Biotecnología animal Métodos de transferencia de genes en ...

Vectores de reemplazo
Recombinación
homóloga
Neo R
Neo R+ / HSVtk -
Neo R
segmento del gen 1
HSVtk
segmento del gen 2
Integración al azar
Plásmido de
reemplazo linearizado
Neo R+ / HSVtk +
HSVtk convierte ganciclovir en una
droga tóxida y mata células HSVtk+
3) Las células c lulas se criban con antibióticos
antibi ticos para determinar la
correcta inserción inserci n del DNA
4) Las células c lulas madre embrionarias se transfieren a embriones
de ratón rat n tempranos
5) Los embriones se implantas en madres se permite su
nacimiento
6) La descendencia tendrán tendr n piel blanca y negra, negra siendo la piel
negra un marcador para el gen eliminado. eliminado Esto se llama una
quimera, quimera osea un ratón rat n con células c lulas normales y células c lulas
modificadas
7) La descendencia se cruzan con un ratón rat n blaco y cualquier
ratón rat completamente negro será ser un ratón rat n KO, conteniendo
el gen inactivado en cada célula c lula. Esto muestra que el gen
inactivado está est presente en todas las células c lulas
d. El maíz ma z KO se confirma para el gen diana por PCR
5. Puede inactivar gene para monitorizar el efecto en crecimiento o
para desarrollar tratamientos
6. Mutagénesis
Mutag nesis dirigida en ratón rat
a. Inserción Inserci de DNA en un lugar específico espec fico del cromosoma
b. Genes se pueden también tambi n inactivar (llamado ( llamado KO)
c. Los pasos en crear ratones KOs son:
1) Un gen se inactiva al eliminar una parte del gen e insertar un
gene de resistencia a antibiótico antibi tico en su lugar. DNA homólogo hom logo
donde la recombinación recombinaci va a ocurrir flanquea ambos lados
del marcador. marcador.
El DNA insertado también tambi n lleva un gen que
produce la piel negra
2) El gen se transfiere a células c lulas madres embrionarias. embrionarias.
La
células lulas contendrán contendr dos copias del gen de interés inter y dos
copias del de del gen de piel negra (en homozigosis)
Retrovirus y transferencia génica g nica
1. Puede infectar a un animal de manera muy eficiente e
integrar DNA en genomas
2. Usa RNA como genoma e infecta células c lulas sin matarlas
3. Durante al infección infecci el RNA se convierte en DNA por la
enzima transcriptasa reversa. reversa.
El DNA se integra en el
genoma de la célula lula huesped expresándose
expres ndose los genes
víricos ricos y formando el virus
4. Puede infectar diferentes tipos celulares con una sola
copia de DNA, pero solo puede llevar pequeas
candidades de DNA
5. Si el virus se usa como vector, el virus es inactivado
eliminando los genes necesarios para el
empaquetamiento y transcripción transcripci n reversa
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