chromogenic media and real-time PCR
chromogenic media and real-time PCR
chromogenic media and real-time PCR
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Cristina Gómez, X workshop MRAMA<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
iQ-Check iQ Check TM Real Time <strong>PCR</strong> y medios cromogénicos<br />
cromog nicos RAPID’ RAPID<br />
Soluciones validadas que aumentan la eficiencia en<br />
la rutina de trabajo de tu laboratorio
Fundada en Berkeley (CA) en 1952<br />
Su sede se encuentra en Hércules<br />
(cerca de San Francisco - California)<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
BIO-RAD – la compañía<br />
Focalizada en la ciencia y la tecnología<br />
Cobertura internacional, con oficinas en más de 30<br />
países que atienden a más de 150 países<br />
Más de 6000 empleados en todo el mundo<br />
Ingresos en 2010 : casi 2 billones de dólares
Diagnóstico<br />
Monitorización de Diabetes<br />
Controles de calidad<br />
Toxicología<br />
Enfermedades infecciosas<br />
Enfermedades víricas sanguíneas<br />
Autoinmunidad<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Campos de competencia<br />
Life Science<br />
Genómica<br />
Proteómica<br />
Bio-Informática<br />
Expresión génica<br />
Food Science<br />
Análisis alimentarios<br />
Análisis de aguas<br />
Veterinaria
Sistemas y kits Real <strong>time</strong> <strong>PCR</strong><br />
para análisis de aguas y alimentos<br />
Serotipificación bacteriana<br />
(Salmonella, E.coli, Pseudomonas…)<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
División Food Science– Productos<br />
Medios cromogénicos para<br />
Análsis de alimentos y aguas<br />
Técnicas rápidas para<br />
análisis de aguas (E. coli,<br />
coliforms, enterococcus)<br />
Medios clásicos para métodos<br />
normalizados<br />
(alimentos, agua, farma y cosméticos)<br />
Kits de detección para veterinaria<br />
Diagnóstico (BSE, Rabia…)
Oferta de nuevas soluciones para el diagnóstico Alimentario:<br />
Facilitar exportaciones gracias a métodos internacionalmente<br />
reconocidos<br />
Proponer la última generación de herramientas/reactivos para ensayos<br />
alimentarios mejores, más seguros y fáciles<br />
Participar en la protección de marcas<br />
Apoyo a las Salud Pública Nacional<br />
Últimas tecnologías<br />
<strong>PCR</strong> a tiempo <strong>real</strong> y<br />
medios cromogénicos<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Metas Food Science<br />
Principales parámetros<br />
alimentarios y ambientales<br />
Salmonella spp Listeria<br />
monocytognes & spp<br />
E. coli O157 H7<br />
Campylobacter<br />
Cronobacter sakazakii<br />
Reconocimiento<br />
internacional
Soporte técnico/comercial<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Distribución nacional<br />
Bioser, S.A<br />
Equilabo, S.C.<br />
Francisco González
Análisis de alimentos<br />
Análisis de aguas<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Medios cromogénicos RAPID’
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Solución completa<br />
RAPID’Salmonella short protocol<br />
RAPID’L.mono
RAPID’E.coli water<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Solución completa
RAPID´<br />
Chromogenic<br />
Media<br />
Métodos de<br />
referencia<br />
Enriquecimiento<br />
1.<br />
Enriquecimiento<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Tiempo de resultados<br />
Tiempo de resultados<br />
RAPID´<br />
Media<br />
2.<br />
Enriquecimiento<br />
Resultados<br />
Agar<br />
selectivo<br />
Pruebas<br />
bioquímicas<br />
Resultados<br />
Dia 1 Dia 2 Dia 3 Día 4-7
1 caldo + 1 placa<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Medios cromogénicos RAPID´<br />
Reducción de los costes del método<br />
Reducción del tiempo de resultados<br />
Fácil de usar/interpretar<br />
Métodos validados
Kits iQ-Check iQ<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Check TM
iQ-Check TM Salmonella spp.<br />
iQ-Check TM Listeria monocytogenes<br />
iQ-Check TM Listeria spp.<br />
iQ-Check TM E.coli O157:H7<br />
iQ-Check TM Campylobacter<br />
iQ-Check TM Cronobacter sakazakii<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Gama iQ-Check TM para alimentos<br />
Análisis cualitativos para análisis de patógenos<br />
MISMO PROTOCOLO DE<br />
EXTRACCIÓN DE DNA<br />
PROTOCOLO DE TUBO<br />
PROTOCOLO DEEP WELL<br />
MISMO RUN DE <strong>PCR</strong>
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Composición kits iQ-Check TM<br />
Reactivos listos para usar para 96 reacciones, conservación a 2-8ºC<br />
1. Reactivo de lisis + beads para Gramm+<br />
2. Controles positivo y negativo<br />
3. Mix de Amplification<br />
Taq polymerasa<br />
dNTPs<br />
MgCl 2<br />
4. Solución específica<br />
Primers específicos<br />
UDG<br />
Sondas de fluorescentes de doble cadena DNA (FAM y HEX)<br />
Control interno optimizado<br />
Solución Tampón
Molecular Beacons<br />
(Kramer, PHRI)<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
RT-<strong>PCR</strong><br />
Sondas de Doble cadena de DNA<br />
Dagl<strong>and</strong> & Rieunier, Bio-Rad<br />
Bio-Rad Technology<br />
(Patentes EP y US)<br />
Secuencias específicas
Enriquecimiento<br />
Extracción de DNA<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
iQ-Check TM <strong>PCR</strong> Alimentos
Extracción de DNA<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
iQ-Check TM <strong>PCR</strong> Alimentos<br />
94 muestras en menos de 1h
Amplificación<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
iQ-Check TM <strong>PCR</strong> Alimentos<br />
Análisis e interpretación de resultados<br />
“o”
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
iQ-Check TM Salmonella II<br />
Certificado de Validación AFNOR como<br />
método alternativo (siguiendo la ISO 16140)<br />
al método de referencia NF EN ISO 6579 :<br />
2003<br />
En alimentos humanos y animales<br />
En muestras ambientales incluyendo muestras<br />
ambientales de producción primaria<br />
Primer método alternativo en adquirir<br />
validación NF según ISO 16140 para la<br />
detección de Salmonella en muestras<br />
ambientales de producción primaria
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
iQ-Check TM Salmonella II<br />
Enriquecimiento selectivo,<br />
18 hr, 41.5°C<br />
Enriquecimiento secundario,<br />
4 hr, 37°C<br />
Extracción de DNA<br />
Protocolo DW validado<br />
St<strong>and</strong>ard II o Easy I<br />
Detección Real-<strong>time</strong> <strong>PCR</strong><br />
CFX Manager IDE 1.1<br />
Detección de Salmonella<br />
móvil y no<br />
móvil(RAPID’Salmonella)
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Aquadien TM kit<br />
iQ Check TM<br />
Legionella kits
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Aquadien TM – Doble protocolo
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Aquadien TM – Doble protocolo
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
AFNOR NF T90-471, Abril 2010<br />
Reemplaza a la norma<br />
experimental Francesa<br />
AFNOR XP T90-471:2006
Validación AFNOR<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Kits validados<br />
Todos* los iQ-Check kits están validados<br />
Siguiendo el protocolo de la norma ISO 16140<br />
Realizada en todos los instrumentos de <strong>PCR</strong> tiempo <strong>real</strong> de<br />
BIO-RAD Laboratories<br />
Validación AOAC-RI<br />
Todos** iQ-Check kits están validados<br />
Validación Nordval<br />
iQ-Check Salmonella II y Listeria monocytogenes II<br />
Resultados precisos y fiables<br />
* Excepto Campylobacter– Cronobacter pendiente - ** Campylobacter pendiente– Excepto Cronobacter
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
Validación según EN ISO 16140<br />
Beneficios con métodos alternativos validados<br />
Kits iQ-Check TM y Cromogénicos RAPID’<br />
Equivalencia AFNOR y NordVal vs norma ISO correspondiente<br />
Métodos que reducen tiempo<br />
Métodos fácil de utilizar<br />
Elevada especificidad<br />
Elevada sensibilidad<br />
Consecuentes con el coste económico<br />
Menor nº falsos positivos<br />
Menor nº falsos negativos<br />
Pueden ser usados como métodos alternativos<br />
sin validación o evaluación en el laboratorio<br />
Menos confirmación<br />
Resultados fiables y precisos
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
MiniOpticom System
Torre detector<br />
tiempo <strong>real</strong> 2<br />
colores<br />
Base MJ mini<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
MiniOpticom System<br />
Real Time <strong>PCR</strong> o <strong>PCR</strong> a punto final<br />
48 pocillos<br />
Multiplexing (hasta 2 dianas por pocillo)<br />
Sistema abierto<br />
Óptica<br />
Fluorescencia de excitación 470–500 nm<br />
Fluorescencia de detección<br />
Chanal 1: 523–543 nm<br />
Chanal 2: 540–700 nm<br />
Kits Bio-Rad predefinidos
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
CFX 96 System
Unidad óptica ptica<br />
CFX96<br />
Base<br />
C1000<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
CFX96 System<br />
UNIDAD ÓPTICA: Detecta luz emitida por los fluorocromos<br />
Real Time <strong>PCR</strong> o <strong>PCR</strong> a punto final<br />
Multiplexing (hasta 5 dianas por pocillo)<br />
Sistema abierto (curvas de melt, gradiente de<br />
temperatura, expresión génica…<br />
Kits Bio-Rad predefinidos
Ventajas del transporte óptico<br />
Calibrado en fábrica<br />
Emisión de LED es muy estable temporalmente. No se necesita<br />
calibrado tras reemplazo.<br />
Célula óptica tiene 6 canales, 5 ensayos multiplex (Sondas<br />
Taqman, molecular beacons…) 1 canal para experimentos con<br />
FRET<br />
5 canales escanean en 12 segundos (96 pocillos), permite la<br />
detección de más de 5 dianas en un pocillo.<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
CFX96 TM System
“o”<br />
Fácil instalación<br />
Análisis automático de datos e interpretación de resultados<br />
Disponible conexión LIMS<br />
Lector de código de barras disponible<br />
Trazabilidad<br />
Informe de resultados<br />
Datos pueden enviarse por correo electrónico<br />
Calibración no necesaria<br />
Abierto a otras aplicaciones<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science<br />
+
¡Gracias por su atención!<br />
Cristina Gómez | Application Specialist Support<br />
Food Science Division<br />
+ 34 606 135 755<br />
cristina_gomez@bio-rad.com<br />
Bio-Rad Laboratories Food Science
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