In-vitro-Maturation porciner Oozyten auf Feederlayer ... - Dragon IVF
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<strong>In</strong>haltstverzeichnis<br />
Übersicht der verwendeten Abkürzungen _______________________________________ 1<br />
1. Einleitung ______________________________________________________________ 3<br />
2. Literaturübersicht ________________________________________________________ 4<br />
2.1. <strong>Oozyten</strong>twicklung in vivo und in <strong>vitro</strong> _________________________________________ 4<br />
2.1.1. Oogenese und Follikulogenese _____________________________________________________ 4<br />
2.1.1.1. Oogenese (Eizellbildung) _______________________________________________ 5<br />
2.1.1.2. Follikulogenese _________________________________________________________ 6<br />
2.1.2. Nukleus- und Zytoplasmareifung ___________________________________________________ 7<br />
2.1.2.1. <strong>In</strong>hibin als lokaler Regulator der Follikulogenese ______________________ 10<br />
2.2. <strong>Maturation</strong> in <strong>vitro</strong> ________________________________________________________ 11<br />
2.3. Mechanismen, die den meiotischen Block der <strong>Oozyten</strong> beenden ___________________ 13<br />
2.4. Gewinnung und Selektion der Kumulus-<strong>Oozyten</strong>-Komplexe _____________________ 14<br />
2.5. Spermatozoenreifung ______________________________________________________ 15<br />
2.5.1. Kapazitation mit anschließender Akrosomenreaktion ___________________________________ 15<br />
2.5.2. <strong>In</strong>-<strong>vitro</strong>- Kapazitation beim Schwein________________________________________________ 16<br />
2.6. Reifung, Befruchtung und Kultur <strong>porciner</strong> <strong>Oozyten</strong> in <strong>vitro</strong> _____________________ 17<br />
2.7. Anforderungen und Möglichkeiten der frühen Embryokultur ______________________________ 22<br />
2.7.1 1. Energetische Versorgung ______________________________________________ 24<br />
2.7.1.1.1. Aminosäuren ___________________________________________________________ 24<br />
2.7.1.1.2. Glucose und Phosphat ____________________________________________________ 25<br />
2.7.1.1.3. Serumalbumin __________________________________________________________ 25<br />
2.7.1.1.4. Wachstumsfaktoren ______________________________________________________ 26<br />
2.8. Proteinzusätze ____________________________________________________________ 26<br />
2.8.1. Follikelflüssigkeit ______________________________________________________________ 26<br />
2.9. Kultursysteme ____________________________________________________________ 28<br />
2.9.1. Kokultursysteme _______________________________________________________________ 28<br />
2.9.1.1. Eileiterfeederzellen als Kokultur ______________________________________ 29<br />
2.9.1.2. Buffalo-Rat-Liver-Zellen als <strong>Feederlayer</strong> ______________________________ 31<br />
2.10. Beurteilungsmöglichkeiten der Embryonenqualität ____________________________ 31<br />
2.10.1. Morphologische Beurteilung _____________________________________________________ 31<br />
2.10.2. Beurteilung durch Essisäure/Alkohol-Präparation ____________________________________ 31<br />
2.10.3. Fluoreszenzfärbung mit Hoechst A 33342 __________________________________________ 32<br />
2.10.4. Fluoreszenzfärbung mit FDA ____________________________________________________ 32<br />
3.0. Material und Methoden ____________________________________________________ 33<br />
3.1.Tiermaterial ______________________________________________________________ 33<br />
3.2. Medien __________________________________________________________________ 33<br />
3.2.1. Transport - und Waschmedium für Ovarien und <strong>Oozyten</strong> ________________________________ 33<br />
3.2.2. <strong>Maturation</strong>smedium_____________________________________________________________ 35<br />
3.2.3. Waschmedium für Spermatozoen __________________________________________________ 36<br />
3.2.4. Kapazitationsmedium ___________________________________________________________ 36<br />
3.2.5. Befruchtungsmedium ___________________________________________________________ 36<br />
3.2.6. Medien der frühen Embryokultur __________________________________________________ 36<br />
3.2.6.1. NCSU-23 ______________________________________________________________ 37<br />
3.3. Eigene Untersuchungen zur <strong>In</strong>-<strong>vitro</strong>-<strong>Maturation</strong> <strong>porciner</strong> <strong>Oozyten</strong> _______________ 37<br />
3.4. Gewinnung der <strong>Oozyten</strong> ___________________________________________________ 38<br />
3.4.1. Klassifizierung der Kumulus - <strong>Oozyten</strong> - Komplexe ____________________________________ 39