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Bedeutung, Vorkommen und Nachweis von biogenen Aminen in ...

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<strong>Bedeutung</strong>, <strong>Vorkommen</strong> <strong>und</strong> <strong>Nachweis</strong> <strong>von</strong><br />

<strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> <strong>in</strong> Grassilagen – Auswirkungen<br />

auf Tierges<strong>und</strong>heit <strong>und</strong> Futteraufnahme<br />

W. Richardt <strong>und</strong> R. We<strong>in</strong><br />

30. November 2011, 12. Dummerstorfer Sem<strong>in</strong>ar Futter<br />

<strong>und</strong> Fütterung


Konserviererfolg/Gärnote<br />

Gärschlüssel (Gärnote 1-5)<br />

Bestimmung der Buttersäure,<br />

Essigsäure <strong>und</strong> pH<br />

Lagerstabilität unter<br />

Luftabschluss<br />

Beurteilung des Gärprozesses<br />

(Verluste)<br />

Anreicherung schädlicher<br />

Stoffwechselprodukte<br />

Konserviererfolg<br />

aerobe Stabilität (ASTA)<br />

Fähigkeit unter Lufte<strong>in</strong>fluss nicht<br />

warm zu werden<br />

gefährdet s<strong>in</strong>d:<br />

energiereiche Silagen<br />

hoher Gehalt an Hefen <strong>und</strong><br />

Bakterien<br />

schlechte Verdichtung<br />

zu spätes Schließen des Silos<br />

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Veränderung der Eiweißqualität<br />

Proteolyse <strong>und</strong> Desmolyse<br />

umfangreiche Umbau- <strong>und</strong> Abbauprozesse des Re<strong>in</strong>eiweißes<br />

Proteolyse : Abbau des Re<strong>in</strong>weißes durch pflanzeneigene <strong>und</strong><br />

bakterielle Proteasen<br />

Futterwert: Reduzierung des UDP <strong>und</strong> des nutzbaren<br />

Rohprote<strong>in</strong>s<br />

Abbau der Am<strong>in</strong>osäuren durch Clostridien:<br />

Decarboxylierung: Abspaltung e<strong>in</strong>er Carboxylgruppe (Am<strong>in</strong>osäure<br />

⇒Am<strong>in</strong> + CO 2)<br />

Desam<strong>in</strong>ierung: Abspaltung e<strong>in</strong>er NH 2-Gruppe<br />

(Am<strong>in</strong>osäure ⇒Buttersäure + NH 3)<br />

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<strong>in</strong> %<br />

80,0<br />

70,0<br />

60,0<br />

50,0<br />

40,0<br />

30,0<br />

20,0<br />

10,0<br />

0,0<br />

E<strong>in</strong>fluss der Silierung auf den UDP Gehalt<br />

(Richardt u. Ste<strong>in</strong>höfel, 2000, 2007)<br />

A B1 B2 B3 C UDP5<br />

Kleegras 27,6 4,2 37,8 24,1 6,3 32,7<br />

Kleegrassilage 63,1 3,0 20,7 6,1 7,0 18,3<br />

Parameter E<strong>in</strong>heit ohne Siliermittel mit Siliermittel Signifikanz<br />

n = 25 n = 25<br />

Fraktion A % des XP 52 (19,0) 50 (18,3) p


Veränderung der Eiweißqualität<br />

Proteolyse <strong>und</strong> Desmolyse<br />

umfangreiche Umbau- <strong>und</strong> Abbauprozesse des Re<strong>in</strong>eiweißes<br />

Proteolyse : Abbau des Re<strong>in</strong>weißes durch pflanzeneigene <strong>und</strong><br />

bakterielle Proteasen<br />

Futterwert: Reduzierung des UDP <strong>und</strong> des nutzbaren<br />

Rohprote<strong>in</strong>s<br />

Abbau der Am<strong>in</strong>osäuren durch (proteolytische) Clostridien:<br />

Decarboxylierung: Abspaltung e<strong>in</strong>er Carboxylgruppe (Am<strong>in</strong>osäure<br />

⇒Am<strong>in</strong> + CO 2)<br />

Desam<strong>in</strong>ierung: Abspaltung e<strong>in</strong>er NH 2-Gruppe<br />

(Am<strong>in</strong>osäure ⇒Buttersäure + NH 3)<br />

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Decarboxylierung<br />

Arg<strong>in</strong><strong>in</strong> ⇒Putresc<strong>in</strong> + CO 2<br />

Lys<strong>in</strong> ⇒Cadaver<strong>in</strong> + CO 2<br />

Methion<strong>in</strong> ⇒Spermid<strong>in</strong> + CO 2<br />

Histid<strong>in</strong> ⇒Histam<strong>in</strong> + CO 2<br />

Phenylalan<strong>in</strong> ⇒PEA + CO 2<br />

Tryptophan ⇒Tryptam<strong>in</strong> + CO 2<br />

Tyros<strong>in</strong> ⇒Tyram<strong>in</strong> + CO 2<br />

Glutam<strong>in</strong>säure ⇒γ Am<strong>in</strong>o-Buttersäure + CO 2<br />

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<strong>Bedeutung</strong> <strong>und</strong> Herkunft<br />

Proteolytische<br />

Gruppe<br />

Saccharolytische Gruppe<br />

C. butyricum<br />

Gruppe<br />

Substrat<br />

C. tyrobutyricum C. Perfr<strong>in</strong>gens<br />

Kohlenhydrate + + + +<br />

Prote<strong>in</strong>e + - - +<br />

Milchsäure (+ ) - + +<br />

Fermentationsprodukte<br />

Buttersäure + + + +<br />

Essigsäure + + + +<br />

Ethanol + - - +<br />

NH 3 + - - +<br />

Biogene Am<strong>in</strong>e + - - +<br />

Proteolytische Gruppe : C. sporogenes, C. sphenoides, C. bifermentans<br />

C. butyricum Gruppe : C. butyricum, C. beijer<strong>in</strong>ckii, C. acetobutyricum<br />

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<strong>Bedeutung</strong> <strong>und</strong> Herkunft<br />

Biogene Am<strong>in</strong>e haben wichtige Funktionen im Körper<br />

s<strong>in</strong>d pharmakologisch wirksame Substanzen<br />

Herkunft:<br />

im Körper/vom Tier selbst gebildet<br />

über Futter/Nahrung<br />

Fehlgärung im Pansen – Azidose – (Bildung <strong>und</strong> erhöhte<br />

Resorption)<br />

Adaption <strong>in</strong> Maßen möglich (Pansen, Van Os et al. 1997)<br />

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Histam<strong>in</strong>gehalt im Pansensaft (ng/ml)<br />

450<br />

400<br />

350<br />

300<br />

250<br />

200<br />

150<br />

100<br />

50<br />

0<br />

Auswirkungen e<strong>in</strong>er latent ungenügenden<br />

Strukturwirksamkeit / Azidosen<br />

Hofirek et al. (2001)<br />

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9<br />

St<strong>und</strong>en nach Fütterung<br />

Gr<strong>und</strong>ration + 2,5 kg Saccharose + 4,0 kg Weizen<br />

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<strong>Bedeutung</strong> <strong>und</strong> Herkunft<br />

Vasoaktive Wirkungen (Tyram<strong>in</strong>, Tryptam<strong>in</strong> <strong>und</strong> Phenylethylam<strong>in</strong>) ⇒<br />

Durchblutungsstörungen der fe<strong>in</strong>en Kapillaren ⇒<br />

Beteiligung an Klauenerkrankungen<br />

Schädigung der Schleimhäute<br />

Senkung der Futteraufnahme <strong>und</strong> Milchleistung (Phuntsok a. Froetschel<br />

1998, L<strong>in</strong>gaas et al. 1992, Van Os et al. 1995, Krizsan et al. 2007)<br />

26% ⇓ bei etwa 16 g BA ges/kg TS<br />

8% ⇓ ab etwa 100 g Putresc<strong>in</strong>/Tier <strong>und</strong> Tag ≈ ab 8-10 g/kg TS<br />

7% ⇓ bei 7,2 g BA ges/kg TS im Vgl. zu 1,2 g/kg TS<br />

3% ⇓ bei 4,8 g BA ges/kg TS<br />

Bee<strong>in</strong>trächtigung des Immunsystems (Histam<strong>in</strong>)<br />

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<strong>Bedeutung</strong> <strong>und</strong> Herkunft<br />

Silagen mit hohem pH-Wert, Ammoniak- <strong>und</strong> Buttersäuregehalt<br />

durch (proteolytische) Clostridien<br />

Silagen mit niedrigem pH-Wert <strong>und</strong> Buttersäuregehalt aber erhöhtem<br />

Ammoniak<br />

Enterobacterien <strong>und</strong> Milchsäurebakterien<br />

es fehlen aber Daten zur Variation der <strong>biogenen</strong> Am<strong>in</strong>e <strong>in</strong> Silagen<br />

Be<strong>in</strong>flussbarkeit durch Siliermittel (Hoedtke et al. 2011)<br />

ke<strong>in</strong>e Orientierungswerte<br />

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Entwicklung e<strong>in</strong>er GC-MS-MS Methode (R. We<strong>in</strong>, 2010)<br />

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Ergebnisse – Rohprote<strong>in</strong>fraktionen<br />

(Richardt W., We<strong>in</strong> R., Ste<strong>in</strong>höfel O. <strong>und</strong> Pries M., 2011)<br />

XP A B1 B2 B3 C BA Ges GABA<br />

g/kg TM % d. XP % d. XP % d. XP % d. XP % d. XP g/kg TM g/kg TM<br />

n 99 99 99 99 99 99 99 9<br />

Mittelwert 155 59,3 2,8 22,8 11,0 4,1 2,86 7,5<br />

SD 34 9,7 1,2 3,7 5,8 1,8 3,24 5,5<br />

M<strong>in</strong> 115 32,1 0,7 16,2 3,1 1,4 0,00 1,46<br />

Max 238 73,7 5,5 32,1 27,2 10,7 20,7 19,1<br />

Rohprote<strong>in</strong>fraktionen (A, B1, B2, B3, C) nach Licitra et al. (1996)<br />

BAges: Putresc<strong>in</strong>, Cadaver<strong>in</strong>, Histam<strong>in</strong>, PEA, Tryptam<strong>in</strong>, Tyram<strong>in</strong>; GABA: Gamma-Am<strong>in</strong>o-Buttersäure<br />

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Zusammenhang zwischen Gärnote <strong>und</strong> Gesamtgehalt<br />

an Biogenen <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> <strong>in</strong> Grassilagen (Richardt et al. 2011)<br />

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Korrelation zwischen Gehalt an Biogenen <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> [g/kg<br />

TM] <strong>und</strong> Rohnährstoffen (Richardt et al. 2011)<br />

TM XA XP TP UDP5 B2 B3 C<br />

g/kg TM g/kg TM g/kg TM % d. XP % d. XP % d. XP % d. XP % d. XP<br />

Anzahl 99 99 99 99 99 99 99 99<br />

BA Ges<br />

-0,64* 0,11 n.s.<br />

-0,03 n.s. 0,32* 0,37* 0,33* 0,20 n.s. 0,49*<br />

UDP 5 kalkuliert nach Kirchhof et al. (2006), Rohprote<strong>in</strong>fraktionen (TP, B2, B3, C) nach Licitra et al. (1996)<br />

BAGes [g/kg TM]: Putresc<strong>in</strong>, Cadaver<strong>in</strong>, Histam<strong>in</strong>, PEA, Tryptam<strong>in</strong>, Tyram<strong>in</strong><br />

* = signifikant (p


Zusammenhang zwischen Konserviererfolg <strong>und</strong><br />

Rohprote<strong>in</strong>fraktionen (Richardt u. Ste<strong>in</strong>höfel, 2007)<br />

Parameter E<strong>in</strong>heit Konserviererfolg<br />

Signifikanz<br />

1 <strong>und</strong> 2 4 <strong>und</strong> 5<br />

n 246 33<br />

A % des XP 52,4 (11) 47,3 (12) p < 0,01<br />

C % des XP 6,7 (2,8) 9,4 (3,3) p < 0,0001<br />

UDP5 % des XP 25,3 (10,1) 35,5 (13,0) p < 0,0001<br />

NH 3 % des Gesamt-N 6,8 (2,1) 16 (8,1) p


Korrelation zwischen Gehalt an Biogenen <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> <strong>und</strong><br />

Gärparametern (Richardt et al. 2011)<br />

MS ES BS Ethanol NH 3<br />

% d. TM % d. TM % d. TM % d. TM<br />

% des<br />

Gesamt-N<br />

1,2<br />

Propandiol<br />

% d. TM<br />

pH KE<br />

Anzahl 76 99 99 73 99 73 99 99<br />

BA Ges -0,02 n.s. 0,61* 0,80* 0,30* 0,67* 0,10 n.s. 0,41* 0,80*<br />

MS = Milchsäure, ES = Essigsäure, BS = Buttersäure, KE = Gärschlüssel DLG 2006<br />

BAGes [g/kg TM]: Putresc<strong>in</strong>, Cadaver<strong>in</strong>, Histam<strong>in</strong>, PEA, Tryptam<strong>in</strong>, Tyram<strong>in</strong><br />

* = signifikant (p


Beziehung zwischen Gehalt an Biogenen <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> <strong>und</strong><br />

Essigsäure (Richardt et al. 2011)<br />

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Schlussfolgerungen<br />

der Gehalt an <strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> <strong>in</strong> Grassilagen lag im Mittel bei 2,86<br />

g/kg TM (SD 3,24)<br />

der Gehalt an Buttersäure, Ammoniak <strong>und</strong> die Gärnote zeigen die<br />

höchste Korrelation (~0,8) zum Gehalt an <strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong><br />

bis 3% Essigsäure/kg TS ergeben sich ke<strong>in</strong>e erhöhten Gehalte an<br />

<strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong><br />

je schlechter die Gärnote, desto höher der Gehalt an <strong>biogenen</strong><br />

<strong>Am<strong>in</strong>en</strong>, aber mit hoher Standardabweichung<br />

der Anstieg des Gesamtgehaltes an <strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> wird durch<br />

den Anstieg aller biogener Am<strong>in</strong>e verursacht<br />

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Schlussfolgerungen<br />

Parameter der Rohprote<strong>in</strong>fraktionierung, <strong>in</strong>sbesondere das<br />

Re<strong>in</strong>eiweiß, s<strong>in</strong>d nicht geeignet die Anwesenheit <strong>von</strong> <strong>biogenen</strong><br />

<strong>Am<strong>in</strong>en</strong> anzuzeigen<br />

hohe NH 3- <strong>und</strong>/oder Buttersäuregehalte gute Indikatoren für biogene<br />

Am<strong>in</strong>e<br />

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5 g/kg TS<br />

Bewertung <strong>von</strong> <strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong><br />

H<strong>in</strong>weistext: Der Gehalt an <strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> ist nicht erhöht.<br />

5 - 15 g/kg TS<br />

H<strong>in</strong>weistext: Der Gehalt an <strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> ist erhöht <strong>und</strong> weist auf<br />

e<strong>in</strong>en Abbau <strong>von</strong> Am<strong>in</strong>osäuren h<strong>in</strong>. E<strong>in</strong>flüsse auf Futteraufnahme,<br />

Milchleistung <strong>und</strong> Tierges<strong>und</strong>heit s<strong>in</strong>d nicht auszuschließen.<br />

>15 g/kg TS<br />

H<strong>in</strong>weistext: Der Gehalt an <strong>biogenen</strong> <strong>Am<strong>in</strong>en</strong> ist stark erhöht <strong>und</strong> weist<br />

auf e<strong>in</strong>en deutlichen Abbau <strong>von</strong> Am<strong>in</strong>osäuren h<strong>in</strong>. Der Gehalt bee<strong>in</strong>flusst<br />

die Futteraufnahme, Milchleistung <strong>und</strong> Tierges<strong>und</strong>heit negativ. Die<br />

Silage sollte nicht mehr verfüttert werden.<br />

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