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Synthese eines Polymerskeletts im hydrophilen Innenraum von ...

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148 ERGEBNISSE UND

148 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 4.4.2 Energy Dispersive X-ray Microanalysis (EDX) Die mittels ESI erhaltenen Daten wurden im TEM mit Hilfe der elementspezifischen Röntgenstrahlungsanalyse (EDX, siehe Kapitel 3.6.2) verifiziert. Dabei sollte eine Co- Lokalisation von Phospholipid und Polymer nachgewiesen werden. Durch Kombination der beiden Methoden ESI und EDX ließen sich zuverlässige Informationen über das Vorhandensein und die Verteilung der Elemente Schwefel (aus dem Co-Polymer) und Phosphor (aus dem Phospholipid) in einer liposomalen Zubereitung erhalten. Bei der Herstellung der Liposomenzubereitungen wurde auf die Verwendung von phosphat- bzw. schwefelhaltigem HEPES-Puffer verzichtet. Die Proben wurden unmittelbar nach den hochauflösenden ESI-Untersuchungen, ohne den Probenausschnitt zu verändern, mittels EDX analysiert. Der Elektronenstrahl des TEM wurde bei einem Energiegehalt von 120 keV auf den Bildausschnitt gerichtet. Das Spektrum der daraufhin von der Probe emittierten Röntgenstrahlung wurde erfasst und zeigte die Co-Lokalisation von Phosphor und Schwefel (Abbildung 4-27). Daneben wurden die Elemente C, O, Cu (durch Verwendung eines Kupfergrids), Na und Cl (Kochsalz zur Isotonisierung) sowie Si (evtl aus Glasgefäßen) nachgewiesen. P S Abbildung 4-27 Spektrum der emittierten Röntgenstrahlung eines polymergefüllten Liposoms. Auf der Abszisse ist der Energiegehalt der emittierten Röntgenstahlung aufgetragen (0 - 4,3 keV), die Ordinate zeigt die Häufigkeit der detektierten Ereignisse. Es konnte eine Co- Lokalisation der Elemente Schwefel (aus dem Co-Polymer) und Phosphor (aus dem Phospholipid) nachgewiesen werden.

4.4.3 Ultramikrotomie ERGEBNISSE UND DISKUSSION 149 Die TEM-Untersuchung Rutheniumtetroxid- kontrastierter Ultradünnschnitte von in Melamin-Harz eingebetteten Liposomen ermöglicht die Aufklärung der Struktur des inneren Polymerskeletts. Eine Polymerhohlkugel (siehe Abbildung 1-25, Kapitel 1.4.1) im Inneren der Liposomen kann auf diese Weise von einer Polymervollkugel unterschieden werden (Stauch 2002, Gutmayer 2004). Wie in Kapitel 3.6.3 beschrieben, wurden zunächst polymergefüllte Liposomen in Melamin-Harz eingebettet und mittels eines Ultramikrotoms in 50 nm dünne Scheibchen geschnitten. Diese wurden mit RuO4-Dampf behandelt, um das Polymer dunkel anzufärben (positiv-Kontrastierung). Das Polymer zeigte im Querschnitt eine ringförmige Struktur, was auf das Vorliegen des quasi-zweidimensionalen Netzwerks hindeutet und gegen den Strukturtyp der Polymer-Vollkugel spricht (Abbildung 4-28). Da die Lipidmembran auf diesen Aufnahmen nur unzureichend dargestellt wurde, konnte das Vorhandensein von extraliposomalem Polymer mit dieser Methode nicht ausgeschlossen werden. A B C Abbildung 4-28 TEM- Aufnahmen positiv-kontrastierter Ultradünnschnitte pSEMA/TEGDM/DOGM-gefüllter Liposomen. Dunkle Bereiche zeigen Polymer an.

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