Dot Blot 96

5.0 Montage der TransfereinheitÜberprüfen Sie vor jeder Anwendung ob alle von Ihnen verwendeten Bohrungenfrei passierbar sind. Überprüfen Sie dabei alle drei Elemente: Filterplatte, SilikonDichtungsmatte und Deckplatte.Bevor Sie eine Membran in die Dot Blot-Apparatur einsetzen, beachten Sie dieHerstellerangaben zur Vorbehandlung des von Ihnen verwendeten Filtermaterials.1. Schrauben Sie den Schlauchadaptor in das Gehäuse der Auffangwanne. Sie können dieVakuumpumpe entweder direkt oder über eine zwischengeschaltete Waschflasche an dieDot Blot-Apparatur anschließen.Eine Waschflasche ist bei Arbeiten mit radioaktiven Stoffen oder bei sehr salzhaltigenLösungen (z.B.: 10x SSC) zu empfehlen.2. Setzen Sie die Filterplatte in die Auffangwanne.3. Legen Sie entsprechend der Orientierung der Kontrollstifte die Gummimatte auf dieFilterplatte auf. Die 96 Bohrungen der Gummimatte müssen mit den 96 Bohrungen derFilterplatte genau übereinstimmen.Nicht benötigte Bohrungen können Sie durch passend zurechtgeschnittene Parafilm-Streifen verschließen, die Sie im gewünschten Bereich auf die Gummimatte legen.4. Setzen Sie auf die Gummimatte ein passend zurechtgeschnittenes und in Pufferlösungäquilibriertes Whatman 3MM-Filterpapier. Verwenden Sie als Pufferlösung dieWaschlösung, mit der Sie während des Blot-Vorganges waschen werden.5. Die entsprechend ihrem Probenbedarf vorgeschnittene und in Pufferlösung äquilibrierteMembran wird auf das Filterpapier gelegt. Wählen Sie die Größe der Membran so, daß dieKontrollstifte auf der Filterplatte ausgespart bleiben, da es ansonsten zu Brüchen in derMembran kommt.Entfernen Sie alle Luftblasen zwischen Membran, Filterpapier und Gummimatte,indem Sie mit einer Glaspipette o.ä. über die Membran rollen.6. Setzen Sie entsprechend der Orientierung der Kontrollstifte die Deckplatte mit demPufferreservoir auf die Filterplatte.7. Ziehen Sie zuerst zwei gegenüberliegende Schrauben an, dann die beiden anderenSchrauben.Ziehen Sie die Schrauben per Hand - ohne Einsatz von Hilfsmitteln - fest.8. Legen Sie Vakuum an die Transfereinheit an und ziehen Sie bei Bedarf die Schraubenerneut an. Überprüfen Sie ihr Vakuum indem Sie in einige (oder alle) BohrungenPufferlösung pipettieren und über die Membran filtrieren.6