Überlebensfähigkeit von kryokonservierten ... - Dragon IVF

2.9 Beurteilungsmöglichkeiten für Embryonen............................................. 34
2.9.1 Morphologische Beurteilung ................................................................ 34
2.9.2 Beurteilung nach Fluoreszenzanfärbung mittels FDA................... 35
2.9.3 Beurteilung nach Fluoreszenzanfärbung durch
Hoechst A 33342 .................................................................................... 36
3 Material und Methoden................................................................................37
3.1 Tiermaterial ....................................................................................................... 37
3.2 Haltungsbedingungen.................................................................................... 37
3.3 Medien................................................................................................................ 38
3.3.1 Spülmedium .............................................................................................. 38
3.3.2 Kulturmedium ........................................................................................... 41
3.3.3 Kryoprotektivum ...................................................................................... 42
3.3.4 Auftaumedium .......................................................................................... 43
3.3.5 Überschichtungsöl für Kultivierung- und Waschdrops ................ 43
3.4 Behandlung der Embryonenspender......................................................... 44
3.5 Gewinnung der Embryonen.......................................................................... 46
3.6 Beurteilung der gewonnenen Embryonen................................................ 48
3.7 Einfrieren der Embryonen............................................................................. 49
3.7.1 Standartgefrierverfahren........................................................................ 50
3.7.1.1 Haake ................................................................................................... 50
3.7.1.2 Consartic............................................................................................. 51
3.8 Zwischenlagerung der eingefrorenen Embryonen ................................ 53
3.9 Auftauen der Embryonen.............................................................................. 54
3.10 In vitro Kultivierung der Embryonen ....................................................... 55
3.11 Beurteilung von Embryonen ...................................................................... 56
3.11.1 Morphologische Beurteilung.............................................................. 56
3.11.2 Kombinierte FDA-Hoechst-Färbung zur
Zytoplasmaaktivitätsbestimmung und Kernzählung ................... 60
3.12 Geräte und Gerätekontrolle........................................................................ 62
3.13 Photographien ............................................................................................... 64
3.14 Statistische Auswertung............................................................................. 64
II