In-vitro-Maturation porciner Oozyten auf Feederlayer ... - Dragon IVF
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3.4.1. Klassifizierung der Kumulus - <strong>Oozyten</strong> - Komplexe<br />
Die Klassifizierung der Kumulus - <strong>Oozyten</strong> - Komplexe wurde in Anlehnung an<br />
LEIBFRIED und FIRST (1979) anhand der unterschiedlichen Anzahl von<br />
Kumuluszellschichten durchgeführt.<br />
Kategorie I: <strong>Oozyten</strong>, die von einem kompakten, nicht expandierten Kumulus<br />
oophorus mit drei oder mehr Zellschichten umgeben sind und ein<br />
gleichmäßig granuliertes Zytoplasma haben .<br />
Kategorie II: <strong>Oozyten</strong> mit einem kompakten nicht expandierten Kumulus<br />
oophorus von weniger als drei Zellschichten und teilweise<br />
ungleichmäßiger Granulation des Zytoplasmas.<br />
Kategorie III: <strong>Oozyten</strong>, die lediglich von der Corona radiata umgeben sind.<br />
Kategorie IV: <strong>Oozyten</strong> ohne anhaftende Zellschichten an der Zona pellucida.<br />
Für die Versuche wurden nur <strong>Oozyten</strong> der Kategorien I und II verwendet.<br />
3.5. Proteinquellen<br />
<strong>In</strong>nerhalb dieser Arbeit wurden die Effekte unterschiedlicher Proteinquellen in Form<br />
von Blutseren, Follikelflüssigkeit oder <strong>Feederlayer</strong>n allein und in Kombination <strong>auf</strong> die<br />
nukleare Reifung von Schweineoozyten und die Weiterentwicklung von befruchteten<br />
Schweineoozyten untersucht.<br />
3.5.1. Fetales Kälberserum (FKS)<br />
Das FKS-Serum (Gibco BRL, Eggenstein) wurde kommerziell in 500ml Portionen<br />
tiefgefroren bezogen. Das gefrorene Serum wurde nach Antauen der Kontaktfläche<br />
zwischen Glasflasche und Serum mit 60° warmen Wasser in einem 37°C warmen<br />
Wasserbad bis zur vollständigen Verflüssigung <strong>auf</strong>getaut (Biochrom NEWS, 1995) und<br />
unter der Reinraumwerkbank in kleine Glasfläschchen steril zu 5 und 10ml<br />
portioniert, mit Stopfen und Parafilm (GLW, Würzburg) luftdicht verschlossen und bei<br />
-20°C bis zum Gebrauch tiefgefroren.<br />
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