12.05.2013 Views

Cultivo de meristemas 2008

Cultivo de meristemas 2008

Cultivo de meristemas 2008

SHOW MORE
SHOW LESS

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.

1. DEFENICIÓN<br />

2. RESEÑA HISTÓRICA<br />

3. OBJETIVOS Y APLICACIONES<br />

4. TEORÍAS<br />

5. METODOLOGÍA<br />

CULTIVO DE MERISTEMAS<br />

6. CULTIVO DE MERISTEMAS DENTRO DEL PROGRAMA DE CERTIFICACIÓN<br />

7. VENTAJAS Y LIMITANTES<br />

8. SITUACIÓN ACTUAL


DEFINICIÓN DE MERISTEMA<br />

Son masas <strong>de</strong> células no diferenciadas que conservan su capacidad <strong>de</strong> dividirse<br />

activamente


RESEÑA HISTÓRICA DEL CULTIVO DE MERISTEMA<br />

ROBBINS, 1922 Intentos <strong>de</strong> cultivo <strong>de</strong> <strong>meristemas</strong> <strong>de</strong> tallo y raíz.<br />

WHITE, 1934 El virus <strong>de</strong>l TMV se distribuía irregularmente a lo largo <strong>de</strong> las<br />

diferentes zonas <strong>de</strong> la raíz.<br />

LIMASSET Y CORNUET, 1949 La concentración relativa <strong>de</strong> virus disminuye<br />

acropetalmente hacia el meristema apical.<br />

GEORGES Y SHERRINGTOS, 1984 La distribución <strong>de</strong>l virus en la planta es muy<br />

variable.<br />

MOREL Y MARTIN, 1952 El meristema apical esta libre <strong>de</strong> virus y es generalmente<br />

igual a la planta madre. Ej. Dalia y papa.<br />

MOREL, 1960 Obtención <strong>de</strong> protocormos <strong>de</strong> orqui<strong>de</strong>as a partir <strong>de</strong> cultivo <strong>de</strong> ápices y<br />

multiplicación vegetativa precoz, con alta tasa <strong>de</strong> multiplicación.<br />

MURASHIGUE, 1972 Obtiene el primer microinjerto <strong>de</strong> citrus.<br />

QUAK, 1977 Competencia entre la síntesis <strong>de</strong> partículas virales y la multiplicación<br />

celular.<br />

PIERIK, 1987 Durante la división celular la capacidad para la síntesis <strong>de</strong> ácidos<br />

nucleicos es utilizado para la proliferación celular en <strong>de</strong>trimento <strong>de</strong> la<br />

multiplicación <strong>de</strong>l virus.


OBJETIVOS Y APLICACIONES<br />

1. Producción <strong>de</strong> plantas libres <strong>de</strong> patógenos<br />

2. Propagación vegetativa<br />

3. Especies que son difíciles <strong>de</strong> propagar<br />

4. Especies <strong>de</strong> elevada contaminación<br />

5. Rejuvenecimiento<br />

6. Preservación <strong>de</strong>l germoplasma


1. Meristemas primarios o apicales<br />

TIPO DE MERISTEMAS<br />

a. Meristemas radiculares (terminal, lateral y adventicio*)<br />

b. Meristema caulinares (terminal, axilar y adventicios*)<br />

*Meristemas <strong>de</strong> neoformación (callo)<br />

2. Meristemas secundarios o cambium<br />

a. cambium (floema y xilema)<br />

b. súber o felo<strong>de</strong>rmis<br />

3. Meristemas intercalares<br />

a. Meristemas <strong>de</strong> la base <strong>de</strong> los entrenudos <strong>de</strong> las gramineas<br />

b. Meristemas intercalares <strong>de</strong>l escapo floral<br />

c. Meristemas <strong>de</strong>l carpóforo <strong>de</strong>l cacaguate


TEJIDO NO PORTADOR DE VIRUS<br />

TEORÍAS<br />

1.Competencia entre división celular y multiplicación <strong>de</strong>l virus (Quack,<br />

1966).<br />

2.Ausencia <strong>de</strong> elementos vasculares en el meristema evita el<br />

transporte <strong>de</strong>l virus (Quack, 1966).<br />

3.Ausencia <strong>de</strong> enzimas en el meristema necesarias para la<br />

multiplicación <strong>de</strong>l virus (Mellor y Stace-Smith, 1969).<br />

4.Sustancias inhibidoras también presentes en las semillas (Martín y<br />

Tanguy et al., 1976).<br />

5.Alta concentración <strong>de</strong> auxinas y citoquininas impi<strong>de</strong>n la penetración<br />

<strong>de</strong> partículas virales (Quack, 1977).


METODOLOGÍA DEL CULTIVO DE MERISTEMAS<br />

1. Material madre, explanto y factores que lo afectan<br />

2. Condiciones <strong>de</strong>l cultivo - medio<br />

- condiciones físicas<br />

3. Factores que influyen en la erradicación <strong>de</strong>l virus<br />

1. Planta madre y explanto<br />

papa, utilización <strong>de</strong> yemas axilares<br />

clavel, se utilizan yemas laterales (13% <strong>de</strong> éxito) y yemas terminales (20% <strong>de</strong> éxito)<br />

Factores que lo afectan a. genotipo<br />

b. efecto <strong>de</strong> diferentes años<br />

c. posición <strong>de</strong>l explante<br />

d. tamaño <strong>de</strong>l explante<br />

e. condición sanitaria


2. Condiciones <strong>de</strong>l cultivo a. Medio<br />

Composición básica - sucrosa o sacarosa 1-3%<br />

Luz 1000-3000 luxes<br />

Fotoperiodo 16hrs <strong>de</strong> luz<br />

Temperatura 22-25°C<br />

- sales <strong>de</strong> Murashige y Skoog, B5 o White<br />

- vitaminas<br />

- agar 6-7gr/lt<br />

- ph 5.5-6<br />

- carbón activado, reguladores <strong>de</strong> crecimiento<br />

b. Condiciones físicas<br />

3. Factores que influyen en la erradicación <strong>de</strong>l virus<br />

a. tamaño <strong>de</strong>l meristema<br />

b. localización <strong>de</strong>l meristema<br />

c. edad<br />

d. tratamiento <strong>de</strong> termoterapia o quimioterapia (virazole, 2-thiouracil)


- Regeneración por micropropagación.


1. Lupa estereoscópica<br />

2. pinzas y bisturí<br />

3. mechero<br />

4. material <strong>de</strong> vidrio<br />

5. fuente <strong>de</strong> luz fría<br />

6. cámara <strong>de</strong> flujo<br />

REQUERIMIENTOS


CULTIVO DE MERISTEMAS EN EL PROGRAMA DE<br />

CERTIFICACIÓN<br />

1. IMPORTANCIA<br />

2. ETAPAS<br />

- Virus, bacterias, hongos son transmitidos vegetativamente<br />

bajan la producción: citrus 10-20%<br />

papa 5-75%<br />

vid 50%<br />

a. Selección y caracterización <strong>de</strong> la planta madre<br />

b. Obtención <strong>de</strong> plantas libres<br />

- termoterapia<br />

- cultivo <strong>de</strong> <strong>meristemas</strong> (ajo, 25-50%- crisantemo, 5%)<br />

- termoterapia + cultivo <strong>de</strong> <strong>meristemas</strong> (ajo, 25-80%-crisantemo, 90%)<br />

- microinjerto<br />

c. Evaluación <strong>de</strong> las plantas obtenidas<br />

- serología<br />

- plantas indicadoras<br />

- microscopía electrónica<br />

- sondas moleculares


Programa <strong>de</strong> Certificación <strong>de</strong> Citrus<br />

Selección <strong>de</strong> materiales<br />

sobresalientes<br />

Producción <strong>de</strong> plantas<br />

libres <strong>de</strong> virus<br />

Microinjerto<br />

Termoterapia<br />

Quimioterapia<br />

In<strong>de</strong>xación<br />

Plantas indicadoras<br />

Serología<br />

Electroforesis<br />

Microscopía electrónica<br />

Creación <strong>de</strong> un bloque Fundación<br />

Libre <strong>de</strong> virus<br />

Banco <strong>de</strong> plantas madres<br />

Introducción <strong>de</strong> nuevas<br />

varieda<strong>de</strong>s<br />

I<strong>de</strong>ntificación varietal<br />

Evaluación permante<br />

Registro y Certificación <strong>de</strong><br />

yemas a viveristas y productores


CULTIVO DE MERISTEMAS EN EL PROGRAMA DE<br />

CERTIFICACIÓN<br />

d. Mantenimiento <strong>de</strong> plantas libres<br />

- invernáculos<br />

- control <strong>de</strong> vectores<br />

- higiene<br />

- continua selección visual<br />

- mantenimiento stock in vitro


VENTAJAS<br />

VENTAJAS Y LIMITANTES<br />

• Se logran plantas con un porcentaje alto, libres <strong>de</strong> virus.<br />

• Alta tasa <strong>de</strong> multiplicación<br />

• Pue<strong>de</strong>n ser proliferados en cualquier época <strong>de</strong>l año<br />

• Pequeña cantidad <strong>de</strong> tejido para regenerar una planta<br />

• Estabilidad genética alta<br />

LIMITANTES<br />

• Muerte <strong>de</strong> <strong>meristemas</strong><br />

a. oxidación<br />

b. <strong>de</strong>sidratación<br />

• Tamaño <strong>de</strong>l meristema<br />

• Enraizamiento<br />

• Aclimatación


SITUACIÓN ACTUAL<br />

Ornamentales Crisantemo, Dalia, Jacinto, Geranio<br />

Forrajeras Dactylis glomerata, Lolium multiflorum, Trifolium repens<br />

Hortícolas Ajo, Espárrago, Frutilla, Tomate, Papa<br />

Tropicales Ananá, banana, boniato<br />

Leñosas Citrus, Duraznero, Vid, Manzano.<br />

En Uruguay<br />

Citrus Virus (Psorosis, Tristeza) y viroi<strong>de</strong>s (Exocortis)<br />

Frutilla virus, (SLV virus latente <strong>de</strong> la frutilla), bacterias, hongos.<br />

Papa virus PLRV, PVY, PVX, PVS<br />

Ajo virus


TECNICA DE AISLAMIENTO DE MERISTEMAS Y<br />

MICROINJERTO<br />

1) Preparación y siembra <strong>de</strong> portainjertos “in vitro”<br />

1.1 Siembra <strong>de</strong> semillas <strong>de</strong> citrange Troyer o Carrizo (Poncirus trifoliata L. x<br />

Citrus sinensis L. Obs.).<br />

1.2 Desinfección con hipoclorito <strong>de</strong> sodio al 1% y con una gota <strong>de</strong> twenn<br />

20 durante 10 min.<br />

1.3 Siembra en medio <strong>de</strong> Murashige y Skoog con sales minerales.<br />

1.4 Incubación a 27ºC durante 2 semanas en oscuridad.<br />

2) Preparación <strong>de</strong> brotes<br />

2.1 Extracción <strong>de</strong> brotes <strong>de</strong> campo, invernáculo o varetas puestas a brotar<br />

en cámara <strong>de</strong> crecimiento a 32ºC.<br />

Los brotes extraídos tienen que tener 0.5 a 2 cm <strong>de</strong> largo.<br />

2.2 Se <strong>de</strong>sinfecta con hipoclorito <strong>de</strong> sodio al 0.5% y con una gota <strong>de</strong><br />

tween 20 durante 10min.<br />

2.3 Se enjuagan con bastante agua <strong>de</strong>stilada.


TECNICA DE AISLAMIENTO DE MERISTEMAS Y MICROINJERTO<br />

3) Realización <strong>de</strong>l microinjerto<br />

3.1 Se toma el portainjerto, extracción <strong>de</strong> cotiledones, el hipocótilo <strong>de</strong> 1.5-2 cm <strong>de</strong><br />

longitud y el epicótilo a 4 cm <strong>de</strong> longitud.<br />

3.2 En el ápice <strong>de</strong>l hipocótilo se realiza un corte a 1-2 mm <strong>de</strong> largo en forma <strong>de</strong><br />

ventana o T invertida.<br />

3.3 Se toma el brote <strong>de</strong>sinfectado y se aisla el meristema con 2 o 3 primordios<br />

foliares. Se lo coloca es el portanijerto.<br />

3.4 El microinjerto se lo coloca en medio líquido <strong>de</strong> Murashige y Skoog con<br />

sales y vitaminas.<br />

3.5 Se lo coloca en oscuridad a 27ºC durante 1 semana.<br />

3.6 Se lo coloca en cámara <strong>de</strong> crecimiento a 16 hrs <strong>de</strong> luz a 27ºC.<br />

3.7 Se transplanta y se coloca en cámara <strong>de</strong> crecimiento a 27ºC durante 1<br />

mes y luego se los traslada a invernáculo.

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!