LABOR ENDERS Prof. Dr. med. G. Enders & Partner

Institut für Virologie, Infektiologie und Epidemiologie e.V.
Vorsitzende: Prof. Dr. med. Gisela Enders
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Info-Nr.:59a Juni 1999, Update: August 2010
ANCA-Stufendiagnostik
Antineutrophile cytoplasmatische Antikörper (ANCA) spielen eine bedeutende Rolle in der Diagnostik
von systemischen Vaskulitiden und chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen. Sie werden zum Teil
auch bei Erkrankungen der Leber und des rheumatischen Formenkreises so wie bei medikamentös
induzierten Vaskulitiden und Infektionen beobachtet [Reviews: Erwig 2010, Csernok 2010, Radice
2005, Hoffman 1998,].
Immunfluoreszenztest
Der Nachweis von ANCA erfolgt durch den indirekten Immunfluoreszenztest (IFT) auf alkoholfixierten
humanen Granulozyten. Die p-ANCA sind in der Immunfluoreszenz nur schwer von Antikörpern gegen
Zellkerne (ANA) zu unterscheiden. Um das Vorliegen von erhöhten ANA auszuschließen wird als
weiteres Substrat Primatenleber eingesetzt. ANA erkennt man durch Fluoreszenz der Zellkerne der
Hepatozyten. ANCA reagieren nur mit den in Sinusoiden enthaltenen Granulozyten. Zwei
verschiedene Fluoreszenzmuster werden auf Granulozyten aufgrund des Zielantigentyps, dessen
Ladung und Verteilung, beobachtet: ANCA reagieren entweder mit cytoplasmatischen (c-ANCA)
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oder perinukleären Antigenen (p-ANCA). Besteht ein Mischbild aus c- und p-ANCA, wird auch von
atypischen p-ANCA oder x-ANCA gesprochen. Auf dem vierten Internationalen ANCA-Workshop im
Mai 1992 wurde aber entschieden, diese x-ANCA-Fluoreszenzmuster nicht gleichberechtigt neben die
c- und p-ANCA-Muster zu stellen, sondern sie weiterhin zu den p-ANCA zu zählen [Gross 1993].
Entsprechend der Nomenklatur der internationalen Konsensus-Erklärung zur ANCA-Untersuchung
und -Befunderstellung werden vier Fluoreszenzmuster unterschieden [Savige 1999]:
• c-ANCA für cytoplasmatische Fluoreszenz
• atypische c-ANCA für andere cytoplasmatische Fluorezenzmuster (z. B. homogen)
• p-ANCA für perinukleäre Fluoreszenz oder "Granulozyten-spezifische nukleäre Fluoreszenz“
• atypische p-ANCA für andere Fluoreszenzmuster (z. B. ein Mischbild aus p- und c-ANCA)
c-ANCA
p-ANCA
Die Immunfluoreszenzbilder wurden uns freundlicherweise von der Fa. Euroimmun zur Verfügung gestellt.
EIA
Das Hauptantigen für c-ANCA ist die Proteinase 3 (PR3). P-ANCA sind vorrangig gegen
Myeloperoxidase (MPO) gerichtet. In seltenen Fällen können PR3-positive Seren eine p-ANCAtypische
Fluoreszenz verursachen. Einem positiven ANCA-Befund im IFT muss unbedingt die
Bestimmung der AK-Spezifität mittels PR3- und/oder MPO-ELISA folgen, da diese Autoantikörper für
die Diagnose und Verlaufskontrolle der Vaskulitiden, vor allem der Wegenersche Granulomatose, der
mikroskopischen Polyarteriitis und des Churg-Strauss-Syndroms, wichtig sind. Der IFT ist sensitiver
als der ELISA [Trevisin 2008]. Obwohl wir in unserem Labor einen sensitiven "capture" PR3-EliA
verwenden [Villalta 2004, Damoiseaux 2005], konnten wir in c-ANCA-positiven Seren PR3-AAK erst
ab einem Titer von 1:20 nachweisen. Das gleiche gilt für MPO-AAK. Außer MPO konnten Elastase,
Kathepsin G, Laktoferrin, Lysozym und BPI (permeability-increasing protein) als weitere
Zielantigene für p-ANCA identifiziert werden. Diese Antikörperspezifitäten können ebenfalls mittels
ELISA bestimmt werden. Die genaue p-ANCA-Spezifität hat aber keine klinische Relevanz. Zum
Beispiel wurden bei Patienten mit Colitis ulcerosa p-ANCA gegen BPI, Kathepsin, Elastase,
Lactoferrin und selten MPO beschrieben [Folwaczny 1998]. Bei bis zu 50 % aller ANCA-positiven
Seren bleibt das Zielantigen unklar.
Hochtitrige antinukleäre Antikörper (ANA) in der Patientenprobe erschweren die Diagnostik von p-
ANCA, da die ANA-Fluoreszenz das Fluorezenzmuster der p-ANCA maskiert. In einem solchen Fall
ist der Ausschluss von p-ANCA nur mittels des oben genannten ELISA möglich.
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Krankheitsassoziationen mit ANCA
Fluoreszenzmuster: c-ANCA (Antigen: PR3)
Prävalenz
Wegenersche Granulomatose 90 %
Mikroskopische Polyarteriitis 45 %
Churg-Strauss-Syndrom 10 %
Speziell bei der Wegener-Granulomatose korreliert der c-ANCA-Titer (PR3-AK) mit der
Krankheitsaktivität. Jedoch kann, wie letzte Studien zeigen, die Therapieentscheidung nicht
ausschließlich aufgrund des c-ANCA-Monitorings ohne Hinziehen des klinischen Bildes
getroffen werden. C-ANCA-Titeranstiege können einer Exazerbation der Erkrankung um
Wochen aber auch um Monate vorausgehen. Anderseits können c-ANCA-Titeranstiege auch
ohne Rezidive stattfinden [Langford 2004].
Fluoreszenzmuster: p-ANCA (Antigen: MPO)
Prävalenz
Mikroskopische Polyarteriitis 45 %
Klassische Panarteriitis nodosa 15 %
Idiopathische Glomerulonephritis 65 %
Churg-Strauss-Syndrom 60 %
Fluoreszenzmuster: p-ANCA bei rheumatischen Erkrankungen (andere Antigene, nicht MPO)
Prävalenz
Systemischer Lupus erythematodes 25 %
Rheumatoide Arthritis und Vaskulitis 20–50 %
Sjögren Syndrom 25 %
Felty-Syndrom 50 %
Fluoreszenzmuster: p-ANCA bei entzündlichen Darmerkrankungen und Hepatitiden (andere
Antigene, nicht MPO)
Prävalenz
M. Crohn 5–25 %
Colitis ulcerosa 50–80 %
Autoimmunhepatitis 30 %
Primär biliäre Zirrhose 30 %
Primär sklerosierende Cholangitis 60–80 %
Fluoreszenzmuster: p-ANCA bei medikamenteninduzierten Vaskulitiden (Antigen: MPO
und andere)
Prävalenz
Einnahme von Propylthiouracil (PTU) 20–64 %
Viele Medikamente – vor allem das Thyreostatikum Propylthiouracil (PTU) – können zu positiven
ANCA-Ergebnissen führen, selten aber zu einer Vaskulitis [Csernok 2010].
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Literatur
Csernok E, Lamprecht P, Gross WL. Clinical and immunological features of drug-induced and
infection-induced proteinase 3-antineutrophil cytoplasmic antibodies and myeloperoxidaseantineutrophil
cytoplasmic antibodies and vasculitis. Curr Opin Rheumatol. 2010 Jan;22(1):43-8.
Damoiseaux JG, Slot MC, Vaessen M, Stegeman CA, Van Paassen P, Tervaert JW.
Evaluation of a new fluorescent-enzyme immuno-assay for diagnosis and follow-up of ANCAassociated
vasculitis. J Clin Immunol. 2005 May;25(3):202-8.
Erwig LP, Savage CO. ANCA-associated vasculitides: advances in pathophysiology and
treatment. Neth J Med. 2010 Feb;68(2):62-7. Folwaczny C, Jochum M, Noehl N, Schnettler D,
Loeschke K, Fricke H. p-ANCA target antigens in ulcerative colitis. Z Gastroenterol. 1998
Aug;36(8):625-33
Hoffman GS, Specks U. Antineutrophil cytoplasmic antibodies. Arthritis Rheum. 1998
Sep;41(9):1521-37
Langford CA. Antineutrophil cytoplasmic antibodies should not be used to guide treatment in
Wegener's granulomatosis. Clin Exp Rheumatol. 2004;22(6 Suppl 36):S3-6
Radice A, Sinico RA. Antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA). Autoimmunity. 2005
Feb;38(1):93-103
Savige J, Gillis D, Benson E, Davies D, Esnault V, Falk RJ, Hagen EC, Jayne D, Jennette JC,
Paspaliaris B, Pollock W, Pusey C, Savage CO, Silvestrini R, van der Woude F, Wieslander J, Wiik A.
International Consensus Statement on Testing and Reporting of Antineutrophil Cytoplasmic Antibodies
(ANCA) Am J Clin Pathol. 1999 Apr;111(4):507-13
Trevisin M, Pollock W, Dimech W, Melny J, Paspaliaris B, Gillis D, Wong R, Savige J. Antigenspecific
ANCA ELISAs have different sensitivities for active and treated vasculitis and for
nonvasculitic disease. Am J Clin Pathol. 2008 Jan;129(1):42-53.
Villalta D, Tonutti E, Tampoia M, Bizzaro N, Papisch W, Tozzoli R, Stella S. Analytical and
diagnostic accuracy of the EliA automated enzyme fluoroimmunoassay for antineutrophil
cytoplasmic autoantibody detection. Clin Chem Lab Med. 2004;42(10):1161-7.
Dr. med. Elena Ladwig Dr. med. F. Tewald Prof. Dr. med. Gisela Enders
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