten Agonisten bzw. Antagonisten

variiert wurde. Die eingesetzten Konzentrationen sind der Tabelle 9 zu entnehmen.Für

die Extrapolation der Kurve aus den Messdaten wurde hier die Software Graph Pad

Prism eingesetzt.

Tabelle 9: Konzentrationen der verwendeten Agonisten / Antagonisten

Agonist / Antagonist

eingesetzte Konzentrationen

HOE 140 0,1nM 0,75nM 5nM 25nM 0,1µΜ 1µΜ

[desArg 10 ] HOE140 1nM 0,1 µΜ 10 µΜ -- -- --

2.2.4 Statistik

Alle Versuche wurden mindestens 3-5mal wiederholt. Dabei konnten jeweils vergleichbare

Ergebnisse erzielt werden. Wenn nicht anders angegeben, ist jeweils ein

repräsentatives Experiment dargestellt. Für die statistische Auswertung der Versuche

zur cAMP-, cGMP- und IP 3 - Produktion (s.2.2.2.1 cAMP, 2.2.2.2. cGMP und 2.2.2.3.

D-myo-Inositol 1,4,5 – Trisphosphat (IP 3 )) wurde ein zweiseitiger Student´s t - Test

durchgeführt. Die Symbole (*) bzw. (**) zeigen dabei ein Signifikanzniveau von

p

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