Dokument 1.pdf - Gießener Elektronische Bibliothek - Justus-Liebig ...

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Inhaltsverzeichnis

2.2.2 Untersuchungen zur Signaltransduktion des B 2 Rezeptors __________ 37

2.2.2.1 cAMP ________________________________________________ 37

2.2.2.1.1 Bestimmung der Proteinkonzentration ____________________ 40

2.2.2.2 cGMP ________________________________________________ 40

2.2.2.3 D-myo-Inositol 1,4,5 – Trisphosphat (IP 3 ) ____________________ 41

2.2.2.4 Western Blot - Untersuchungen zum Nachweis Bradykinin induzierter

Proteinphosphorylierungen ________________________________ 44

2.2.2.4.1 Gewinnung der Proben ________________________________ 44

2.2.2.4.2 Polyacrylamid – Gelelektrophorese (PAGE) _______________ 45

2.2.2.4.3 Färbung der Gele mit Coomassie Blau ____________________ 48

2.2.2.4.4 Übertragung der Proteine auf eine Nitrocellulosemembran

(Western Blot) _______________________________________ 48

2.2.2.4.5 Färbung der Membran mit Direktblau 71 __________________ 49

2.2.2.4.6 Immunologische Identifikation phosphorylierter Proteine _____ 50

2.2.3 Pharmakologische Charakterisierung des B 2 Rezeptors in

Peritubulärzellen __________________________________________ 53

2.2.3.1 Vorversuche zur Pharmakologie ____________________________ 53

2.2.3.2 Sättigbarkeit der Bindung von Kininen am B 2 Rezeptor _________ 55

2.2.3.3 Verdrängbarkeit der Bindung von Kininen am B 2 Rezeptor_______ 56

2.2.4 Statistik _________________________________________________ 56

3 Ergebnisse_______________________________________________________ 57

3.1 Zellkultur ___________________________________________________ 57

3.1.1 Reinheitskontrolle durch Immuncytochemie zum Nachweis von α -

smooth muscle Isoactin _____________________________________ 59

3.2 Signaltransduktion des B 2 Rezeptors in Peritubulärzellen ___________ 61

3.2.1 cAMP __________________________________________________ 61

3.2.2 cGMP __________________________________________________ 63

3.2.3 Inositoltriphosphat (IP 3 ) ____________________________________ 65

3.2.4 Western Blot - Untersuchungen zum Nachweis Bradykinin induzierter

Proteinphosphorylierungen __________________________________ 67

3.2.4.1 Färbung der Gele mit Coomassie Blau _______________________ 67

3.2.4.2 Färbung der Membran mit Direkt Blau 71 ____________________ 68

3.2.4.3 Immunologische Identifikation phosphorylierter Proteine auf der

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