Tierärztliche Hochschule Hannover Einfluss unterschiedlicher ...

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Inhalt

3.2.1 Herkunft der Ovarien . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35

3.2.2 Vorbereitung und Selektion der Kumulus-Oozyten-Komplexe . . . . . 35

3.2.3 In-vitro-Maturation (IVM) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37

3.2.4 Progesteronbestimmung im Reifungsmedium und Einteilung der Versuchsgruppen

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37

3.2.5 Reifungskontrolle . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38

3.2.6 In-vitro-Fertilisation (IVF) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38

3.2.7 In-vitro-Kultur (IVC) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39

3.2.8 Beurteilung der Embryonen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39

3.2.9 Archivierung von gereiften Oozyten für die mRNA-Analyse . . . . . . 39

3.3 mRNA-Analyse der Oozyten zur Darstellung qualitätsanzeigender Gentranskripte 40

3.3.1 Aufbereitung der Proben zur Isolierung der mRNA . . . . . . . . . . . 40

3.3.2 Reverse Transkription (RT) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40

3.3.3 Quantitative Polymerase Kettenreaktion (qPCR) . . . . . . . . . . . . 41

3.4 Auswertung der Daten und statistische Analyse . . . . . . . . . . . . . . . . . 42

4 Ergebnisse 45

4.1 OPU . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45

4.1.1 Zyklusverhalten und Gelbkörpereigenschaften . . . . . . . . . . . . . 47

4.1.2 Follikelpunktion, Eizellausbeute und Oozytenqualität . . . . . . . . . . 48

4.2 Progesteronsupplementation während der In-vitro-Maturation . . . . . . . . . . 50

4.2.1 Progesteronanalyse im Medium . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50

4.2.2 In-vitro-Produktion nach Progesteronzusatz im Reifungsmedium . . . . 51

4.3 mRNA-Expression verschiedener Gene . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53

4.3.1 mRNA-Expression in OPU-KOK verschiedener Zyklusphasen . . . . . 53

4.3.2 mRNA-Expression in gereiften Oozyten nach IVM mit P4-Zusatz . . . 54

5 Diskussion 57

5.1 Zyklusverhalten während der OPU-Versuchsphase . . . . . . . . . . . . . . . . 57

5.1.1 Zwischenbrunsten und Bildung gelbkörperähnlicher Strukturen . . . . 57

5.1.2 Eigenschaften der gelbkörperähnlichen Gebilde . . . . . . . . . . . . . 59

5.2 Follikeleigenschaften, Eizellausbeute und Oozytenqualität . . . . . . . . . . . 61

5.3 MessengerRNA-Häufigkeiten in den OPU-Oozyten . . . . . . . . . . . . . . . 62

5.4 Progesteronsupplementation während der Eizellreifung . . . . . . . . . . . . . 64

5.4.1 Einfluss der Progesteronsupplementation auf die Genexpression . . . . 65

5.5 Einfluss des Progesterons auf die Eizellqualität in vivo und in vitro . . . . . . . 67

5.6 Schlussfolgerungen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67

5.7 Kritische Würdigung der Arbeit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67

6 Zusammenfassung 69

VI

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