Laborkurs Zytologie
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<strong>Laborkurs</strong> 6. FS<br />
<strong>Zytologie</strong><br />
Punktate,<br />
Bronchoalveoläre Lavage<br />
TÄ Julia Breuer<br />
Medizinische Tierklinik
Untersuchungsmedien<br />
• Abstriche: Haut,<br />
Maulhöhle, Auge<br />
• Oesophagus, Magen,<br />
Darm<br />
• Harnblase<br />
• Knochenmark<br />
• Blut<br />
• Harn<br />
• Liquor cerebrospinalis<br />
• Bauchhöhlenpunktat<br />
• Pleurapunktat<br />
• TTL: Trans-Tracheale<br />
Lavage<br />
• BAL: Broncho-<br />
Alveoläre Lavage
Aufarbeitung der Proben<br />
• Ausstrich (direkt / nach Zentrifugation)<br />
oder Zytozentrifugation<br />
• Trocknung<br />
– Lufttrocknung<br />
– Hitzefixation<br />
– Fixierspray<br />
• Färbung<br />
– Pappenheim, Quick-Diff<br />
– Gramfärbung<br />
– …..
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zellzahl<br />
• Zelltyp<br />
• Zellgröße und –form<br />
• Einheitlichkeit<br />
• Zelluläre Variationen<br />
• Nukleäre Variationen<br />
• Nukleus/Zytoplasma-Verhältnis<br />
• Verteilung (einzeln / in Haufen)
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zellzahl<br />
mgr.<br />
hgr.<br />
ggr.
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zelltyp<br />
Becherzellen
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zelltyp<br />
Neutrophile Granulozyten
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zelltyp<br />
Eosinophiler Granulozyt
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zelltyp<br />
Mitose, Makrophagen, Lymphozyten,<br />
rötliche Zellkerne mit Plasma
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zelltyp<br />
Flimmerepithelzellen
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zelltyp<br />
Mehrkernige Riesenzelle
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Zelltyp<br />
Schaumiger Makrophage
Beurteilungskriterien Zelle<br />
• Nukleäre Variationen<br />
Mitose
Beurteilungskriterien Zytoplasma<br />
• Volumen<br />
• Form<br />
• Struktur<br />
• Färbung<br />
• Organellen<br />
• Einschlüsse<br />
• Zellmembran<br />
• Funktionelle<br />
Anpassung
Beurteilungskriterien Zytoplasma<br />
• Einschlüsse
Beurteilungskriterien Zytoplasma<br />
• Einschlüsse
Beurteilungskriterien Zytoplasma<br />
• Einschlüsse<br />
Hämosiderophage
Beurteilungskriterien Nukleus<br />
• Zahl<br />
• Größe<br />
• Form<br />
• Lage<br />
• Membran<br />
• Einschlüsse<br />
• Kernplasma,<br />
Chromatin<br />
• Färbung<br />
• Nucleoli
Beurteilungskriterien Nukleus<br />
• Zahl
Beurteilungskriterien Nukleus<br />
• Zahl, Form,<br />
Größe, Lage
Weitere Beurteilungskriterien<br />
• Fibrin<br />
• Blut<br />
• Schleim<br />
• Exsudat /<br />
Transsudat<br />
• Bakterien<br />
• Pilze<br />
• Schmutz<br />
• Detritus<br />
• Nekrose
Weitere Beurteilungskriterien<br />
• Bakterien
Weitere Beurteilungskriterien<br />
• Schleim / Curschmann-Spiralen
Weitere Beurteilungskriterien<br />
• Pilze
Liquor cerebrospinalis
Liquor cerebrospinalis<br />
• Zentralnervöse Erkrankungen<br />
– Viral<br />
– Bakteriell<br />
– Parasitär<br />
– Traumatisch<br />
– Raumgreifende Prozesse<br />
– Gehirnferne Prozesse
Liquorgewinnung (Pferd)<br />
• Postoccipitalpunktion im Foramen<br />
atlantooccipitale<br />
6 – 8 – 10 cm tief<br />
• Lumbalpunktion auf dem Niveau des<br />
Foramen lumbosacrale, Ø ca. 2,5 cm,<br />
Nadellänge 15 – 20 cm
Liquorbeurteilung<br />
• Liquordruck<br />
• Farbe, Aussehen<br />
• Zellzahl<br />
• Zelldifferenzierung<br />
• Chemische Untersuchung
Liquorbeurteilung: Farbe<br />
• Physiologisch: klar, farblos<br />
• Rotfärbung, die nach Zentrifugation nicht mehr<br />
besteht: iatrogen oder sehr geringe Blutung<br />
• Gelbfärbung = Xanthochromie<br />
– Freies Bilirubin 48 h nach einer Blutung in den LCS<br />
– Konjugiertes Bilirubin kann die Blut-Hirn-Schranke<br />
überwinden (starker Ikterus)<br />
– Proteinkonzentration > 1,0 g/l
LCS: Zellzahlbestimmung<br />
• im Zellcounter: Leukozyten / µ l<br />
≤ 7 = Referenzwert<br />
• Fuchs-Rosenthal-Zählkammer
LCS: Zellzahlbestimmung<br />
• Fuchs-Rosenthal-Zählkammer<br />
wird mit 3 µl beschickt<br />
≤ 20/3 Zellen = Referenzwert<br />
mononukleäre Zellen ↑ => Virusinfektion<br />
polymorphkernige Zellen ↑ => bakterielle Infektion<br />
x/3 Zellen = x Zellen in 3 µl Kammerinhalt<br />
→ 3/3 Zellen = 1 Zelle / µl
LCS: Zelldifferenzierung<br />
• Zytozentrifuge<br />
• Färbung nach Pappenheim<br />
• Zellbild:<br />
gesund: v.a. Lymphozyten und Monozyten
LCS: Zelldifferenzierung<br />
• Bakterielle Prozesse: Anstieg der<br />
Neutrophilen und des Totalproteins<br />
• Virale Infekte: Anstieg der Lymphozyten<br />
und des Totalproteins
LCS: Chemische Untersuchung<br />
• Protein: ↑ bei Veränderung der Blut-Hirn-<br />
Schranke, ↑ lokale Synthese<br />
• Protein und Zellzahl ↑: Entzündung /<br />
(Blutung)<br />
• Protein ↑, Zellzahl nicht: degenerative<br />
Erkrankung, Virus
LCS: Chemische Untersuchung<br />
• Albumin: wird nicht lokal produziert<br />
→ Hinweis auf Durchlässigkeit der BHS<br />
• Bei intakter BHS entsprechend der<br />
Albuminkonzentration im Blut<br />
• Albumin-Quotient (AQ):<br />
Albumin (LCS) mg/l x 10 -3<br />
Albumin (Serum) g/l<br />
• Erhöht, wenn > 6,15
LCS: Chemische Untersuchung<br />
• Glukose - Konzentration im LCS:<br />
60 – 80 % der Blut-Glukose-Konzentration<br />
ist physiologisch<br />
• Verhältnis ist vermindert bei bakteriellen<br />
Infektionen des LCS und evtl. bei<br />
Blutungen<br />
• Normal bei hypo- und hyperglykämischen<br />
Zuständen
LCS: Chemische Untersuchung<br />
Enzyme (AST, LDH, CK) können bei<br />
verschiedenen Erkrankungen erhöht sein<br />
• ↑ Durchlässigkeit der BHS<br />
• Freisetzung durch Entzündungszellen,<br />
neoplastische Zellen, oder<br />
Mikroorganismen<br />
• CK: verschiedene Isoenzyme beachten<br />
(BB, MB, MM)<br />
• CK ↑ infolge Zytolyse der Neuronen
Bauchhöhlenpunktion
Bauchhöhlenpunktion
Bauchhöhlenpunktion
Bauchhöhlenpunktion
Bauchhöhlenflüssigkeit:<br />
Normalbefund<br />
• Farblos bis gelblich<br />
• Klar<br />
• Wässrig<br />
• < 5 G Zellen /l<br />
• Vorwiegend Neutrophile (bis 90 %)<br />
• Mesothelzellen, Lymphozyten<br />
• Wenig Eosinophile (bis 2%)<br />
• Gesamteiweiß < 25 g/l
Mesothelzellen
Tumorzellen
Bauchhöhlenflüssigkeit<br />
• Trübung bei erhöhter Zellzahl<br />
• Protein ↑ bei Entzündung oder<br />
exsudativen Prozessen (Herzinsuffizienz)<br />
• Bilirubin, Kreatinin, Harnstoff, Triglyceride:<br />
höhere Konzentration als im Serum =<br />
Zeichen für erhöhte Durchlässigkeit von<br />
Gallenblase /-gängen, Harnblase, Ductus<br />
thoracicus, Lymphbahnen; Pankreas<br />
(Amylase)
Bauchhöhlenflüssigkeit<br />
• Transsudat<br />
• Exsudat<br />
• Hämorrhagisch<br />
• Hämolytisch
Bauchhöhlenflüssigkeit<br />
Transsudat:<br />
• Klar, farblos<br />
• Protein < 25 g/l<br />
• Zellzahl < 5 G / l
Bauchhöhlenflüssigkeit<br />
Transsudat – Ursachen:<br />
• Hypoproteinämie (↓ kolloidosmotischer<br />
Druck)<br />
• Herzinsuffizienz (↑ hydrostatischer Druck<br />
führt zu Rückstau in der Leber)<br />
• Chronische Lebererkrankungen
Bauchhöhlenflüssigkeit<br />
Exsudat:<br />
• Folge erhöhter vaskulärer Permeabilität<br />
bei Entzündung<br />
• Protein > 25 g/l<br />
• Zellzahl: > 5 G / l
Bauchhöhlenflüssigkeit<br />
Exsudat – Ursachen:<br />
Aseptisch:<br />
• nichtmikrobielle Irritation, z.B. durch sterile<br />
Fremdkörper<br />
• Postoperativ (Trauma durch Manipulation der<br />
Organe)<br />
Septisch:<br />
• Mikroorganismen<br />
• z.B. bei FIP
BAL<br />
Bronchoalveoläre Lavage
BAL<br />
Normalbefund:<br />
• Je > 40 % Lymphozyten und<br />
Makrophagen<br />
• 2 – 9 % Neutrophile<br />
• 0 – 1 % Eosinophile<br />
• Rötliche Zellkerne mit / ohne Plasma
BAL<br />
• RAO (Recurrent airway obstruction):<br />
Anteil der neutrophilen Granulozyten ist<br />
erhöht auf bis zu 90 %<br />
• Anteil der Lymphozyten und Makrophagen<br />
sinkt entsprechend<br />
• Pilzsporen, Curschmann-Spiralen,<br />
Schmutzpartikel
BAL<br />
• Eosinophile, Mastzellen: Allergosen<br />
(Parasitenbefall)<br />
• Makrophagen: Alveolarmakrophagen;<br />
vermindert bei Entzündungen<br />
• Riesenzellen: Zeichen für gesteigerte<br />
Phagozytose<br />
• Epithelzellen: bei akuter Bronchitis bzw.<br />
Exazerbation bei chron. Bronchitis
BAL<br />
• Creola-Körperchen:<br />
Flimmerepithelzellverbände mit oder ohne<br />
Zilien, Störung der Regeneration; ↑ bei<br />
akuter Bronchitis<br />
• Becherzellen: Zeichen für Zellmetaplasie<br />
Vorkommen entsprechend Dyskrinie<br />
• Curschmann Spiralen: Zeichen für<br />
zeitweilige Verstopfung; small airway<br />
disease
Einen schönen Nachmittag!