Einfriermedium für Eileiterzellen, DMEM DMEM 1,34g FKS 10% DMSO 10ml Glukoselösung(20%ig) 0,5 ml Penicillin/Streptomycin 1,0ml <strong>auf</strong> 100ml Ampuwa, in 5 ml Portionen steril filtriert, bei -20°C <strong>auf</strong>bewahrt Embryokulturmedium, NCSU23, pH 7,4, 285mOsmol a) Basislösung NaCl 3,3525g* KCl 0,178g* CaCl2 0,0945g* KH2PO4 0,081g* MgSO4x7H2O 0,147g* NaHCO3 1,053g* Phenolrot 1% Diese Komponenten <strong>auf</strong> 500 ml Ampuva steril filtriert in 100 ml Portionen für 4 Wochen bei 5°C <strong>auf</strong>bewahrt b)Basislösung mit Zusätzen D-Glucose 0,03g Glutamin 0,0044g Taurin 0,026g Hypotaurin 0,016g <strong>In</strong>sulin 5µg/ml Transferrin 5µg/ml Na-Selenit 5ng/ml Kanamycin 2,1µg BSA 0,4% FCS 10% <strong>auf</strong> 30 ml Basislösung, steril filtriert mit und ohne <strong>Feederlayer</strong> nur frisch verwendet. 158
Reagenzien, Verbrauchsmaterial und Geräte Reagenzien TCM 199, Sigma, Deisenhofen, # M 5017 NaCl Sigma, Deisenhofen, # S 5886, Embryo tested KCl , Sigma, Deisenhofen, # P 5405, Embryo tested CaCl2 x 2 H20 Sigma, Deisenhofen, # C 7902, Embryo tested MgCl2 x 6 H2O Sigma, Deisenhofen, # M 2393, Embryo tested MgSO4 x 7 H2O, Sigma, Deisenhofen, # M 2643, Embryo tested KH2PO4 x H2O, Sigma, Deisenhofen, # P 5655, Embryo tested NaH2PO4, Sigma, Deisenhofen, # S 5011, Embryo tested Na2HPO4, Sigma, Deisenhofen, # S 5136, Embryo tested NaHCO3; Sigma, Deisenhofen; # S 5761, Embryo tested HEPES; Sigma, Deisenhofen; # H 9136, Embryo tested <strong>In</strong>sulin-Transferrin-Na-selenit Sigma, Deisenhofen # I1884, Embryo tested Ca-Laktat Sigma, Deisenhofen, # L 4263 D-Glucose Sigma, Deisenhofen, # G 6152, Embryo tested Caffeine Sigma, Deisenhofen # 0750 Na-Pyruvat, Sigma, Deisenhofen, # 4562, Embryo tested Glutamin Sigma, Deisenhofen, # G 5763, Embryo tested Kanamycin, Sigma, Deisenhofen, # K 0129 Penicillin/Streptomycin Gibco, Eggenstein PMSG hCG Ovogest ® , <strong>In</strong>tervet, Tönisvorst <strong>In</strong>tergonan ® , <strong>In</strong>tervet, Tönisvorst BSA, Sigma, Deisenhofen, # A 3311, Embryo tested FKS Gibco, Eggenstein Taurin, Sigma, Deisenhofen, # T 7146 Hyoptaurin, Sigma, Deisenhofen <strong>In</strong>sulin/Transferrin/Na-Selenit Sigma, Deisenhofen, # I 1884 Ampuva Fresenius, Bad Homburg Phenolrot, Sigma, Deisenhofen, # P3532 FDA Sigma, Deisenhofen, # F-7378 Hoechst A 33342 Sigma, Deisenhofen, # H 6024 159
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Aus dem Institut für Tierzucht und
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Für meine Eltern, Henning und Lisa
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3.5. Proteinquellen _______________
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Übersicht der verwendeten Abkürzu
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1. Einleitung Die In-vitro-Fertilis
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2.1.1.1. Oogenese (Eizellbildung) O
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zytoplasmatische Oolemma nur berüh
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erfolgt. Als erste berichteten MATS
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1984; GLENCROSS et al., 1994; O´SH
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Zona pellucida. Oozyten im Medium o
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2.5. Spermatozoenreifung 2.5.1. Kap
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eobachtet, so daß diese Form der p
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(NAGAI et al.1984) Maturationszeite
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unabhänig, so daß geschlossen wer
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oder -β hat einen stimulierenden E
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2.7.1.1.2. Glucose und Phosphat FLO
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Follikelwachstums nicht nur hinsich
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1. Die Helferzellen produzieren mit
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2.9.1.2. Buffalo-Rat-Liver-Zellen a
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3.0. Material und Methoden 3.1.Tier
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3.2.2. Maturationsmedium 10ml TCM19
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verwendet. Das Medium enthielt die
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3.4.1. Klassifizierung der Kumulus
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wurde mittels ELISA auf den Inhibin
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fusselfreien Tuch getrocknet und bi
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Abb. 2: Mit Giemsa angefärbte Oozy
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In Versuch 3 mit vier Wiederholunge
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Abb 5: Prometaphase I. Die Chromoso
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3.9. Herstellung von Feederlayern 3
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wenn noch zusätzlich verschiedene
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3.11.2. Spermaaufbereitung Nach der
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3.14. Untersuchung von Maturation u
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Abb. 9: Mit FDA angefärbte Oozyte.
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Die Beurteilung der Erfolgsrate erf
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Tabelle 7: In-vitro Maturation und
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4. Ergebnisse 4.1. Reifung follikul
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Konzentrationen von 5 und 1% (Grupp
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Tabelle 10: Versuch 3: Verteilung d
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4.5. In-vitro-Befruchtung von Oozyt
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Tabelle 13: Versuch 3 und 5: Vergle
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Tabelle 14: Versuch 6: Einfluß von
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Tabelle 15: Versuch 7: Einfluß von
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Tabelle 17: Versuch 7: Einfluß von
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Tabelle 18: Versuch 8: Einfluß von
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Tabelle 20: Versuch 9: Vergleich de
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5.0.Diskussion Die In-vitro-Fertili
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Die Gewinnungsmethode für Oozyten
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Schweineoozyten durch eine sehr dun
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Kumulusexpansion muß gewährleiste
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östrischem Kuhserum fand eine redu
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parakrinen und autokrinen Faktoren
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In einer abschließenden Untersuchu
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6.0. Zusammenfassung In den vorlieg
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Versuchsgruppen ohne Antikörper ge
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7.0. Summary The present investigat
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division was determined (n = 109 -
- Seite 114 und 115: 8.0. Literaturverzeichnis ABE, S. N
- Seite 116 und 117: BALL, G. O., M. L. LEIBFRIED, R. W.
- Seite 118 und 119: BLUM-RECKOW, B., W. HOLTZ (1992) Tr
- Seite 120 und 121: CHEN, l., S. E. WERT, E. M. HENDRIX
- Seite 122 und 123: DIETRICH, E., M. HENNIES, J. K. VOG
- Seite 124 und 125: DZIUK, P. J. (1968): Effect of numb
- Seite 126 und 127: FINDLAY, J. K. (1993): An update on
- Seite 128 und 129: GARDNER, H. G., KAYE, P. L. (1991):
- Seite 130 und 131: HANCOCK, J. L. (1959): Polyspermie
- Seite 132 und 133: HUNTER, R. H. F. (1967): The effect
- Seite 134 und 135: KAYE, P. L. (1986): Metabolic aspec
- Seite 136 und 137: LIU, Z., R. H. FOOTE, X. YANG (1995
- Seite 138 und 139: MATTIOLI, M., G. GALEATI, B. BARBON
- Seite 140 und 141: MIZOGUCHI, H., W. R. DUKELOW (1981)
- Seite 142 und 143: NAGAI, T., T. TAKAHASHI, Y. SHIOYA,
- Seite 144 und 145: O´SHEA, T., M. A. HILLARD, S. T. A
- Seite 146 und 147: PINYOPUMMINTR, T., B. D. BAVISTER (
- Seite 148 und 149: REXROAD, C. E. (1989): Co - culture
- Seite 150 und 151: SCHULTZ, R. (1987): „Molecular as
- Seite 152 und 153: TAJIMA, Y., N. OKAMURA, Y. SUGITA (
- Seite 154 und 155: TSAFARI, A., C. P. CHANNING (1975):
- Seite 156 und 157: WASSARMAN, P. M., J. D. BLEIL, S. M
- Seite 158 und 159: WISEMAN, D. L.,HENDRICKS, D. M., EB
- Seite 160 und 161: ZHANG, L., E. G. BLAKEWOOD, R. S. D
- Seite 162 und 163: Oozytenmaturationsmedium*, TCM199**
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