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II2.5 Vitrifikation von Oozyten 462.5.1 Vitrifikation boviner Oozyten 492.5.1.1 Oozytenqualität 492.5.1.2 Cumulus oophorus 512.5.1.3 Maturationsstadium der Oozyte 533 Material und Methoden 563.1 Material 563.1.1 Biologisches Material 563.2 Methoden 563.2.1 Entnahme der Eierstöcke 563.2.2 Gewinnung der Eizellen 563.2.3 Qualitätsbeurteilung der Eizellen 563.2.4 In-vitro-Maturation (IVM) der Oozyten 583.2.5 In-vitro-Fertilisation (IVF) 583.2.5.1 Aufbereitung des Spermas 583.2.5.2 Aufbereitung der Eizellen und Koinkubation 593.2.6 In-vitro-Kultivierung 593.2.7 Vitrifikationsversuche 603.2.7.1 Vorbereitung des Arbeitsplatzes 603.2.7.2 Kennzeichnung der Open pulled straws(OPS) 603.2.7.3 Herstellung der Medien 613.2.7.4 Aufbereitung der Kumulus-Eizell-Komplexe (KOK) 623.2.7.5 Aseptische Vitrifikation 623.2.7.6 OPS-Vitrifikation 633.2.7.7 Erwärmung 643.2.7.8 Titrationsausverdünnung 643.2.7.9 Ausverdünnung in 4 Schritten 653.2.8 Beurteilung der Vitalität und Entwicklungskompetenznach Vitrifikation 663.2.8.1 In vitro Kultivierung 663.2.8.2 Parthenogeneseversuch 663.2.8.3 Aktivierung 663.2.8.4 Morphologische Untersuchung 673.2.8.5 DNA-Färbung mit Hoechst 33342 673.3 Statistische Analyse 684 Ergebnisse 694.1 Hoechstfärbung 694.2 Versuche zur in vitro Entwicklung nach Vitrifikation 714.2.1 Versuche an immaturen Oozyten 71

III4.2.1.1 Morphologische Beurteilung immaturer Oozytennach Vitrifikation 734.2.2 Versuche zur Vitrifikation maturer Oozyten 744.2.2.1 Versuche zur aseptischen Vitrifikation 744.2.2.2 Versuche zur OPS-Vitrifikation 774.2.2.3 Morphologische Beurteilung maturer Oozytennach Vitrifikation 795 Diskussion 825.1 Aseptisches Verfahren 825.2 Kühlrate 855.3 Äquilibrierung 885.4 Dilutionsmethode 915.5 Reifestadium der Eizelle 935.6 Cumulus oophorus 945.7 Vitrifikationsmedium 956 Zusammenfassung 977 Summary 998 Literaturverzeichnis 100AnhangIIIReagenzien, Stocklösungen und MedienGeräte und Verbrauchsmaterial