Clase IX

Identificación y medición de la
respuesta inmune
PRUEBAS SECUNDARIAS

La prueba a realizar depende de las
características del Ag
§ SOLUBLE
§ PARTICULADO
PRECIPITACIÓN
§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO
AGLUTINACIÓN
FIJACIÓN DE
COMPLEMENTO

Y
Y
Comparación precipitación - aglutinación
Antígeno
SOLUBLE
Y
Y
Formación de “retículo” “Amontonamiento”
PRECIPITACIÓN
Y
Y
Y
Anticuerpo
AGLUTINACIÓN
Antígeno
PARTICULADO
Y
Y
Y

PRECIPITACIÓN
Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en
contacto con su anticuerpo específico, forma
complejos inmunes que al encontrarse en
proporciones óptimas se insolubilizan dando una
reacción de precipitación

AC ESPECÍFICO
Ag SOLUBLE
Precipitación
Y Y
Y
Exceso de AC
Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
Y
Y
Proporciones
óptimas
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
RETÍCULO
SOLUBLE
Exceso de Ag
Y
MEDIO
PROPORCIÓN
Y
Ag/mg

MEDIO
LÍQUIDO SÓLIDO
Test de Ascoli - Valente
CARBUNCLO
• DIFUSIÓN DOBLE
• INMUNOELECTROFORESIS (IEF)
• INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)
• CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)

DIFUSIÓN DOBLE
Inmunodifusión en Gel de Agar
Fundamento: empleando el medio adecuado (agar
gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag
como Ac (difusión “doble”), de modo que al
encontrarse en proporciones óptimas,
interaccionen, produciendo una banda de
precipitado visible
Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

Test de Coggins para AIE
Placa de Petri
1. Agar gel
2.Sacabocados
6
5
7
1
4
1 3 5
3. Suero problema
2
3
6
5
1
7
7
2 4 6 5. Antígeno específico
4. Suero testigo (+) (reactivo)
(reactivo)
4
2
3
6
7
4
2
6
7
4
2

6.Cámara húmeda
48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN
6
7
4
2
A
C B
A. NEGATIVO
B. POSITIVO
C. Débilmente POSITIVO
D. NEGATIVO
E. Fuertemente POSITIVO
F. POSITIVO
D
F E
G
I H
G. POSITIVO
H. Banda INESPECÍFICA
I. Banda INESPECÍFICA

APLICACIONES EN VETERINARIA
§ ANEMIA INFECCIOSA EQUINA
§ PIROPLASMOSIS EQUINA
§ LEUCOSIS BOVINA
§ BRUCELOSIS OVINA
§ BRUCELOSIS CANINA

AGLUTINACIÓN
Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo:
bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su
anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une
por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión
agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

FENÓMENO DE ZONA O PROZONA
Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con
respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de
tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión
de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de
dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la
aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de
sueros muy positivos.

A
G
L
U
T
I
N
A
C
I
Ó
N
AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN PASIVA
COAGLUTINACIÓN
HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.

Antígeno
particulado
(reactivo)
+ YY
YY Y
Suero problema
Proporción
Medio
Y
YY
Y
Y
AGLUTINACIÓN

AGLUTINACIÓN
En PLACA En TUBO
Salmonella Brucella Micoplasma
BPA
Brucella
SAT+2-ME PAL

Aglutinoscopio + placa de
vidrio
Aglutinación en placa: BPA
Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado
1. Suero problema 2. Antígeno específico
(reactivo)

3. Mezclar
8 MINUTOS
LECTURA E
INTERPRETACIÓN
Con GRUMOS Sin GRUMOS
AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa

Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME
SAT (Seroaglutinación en Tubo)
Ig M
2- ME (2- Mercaptoetanol)
Ig G
Se realizan en
simultáneo

En TUBO: SAT + 2- ME
1. Suero problema
SUERO
BPA (+)
2. Solución 2-ME
2. Solución fisiológica fenicada (SFF)
3. Antígeno
1/25 1/50 1/100 1/200
Título
60 MINUTOS
SAT
37ºC-48 hs
2-ME

37ºC-48 hs
LECTURA e INTERPRETACIÓN
POSITIVA INCOMPLETA NEGATIVA

Aglutinación en tubo: PAL
PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE
Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra
un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno
particulado coloreado, ambos se unirán, formando un
complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y
asciende con la nata

PAL
1. Leche problema
37ºC-1 hora
2. Antígeno (reactivo)
LECTURA e INTERPRETACIÓN
+ ++ +++ ++++

TAMIZ
COMPLEMENTARIAS
DEFINITORIA
VIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA
APLICACIONES EN R. A.
BRUCELOSIS BOVINA
Prueba
BPA – ELISA I
SAT + 2-ME – FPA
ELISA C
FC
PAL - ELISA I

PRUEBAS TERCIARIAS
v IN VITRO NEUTRALIZACIÓN
v IN VIVO
PROTECCIÓN

NEUTRALIZACIÓN
Fundamento: estimación de la capacidad de una
anticuerpo de neutralizar la actividad biológica
de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

PROTECCIÓN
Fundamento: forma de análisis de neutralización
que se realiza totalmente in vivo para determinar
la capacidad protectora de un anticuerpo
específico frente a su antígeno

RESPUESTA INMUNE CELULAR
v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS
v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T
v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B
v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS