Untersuchung der Entwicklung der T-Zell-Rezeptor assoziierten ...

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Untersuchung der Entwicklung der T-Zell-Rezeptor assoziierten ...

Inhaltsverzeichnis

2.2.2 Proteinschemische Methoden………………………………………...28

2.2.2.1 Konjugation von antikörpern mit FITC………………………………28

2.2.2.2 Biotinylierung und Immunpräzipitation…………………………..…28

2.2.2.3 Natrium-Dodecylsulfat-Polyacrylamidgel-Elektrophorese

(SDS-PAGE)……………………………………………………………....29

2.2.2.4 Western (Immuno-) blot………………………………………………...30

2.2.3 Molekularbiologische Methoden……………………………………...30

2.2.3.1 Einzelzell RT-PCR nach Edwin ten Boekel………………………….30

2.2.3.2 Reverse Transkription zur Erzeugung von cDNA aus sortierten

Einzellzellen………………………………………………………………31

2.2.3.3 Polymerase Kettenreaktion (PCR) für sortierte Einzellzellen……32

2.2.3.4 Agarose-Gel-Elektrophorese……………………………………….….32

III Ergebnisse………………………………………..……………….33

3.1 Sortierung der Zellpopulationen……………………………..…….....33

3.1.1 Sortierung der einzel positiven CD4-Zellen (EP-CD4)…………….33

3.1.2 Sortierung der doppel negativen Populationen…...……………….33

3.2 Untersuchung der CD3-assoziierten Signalmoleküle…………..…35

3.2.1 CD4-Zellen (EP)………………………………..…………………………36

3.2.2 Unseparierte DN3-Zellen (DN3T)………………………………………38

3.2.3 Große DN3-Zellen (DN3L)……………………………………..…….….41

3.2.4 Kleine DN3-Zellen (DNE)……………………………………………..…45

3.2.5 DN2-Zellen……………………………………………………..…….…....52

3.3 Nachweis der Spezifität des Lck-Antikörpers………………….......56

3.4 Untersuchung der intrazellulären Expression von p56 Lck …….....57

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