Mikrobiologische Untersuchung von Produktionsanlagen - awenko.de
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MicroMol GmbHMicroMol LaboratorienBiotechnologisches Labor seit 1996Abteilungen Molekularbiologie, Zellbiologie, Mikrobiologie, BiochemieAkkreditiert nach ISO 17025, GMP-zugelassenAnalytikspezialitäten (z.B. PCR-Nachweisentwicklung, Phagen<strong>de</strong>tektion), Spezialanalytik nachKun<strong>de</strong>nvorgaben o<strong>de</strong>r für Kun<strong>de</strong>n entwickelt, Routineanalytik mit Nach<strong>de</strong>nken.Recherchen und GutachtenUND die Unterstützung bei <strong>de</strong>r Nutzung <strong>de</strong>r Ergebnisse im UnternehmenWir sind Partner unserer Kun<strong>de</strong>n und legen größten Wert auf <strong>de</strong>ren Erfolg.Wir schaffen messbaren Fortschritt!<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
IFS Version 65.3 Prozessvalidierung und –lenkung5.3.1 Die Kriterien für die Prozessvalidierung und -lenkung sind ein<strong>de</strong>utig <strong>de</strong>finiert.5.3.2 In Fällen, wo die Lenkung <strong>von</strong> Prozess- und Arbeitsplatzparametern (z. B.: Temperatur, Zeit,Druck, chemische Eigenschaften etc.) für die Produktanfor<strong>de</strong>rungen entschei<strong>de</strong>nd ist, wer<strong>de</strong>n diesekontinuierlich und / o<strong>de</strong>r in angemessenen Intervallen überwacht und aufgezeichnet.5.3.3 Alle Nacharbeiten (Rework) wer<strong>de</strong>n validiert, überwacht und dokumentiert. Diese Arbeitenbeeinträchtigen nicht die Produktanfor<strong>de</strong>rungen.5.3.4 Es existieren geeignete Verfahren für die unverzügliche Meldung, Registrierung undAufzeichnung <strong>von</strong> Störungen <strong>de</strong>r Ausrüstung und Prozessabweichungen.5.3.5 Die Prozessvalidierung wird auf Grundlage <strong>de</strong>r für die Produktsicherheitund Prozesse relevanten gesammelten Daten durchgeführt. Treten wesentlicheÄn<strong>de</strong>rungen auf, wird eine erneute Validierung vorgenommen.<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
VorgehensweiseReinigungsvalidierung1. Validierungsplan2. Anlage und Prozess beschreiben3. Risikoanalyse zur Ermittlung <strong>de</strong>r wichtigsten Verunreinigung4. Worst-case Szenario entwickeln5. Festlegung eines Reinigungsverfahrens (nach einfachen Vorversuchen)6. Evaluierung eines Testverfahrens und <strong>de</strong>r Probenahme (auch Monitoring)7. Festlegung <strong>von</strong> Zielwerten und Grenzwerten8. Dokumentation in einem Validation Protocol (möglichst exakt)9. Aufzeichnung <strong>de</strong>r Ergebnisse10. Erstellung eines Berichts11. Schlussfolgerung zur Leistungsfähigkeit und zum Monitoring<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
PrüfanschmutzungBelastungstest mittels Prüfanschmutzung als GrenzwerttestISO TS 15883-5 beschreibt eine Reihe <strong>von</strong> Prüfanschmutzungen in <strong>de</strong>n AnnexesA-SMit <strong>de</strong>r Prüfanschmutzung wird Verfahren zur Wie<strong>de</strong>rgewinnung undAnalysenmetho<strong>de</strong> angegebenBeispiel:Nachweis:mit Bakterien versetzter GriespuddingKultivierung Mikroorganismen<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013Reinigungsvalidierung
Probenahme/Inspektion1. Tupferproben nass-trocken (DIN10113-1 und –2)2. <strong>Mikrobiologische</strong>r Abklatsch3. UV-Licht Inspektion ohne/mit Anfärbung (bspw. Riboflavin nach VDMA)4. Direkte Färbung (Iodophore färben gelb)5. Visuelle Inspektion6. Biuret-Reaktion auf Protein7. NADH-Nachweis8. ATP-Nachweis9. TOC-Bestimmung10. Massenspektroskopische Fingerprints11. ELISA o<strong>de</strong>r Dip-Stick-Test auf Allergene12. Spezifische Nachweise (Spülmittelreste, pH...)13. <strong>Mikrobiologische</strong> Endproduktuntersuchung<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
AnalysenfehlerMetho<strong>de</strong>n-Fehler <strong>de</strong>r KoloniezahlbestimmungWägefehlerHomogenisierungsfehlerPlattenfehlerRezepturSchichtdickeTrockungsgradInokulationsvolumenBebrütungsbedingungenKeimsynergismen/-antagonismensubletale SchädigungLuftkeimeVerdünnungs-und PipettierfehlerVolumenabnahme bei AutoklavierenZahl <strong>de</strong>r VerdünnungsschritteKeimverschleppung MehrfachgebrauchWandadsorptionEntleerungstechnikAblesefehlerStichprobenfehler<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
VergleichbarkeitDIN 10113-3KeimzahlgruppeAus <strong>de</strong>r Dissertationsschrift<strong>von</strong> Michaela Trautsch UniMünchen 2003<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Vorgehensweise1. Validierungsplan2. Anlage und Prozess beschreiben3. Risikoanalyse zur Ermittlung <strong>de</strong>r wichtigsten Verunreinigung4. Worst-case Szenario entwickeln5. Festlegung eines Reinigungsverfahrens (nach einfachen Vorversuchen)6. Evaluierung eines Testverfahrens und <strong>de</strong>r Probenahme (auch Monitoring)7. Festlegung <strong>von</strong> Zielwerten und Grenzwerten8. Dokumentation in einem Validation Protocol (möglichst exakt)9. Aufzeichnung <strong>de</strong>r Ergebnisse10. Erstellung eines Berichts11. Schlussfolgerung zur Leistungsfähigkeit und zum Monitoring<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013Reinigungsvalidierung
ReinigungsvalidierungL1 Grenzwert für eine Verunreinigung in einem Fertigprodukt(Minimaldosis Verunreinigung / Maximaldosis Fertigprodukt) * Sicherheitsfaktor (NOAEL )L2 Grenzwert für die Verunreinigung pro Einheit OberflächeL1 * Chargengröße / Produktberühren<strong>de</strong> OberflächeL3 Grenzwert für die Verunreinigung in einer gezogenen ProbeL2 *Beprobte Fläche / ProbenvolumenMinimaldosis Verunreinigung * Sicherheitsfaktor * Chargengröße * Beprobte Fläche----------------------------------------------------------------------------------------------------- = ???Maximaldosis Fertigprodukt * Produktberühren<strong>de</strong> Oberfläche * ProbenvolumenÜbliche Grenze 10ppm (FDA)...bezogen auf die Verunreinigung <strong>de</strong>r Anlage durch das vorherige Produkt**LeBlanc D. A., 1998. Establishing Scientifically justified Acceptance Criteria for Cleaning validation of Finished Drug Products. PharmTechnol October 1 1998.<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Vorgehensweise1. Validierungsplan2. Anlage und Prozess beschreiben3. Risikoanalyse zur Ermittlung <strong>de</strong>r wichtigsten Verunreinigung4. Worst-case Szenario entwickeln5. Festlegung eines Reinigungsverfahrens (nach einfachen Vorversuchen)6. Evaluierung eines Testverfahrens und <strong>de</strong>r Probenahme (auch Monitoring)7. Festlegung <strong>von</strong> Zielwerten und Grenzwerten8. Dokumentation in einem Validation Protocol (möglichst exakt)9. Aufzeichnung <strong>de</strong>r Ergebnisse10. Erstellung eines Berichts11. Schlussfolgerung zur Leistungsfähigkeit und zum Monitoring<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Cleaning efficiencySchrubbsaugerComparison of Cleaning efficiencies - soil 2, MNE3 individual experiments comprising 4 tiles each per cleaning agent100,0%90,0%80,0%H2OecH2OTriton70,0%60,0%50,0%40,0%30,0%20,0%10,0%0,0%1 2 3 meanExperiment<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
MilkshakeFruchtstückchen?<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Anzahl ProbenAuswirkungOrganismen1 Mo<strong>de</strong>rat, mäßigeKrankheitsauswirkungen, kurze Dauer2 Heftig,beeinträchtigend,nichtlebensgefährlich3 Sehr heftig,lebensbedrohlich fürdie gesamteBevölkerung4 Sehr heftig füreingeschränktePersonengruppenStaphylococcus aureusVibrio parahaemolyticusBacillus cereusClostridium perfringensSalmonella (nicht typhi)Yersinia enterocoliticaShigella (nicht dysenteriae I)Listeria monocytogenesClostridium botulinumVibrio cholerae 01Salmonella typhiEnterohaemorrhagische E. coliCampylobacter jejuniEnteropathogene E. coliListeria monocytogenes<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Anzahl ProbenOrganismengruppeBedingungenenthaltenReduzierungBedingungenbleiben gleichBedingungenenthaltenSteigerung1 n = 5, c = 2 n = 5, c = 1 n = 10, c = 12 n = 5, c = 0 n = 10, c = 0 n = 20, c = 03 n = 15, c = 0 n = 30, c = 0 n = 60, c = 04 n = 15, c = 0 n = 30, c = 0 n = 60, c = 0<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Summary of reported temperature-<strong>de</strong>pen<strong>de</strong>nt kinetic data for inactivation of highthermal resistant spores-forming bacteria (data calculated and adapted from Horak,1980; Behringer & Kessler, 1991; Kessler, 1996; Huem et al., 1998; Walstra et al.,1999)Bacteria Medium Temp.Abhängigkeit <strong>de</strong>r SIP-Wirkung vom ProduktSingle strainsBacillus cereusBacillus licheniformisBacillus licheniformisBacillus licheniformisBacillus subtilisBacillus coagulansBacillus coagulansBacillus pumilusBac. stearothermophilus, sporeBac. stearothermophilus, sporeBac. stearothermophilus, sporeBac. sporothermodurans J16 BBac. sporothermodurans B93-20-12Bac. sporothermodurans MB921Clostridium sporogenesClostridium botulinumMilkSkim milkEvap. skim milk 40% DmCoffee cream (15 % fat)MilkSkim milkEvap. skim milk 40% DmMilkMilkEvap. skim milk 40% DmCoffee cream (15 % fat)Skim milkSkim milkSkim milkMilk (pH 7.0)Milk (pH 7.0)Stolperfalle refin °C121111111111111121118118120120120121121121121121D ref -valuein min0.040.480.840.460.51.581.851.44.12.64.252.683.472.031.70.21z ref -valuein K9.4-9.787.887.3110.78.529.329.77.547.897.7813.114.213.2-10<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Aseptische AbfüllungSterile Luft – jemals geprüft?<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Beachten!1. Risikoabschätzung ist essentiell2. Welcher Analyt ist sinnvoll? (Gesamtkeimzahl? Protein? ATP?)3. Was ist das Akzeptanzkriterium? (keine Allgemeingültigkeit!)Validierung ist mehr als nur visuelle Inspektion o<strong>de</strong>r ein paar TupferprobenDie Grenzen <strong>de</strong>s Verfahrens sollen erkannt wer<strong>de</strong>nWie sauber muss es sein?Welche Fehlerquellen gibt es?Welche Konsequenzen hat eine Abweichung vom planmäßigen Verfahren?Wie effizient ist das Verfahren?<strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
Team Karlsruhewww.micromol.com... es fehlen 7 Mitarbeiterwww.FPQS.<strong>de</strong><strong>Mikrobiologische</strong> <strong>Untersuchung</strong> <strong>von</strong> <strong>Produktionsanlagen</strong> © MicroMol GmbH 2013
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