Funktionelle Charakterisierung von Peroxisomen in murinen Oozyten

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Funktionelle Charakterisierung von Peroxisomen in murinen Oozyten

Inhaltsverzeichnis - VI -

3.5.8 Elektronenmikroskopie ........................................................... 33

3.5.9 Bildbearbeitung ...................................................................... 34

3.6 Isolierung von Oozyten ................................................................... 35

3.6.1 Präparation der Ovarien ......................................................... 35

3.6.2 Zerkleinerung und Separation des Gewebes ......................... 35

3.6.3 Picken der Oozyten ................................................................ 36

3.6.4 Zwischenlagerung .................................................................. 38

3.7 Molekularbiologische Methoden .................................................... 38

3.7.1 RNA-Präparation .................................................................... 38

3.7.2 cDNA-Synthese ..................................................................... 38

3.7.3 Polymerasekettenreaktion (PCR) ........................................... 40

3.7.3.1 Durchführung .............................................................. 41

3.7.4 Agarose-Gelelektrophorese ................................................... 42

3.7.4.1 Durchführung .............................................................. 43

3.7.5 Quantitative Polymerasekettenreaktion (QPCR) .................... 44

3.7.5.1 Durchführung .............................................................. 45

3.7.5.2 Auswertung ................................................................. 46

3.7.6 Oligonukleotide (Primer) ........................................................ 47

4. ERGEBNISSE 51

4.1 Übersicht .......................................................................................... 51

4.2 Etablierung von optimalen Bedingungen für die

Untersuchung von Follikeln .......................................................... 52

4.2.1 Vergleich von Fixierlösungen ................................................. 53

4.3 Analyse der Immunfluoreszenzmarkierung peroxisomaler

Proteine in Ovarien der Maus ........................................................ 54

4.3.1 Optimale Bedingungen und Antikörperverdünnungen ........... 54

4.3.2 Einfluss von Einbettung und Fixierung auf die

Immunhistochemie ................................................................. 55

4.3.2.1 Paraffineinbettung und Kryokonservierung ................. 55

4.3.2.2 Perfusionsfixierung und Immersionsfixierung ............. 56

4.3.2.3 Kontrollen der Immunfluoreszenzmarkierung ............. 57

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