EFICACIA in-vitro DE LIXIVIADOS DE PLÁTANO SOBRE Fusarium ...

ISSN 0568-3076
agron. 20(1): 17 - 25, 2012
EFICACIA in-vitro DE LIXIVIADOS DE PLÁTANO SOBRE Fusarium
oxysporum SCHLECHT, CAUSANTE DE LA PUDRICIÓN DE
RAÍCES DE ARVEJA (Pisum sativum LINNEO)
Luz Adriana Osorio Gutiérrez*, Jairo Castaño Zapata** y Luis Bernardo Gutiérrez Ríos***
*Candidata a Magister en Fitopatología. Programa de Maestría en Fitopatología. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad de Caldas. Colombia.
Correo electrónico: adrianaosoriogutierrez@gmail.com
2 Profesor titular. Programa de Maestría en Fitopatología. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad de Caldas. Colombia.
Correo electrónico: jairo.castano_z@ucaldas.edu.co
3 Auxiliar de Laboratorio. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad de Caldas. Colombia.
Correo. Electrónico: luis.gutierrez_r@ucaldas.edu.co
ResUMeN
El complejo de la Pudrición de raíces en arveja es un
problema mundial que puede reducir considerablemente
el rendimiento y la calidad de la cosecha. Esta enfermedad
se ha relacionado con hongos pertenecientes al género
Fusarium. Dada la importancia que han venido adquiriendo
las nuevas alternativas al uso de productos químicos para
el manejo de enfermedades en plantas, se evaluó in vitro la
efi cacia de los lixiviados de raquis de plátano sobre Fusarium
oxysporum, comparada su efectividad con benomil,
fungicida sistémico y captan, fungicida protectante. El
experimento consistió de nueve tratamientos con cuatro
réplicas, evaluando dos concentraciones de los lixiviados
y tres dosis para cada fungicida, el diseño estadístico fue
completamente aleatorizado. Las variables evaluadas fueron
crecimiento micelial (mm), tasa de crecimiento (cm
día -1 ), esporulación (conidas . mL -1 ) y germinación (%).
El lixiviado con el 50% de agua evaporada disminuyó el
crecimiento micelial y la tasa de crecimiento con valores
promedio de 3,87 mm y 0,02 cm día -1 , la esporulación y
germinación fueron inhibidas por completo, efecto similar
a benomil, quien inhibió totalmente el desarrollo de F.
oxysporum.
Palabras clave: hongo, manejo, extracto natural,
laboratorio, caja Petri.
Recibido: 15 de junio; aprobado: 30 de junio de 2011
aBstRaCt
iN-vitRO eFFiCaCY OF PLaNtaiN
LiXiviates ON Fusarium oxysporum
sCHLeCHt, CaUsaL aGeNt OF Pea (Pisum
sativum LiNNeO) ROOts ROt
The complex of pea roots rot is a global problem that can
signifi cantly reduces yield and crop quality. This disease
has been associated with fungi of the genus Fusarium.
Given the importance that new alternatives to chemicals
for plant disease management have achieved, the effi cacy
of rachis of plantain lixiviates on Fusarium oxysporum was
evaluated in vitro, comparing its effi cacy with the systemic
fungicide benomyl and with captan a protectant fungicide.
The experiment consisted of nine treatments with four
replications, evaluating two concentrations of lixiviates
and three doses for each fungicide. The statistical design
was completely randomized. The variables evaluated were
mycelial growth (mm), growth rate (cm day -1 ), sporulation
(conida . mL -1 ) and germination (%). The lixiviate with
50% of evaporated water was able to reduce the mycelial
growth and growth rate with average values of 3.87 mm
and 0.02 cm day- 1 , both sporulation and germination were
completely inhibited, a similar effect to benomyl that in
all tested doses completely inhibited the development of
F. oxysporum.
Key words: fungus, management, natural extract, laboratory,
Petri dish.

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Luz Adriana Osorio Gutiérrez, Jairo Castaño Zapata, Luis Bernardo Gutiérrez Ríos
iNtRODUCCiÓN
La productividad del cultivo de arveja puede ser afectada
por varios problemas fi tosanitarios, destacándose
dentro de las enfermedades la Pudrición radical causada
al parecer por Pythium spp., Fusarium solani (Mart.)
Appel & Wr. f. sp. pisi (F.R. Jones.) Snyd. & Hans.,
Rhizoctonia solani Kühn; Mancha foliar (Mycosphaerella
pinodes (Berk. & A. Bloxam) Vesteger, anamorfo
Ascochyta pisi Libert.); Antracnosis (Colletotrichum pisi
Pat.); Mildeo velloso (Peronospora viciae (Berk.) Gäum.
f. sp. pisi Syndow), Mildeo polvoso, Cenicilla, u Oídio
(Erysiphe pisi Syd, estado asexual: Oidium spp.) y
Moho gris (Botrytis cinerea Pers.). Dentro de las plagas
se destacan el Barrenador del tallo (Melanogromyza sp.
Hendel), el Áfi do de la arveja (Macrosiphum pisi Kalt.)
y los tierreros o trozadores (Feltia sp Walker, Agrotis
sp. Ochsenheiner, Prodenia sp. y Spodoptera sp. Guenée)
(Lobo & Girard, 1983; Restrepo, 1991; Buriticá, 1999;
Tamayo, 2000; Buitrago et al., 2006).
El complejo de la pudrición de raíces en arveja es un
problema mundial que puede reducir considerablemente
el rendimiento y la calidad de la cosecha (Kraft &
Roberts, 1969; Tu, 1987). Esta enfermedad se ha relacionado
principalmente con hongos como: Fusarium
sp., F. oxysporum f. sp. pisi, F. solani f. sp. pisi, Rhizoctonia
sp. y Pythium sp. (Lockwood & Ballard, 1960; Basu et
al., 1973; Lobo & Girard, 1983; Tu, 1986; Hwang &
Chang, 1989; Hagedorn, 1991; Tamayo, 2000).
En Colombia, las pudriciones de las raíces en los
cultivos de arveja son muy comunes en la mayor
parte de las zonas productoras de Nariño, Cundinamarca,
Boyacá y Antioquia. Estas se presentan
en las primeras fases de desarrollo del cultivo (pre y
pos emergencia). Las pérdidas pueden oscilar entre
50 y 100% si no se toman medidas preventivas. La
enfermedad puede causar pudriciones acuosas de las
semillas o muerte prematura de éstas (Tamayo, 2000;
Buitrago et al., 2006). Hongos como F. oxysporum f. sp.
pisi, Fusarium solani f. sp. pisi, Rhizoctonia sp. y Pythium
sp., han sido relacionados con dicha enfermedad
(Lobo & Girard, 1983; Tamayo, 2000).
El manejo de enfermedades causadas por patógenos
asociados al suelo, entre ellos especies de Fusarium,
se ha basado en la fumigación de suelos antes de la
siembra y aplicaciones de fungicidas a los cultivos.
Sin embargo el principal fumigante que se ha usado
en tal tipo de prácticas, el bromuro de metilo, fue
defi nido por el protocolo de Montreal de 1991 como
una sustancia química que contribuye a la disminución
de la capa de ozono, por tal razón su uso es muy restringido
o se hace de manera ilegal (Bowers & Locke,
2000; Benavides et al., 2004). En el cultivo de arveja
el manejo de este tipo de enfermedades causadas por
patógenos como Fusarium solani f. sp. pisi, Fusarium
oxysporum f. sp. pisi y el complejo de hongos causantes
del Mal del talluelo (Pythium sp. y Rhizoctonia sp.), se
basa en el tratamiento químico de semillas, la rotación
de cultivos y el uso de variedades tolerantes a estas
enfermedades (Prieto, s.f.).
Además de los fungicidas, se pueden utilizar métodos
alternativos de control basados en compuestos
naturales obtenidos a partir de microorganismos, los
cuales, tienen grandes ventajas sobre los productos
comerciales por ser menos dañinos al ecosistema y
porque la propia microfl ora ambiental los biodegrada
in situ para convertirlos en compuestos no tóxicos.
Así, la búsqueda de nuevos productos de origen
natural no contaminantes del medio ambiente para
combatir enfermedades, representa una alternativa
importante en una agricultura sostenible (Sánchez
et al., 2002).
Los lixiviados de raquis del plátano, se han usado en
aspersiones foliares para el control de enfermedades
fungosas en plantas. Álvarez et al. (2002), mencionan
que estos contienen una concentración alta de
potasio, el cual tiende a inducir resistencia a algunas
enfermedades. De igual forma, mencionan que las
aplicaciones al 5% de ácidos fúlvicos provenientes
del lixiviado de plátano reducen la severidad del
Mildeo polvoso en rosa causado por Sphaerotheca
pannosa (Wallr.) Lév. var. rosae (estado asexual Oidium
leucoconium Desem). Así mismo, Larco (2004) como
Escobar & Castaño-Zapata (2005), mencionan que

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los ácidos fúlvicos se han utilizado en el manejo
de Mycosphaerella spp. en el campo. También se han
usado en el manejo de Ralstonia solanacearum Raza 2
Smith agente causante del Moko de plátano logrando
reducciones en la incidencia de la enfermedad hasta
de un 31,6 % en Colombia (Arenas et al., 2004).
De la misma manera Mogollón & Castaño-Zapata
(2010), demostraron en evaluaciones in vitro para el
control de Paracercospora fi jiensis (Morelet) Deighton,
que con lixiviados concentrados al 70 y 90% se logró
una reducción signifi cativa en el número, tamaño de
las colonias y la esporulación del hongo, además, la
germinación conidial fue inhibida por completo con
los lixiviados concentrados al 90%.
Debido a la importancia de encontrar alternativas
al uso exclusivo de productos químicos para el manejo
de enfermedades y en vista de la efectividad
comprobada de los lixiviados de raquis de plátano
Dominico-Hartón en el manejo de diferentes enfermedades
y los escasos estudios acerca del efecto
de tal producto natural sobre Fusarium oxysporum, se
planteó esta investigación con el objetivo de evaluar
la efi cacia in vitro de los lixiviados en diferentes concentraciones
sobre el crecimiento micelial, tasa de
crecimiento, esporulación y germinación del hongo,
comparándolo con los fungicidas benomil (Zellus®
WP y captan (Orthocide® 50 % WP).
MateRiaLes Y MÉtODOs
Localización. La evaluación in vitro de los productos
químicos y biológicos sobre Fusarium oxysporum,
causante de la Pudrición de raíces de arveja, se llevó
a cabo en el laboratorio de Fitopatología, Departamento
de Producción Agropecuaria, Facultad de
Ciencias Agropecuarias de la Universidad de Caldas.
El aislamiento de Fusarium oxysporum se obtuvo en
un estudio previo realizado por Osorio-Gutiérrez y
Castaño-Zapata (2011), para caracterizar el agente
causante de la Pudrición de raíces de la arveja.
Efi cacia in-vitro de lixiviados de plátano sobre Fusarium oxysporum Schlecht...
El lixiviado de raquis de plátano se obtuvo de la fi nca
La Diana, propiedad del señor Hobber Naranjo,
ubicada en el municipio de Armenia (Quindío); luego
se llevó al laboratorio de Fitopatología de la Universidad
de Caldas, se emplearon dos concentraciones
del lixiviado: 50% y la concentración que se obtiene
en el campo. La primera concentración se obtuvo
eliminando el 50% de agua del lixiviado mediante
evaporación (Castaño-Zapata et al., 2007; Mogollón
& Castaño-Zapata, 2010).
Los tratamientos fueron: 1. Lixiviado de raquis de
plátano como se obtiene en el campo (sin evaporar).
2. Lixiviado de raquis de plátano con el 50% de agua
evaporada. 3. Captan 2,5g . L -1 4. Captan 1,25g . L -1 . 5.
Captan 5g . L -1 . 6. Benomil 0,6g . L -1 . 7. Benomil 0,3g
. L -1 . 8. Benomil 1,2g . L -1 . 9. Testigo absoluto.
Los tratamientos se realizaron con base en la metodología
propuesta por Mogollón & Castaño-Zapata
(2010), con algunas modifi caciones en las diluciones
y la aplicación de los productos en papa-dextrosaagar,
PDA (39 g L -1 ). En el centro de cada caja Petri
modifi cada con el producto a las diferentes concentraciones,
y dosis, se ubicaron discos de 8 mm de
diámetro de cultivos del hongo de 8 días de edad,
tomados del margen del crecimiento activo del patógeno
con un sacabocados, todos los tratamientos se
incubaron a 26ºC en una incubadora digital (marca
WTB binder). Se realizaron cuatro réplicas por tratamiento
utilizando para las repeticiones cuatro cajas
Petri de 10 cm de diámetro que contenían 20 mL de
PDA modifi cado con cada producto, con un diseño
estadístico completamente al azar.
variables evaluadas. Siguiendo la metodología
descrita por Mogollón & Castaño-Zapata (2010), con
algunas modifi caciones, se evaluaron las siguientes
variables:
a) Crecimiento micelial (mm): se midió diariamente
con una regla, para determinar el diámetro
del crecimiento micelial del patógeno en cada
tratamiento, hasta que el hongo en las cajas Petri
del testigo absoluto las cubrió por completo.
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Luz Adriana Osorio Gutiérrez, Jairo Castaño Zapata, Luis Bernardo Gutiérrez Ríos
b) tasa de crecimiento (cm día -1 ): se determinó
mediante la fórmula propuesta por Mead (1993),
citado por Benítez et al. (2007):
tC= (Cf-Ci) / (tf-ti),
Donde:
Cf = Crecimiento fi nal
Ci= Crecimiento inicial
Tf= Tiempo fi nal
Ti= Tiempo inicial
c) Esporulación (conidios . mL -1 ): se determinó
utilizando una cámara de Neubauer (marca Bright
line), se tomaron alícuotas de 20 µL a partir de
una solución de conidios del patógeno, obtenida
por la adición de 20 mL de agua destilada estéril a
cada caja Petri, e inmediato raspado del hongo
con un asa redonda, y fi nalmente, se determinó
el número de conidios utilizando la siguiente
fórmula (Castaño-Zapata, 1998):
X= e x 2000,
Donde:
X= Nº de esporas . mL -1 ; E= Esporas en los 5
cuadrados de 1mm²
d) Germinación (%): se tomaron alícuotas de 20
µL a partir de una suspensión de conidios, que
resultó de la adición de 20 mL de agua destilada
estéril y posterior raspado del micelio del hongo
de cada caja Petri a evaluar; se sembraron en cajas
Petri servidas con Agar bacteriológico y 24 h
después de la siembra se contaron con la ayuda
de un microscopio compuesto de luz (marca LW
Scientifi c Revelation III), utilizando el objetivo
de 40X el número de conidios germinados de
un total de 100 conidios elegidos al azar. Un
conidio se consideró germinado cuando el tubo
germinativo alcanzó el doble de la longitud del
conidio.
análisis estadístico. A las variables evaluadas se les
realizó el análisis de varianza y la prueba de comparación
de medias de Tukey al 5% de probabilidad,
mediante el programa estadístico SAS (Statistical
Analysis System), North Carolina, 2009. Versión 9.0.
ResULtaDOs Y DisCUsiÓN
Los análisis de varianza indicaron diferencias altamente
signifi cativas entre tratamientos 21 días después de
establecido el experimento (P = 0, 0001).
La prueba de comparación de medias de Tukey al
5% para todas las variables analizadas no mostró
diferencias signifi cativas entre los tratamientos con
benomil en las tres dosis evaluadas y el tratamiento
con lixiviado de raquis con el 50% de agua evaporada.
Con respecto a los demás tratamientos si se encontraron
diferencias estadísticas signifi cativas (Tabla 1).
En cuanto a efectividad se destacan los tratamientos
con benomil como los mejores donde la respuesta
de todas las variables fue de cero, seguidos por el
tratamiento con lixiviado concentrado al 50%. Los
valores más altos para las variables de crecimiento
micelial, tasa de crecimiento y germinación se dieron
con el tratamiento de lixiviado sin evaporar y el testigo
absoluto, en el caso de la variable esporulación, los
mayores valores se presentaron con los lixiviados sin
evaporar seguido por el tratamiento con captan a la
mitad de la dosis comercial (Tabla 1).

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Efi cacia in-vitro de lixiviados de plátano sobre Fusarium oxysporum Schlecht...
tabla 1. Efecto del lixiviado de raquis de plátano Dominico Hartón sobre el crecimiento micelial, tasa de crecimiento,
esporulación y germinación de Fusarium oxysporum 21 días después de la siembra en Papa-Dextrosa-Agar.
tratamiento Crecimiento
micelial (mm)
tasa de
crecimiento
(cm/día)
variables de respuesta
Esporulación
(conidios . mL -1 )
Germinación (%)
Benomil 0,6 g . L -1 0 d* 0 d 0 d 0 d
Benomil 0,3 g . L -1 0 d 0 d 0 d 0 d
Benomil 1,2 g . L -1 2,62 d 0,02 d 0 d 0 d
Lixiviado con
el 50% de agua
evaporada
3,87 d 0,02 d 0 d 0 d
Captan 5 g . L -1 28,25 c 0,14 c 1.109.000 bcd 74 c
Captan 2,5 g . L -1 31,50 c 0,15 c 582.000 cd 78 bc
Captan 1,25 g . L -1 36, 25 c 0,18 c 1.944.600 ab 85,7 ab
Lixiviado sin
evaporar
67,50 b 0,33 b 3.047.600 a 90,2 a
testigo 79,50 a 0,39 a 1.787.000 abc 95 a
*Valores promedio seguidos por letras diferentes indican diferencias signifi cativas entre tratamientos.
Referente a los valores promedio del crecimiento micelial
(mm) para los mejores tratamientos con benomil
con todas las dosis evaluadas y lixiviado de raquis con
el 50% de agua evaporada estuvieron entre 2,62 y 3,87
mm, en comparación con los demás tratamientos,
principalmente, los lixiviados sin evaporar y el testigo
absoluto que registraron los valores superiores de
67,50 y 79,50 mm, respectivamente (Figura 1). Lo
cual coincide con lo encontrado por Castaño-Zapata
et al. (2007), en evaluaciones in vitro de lixiviado de
raquis de plátano con diferentes concentraciones
(0, 25, 50 y 75%) sobre Botryotinia fuckeliana de Bary
(Whetzel), quienes observaron que a medida que se
concentraba el lixiviado se incrementaba el efecto
inhibitorio sobre el crecimiento micelial del hongo
cuando fue cultivado en PDA, obteniendo muy buenos
resultados con las concentraciones de 50 y 75%.
Los valores promedio de la tasa de crecimiento para
los tratamientos que incluyeron a benomil con todas
las dosis y lixiviado de raquis concentrado al 50%
estuvieron por debajo de 0,02 cm día -1 , comparados
con los tratamientos con captan, lixiviado sin evaporar
y el testigo absoluto, cuyos valores estuvieron por
encima de 0,14 cm día -1 lo cual demostró la efectividad
de los lixiviados concentrados al 50% Respecto
a la esporulación, ésta fue inhibida totalmente con
benomil y lixiviado con el 50% de agua evaporada,
en comparación con lixiviado sin evaporar y captan
con la dosis más baja, que registraron los valores
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Luz Adriana Osorio Gutiérrez, Jairo Castaño Zapata, Luis Bernardo Gutiérrez Ríos
promedio más altos, lo que parece indicar que los
lixiviados sin evaporar estimulan la esporulación de
F. oxysporum (Tabla 1).
En cuanto al porcentaje de germinación de conidios,
los resultados fueron similares a los de las variables
arriba mencionadas (Tabla 1).
Los resultados demostraron que mediante evaporación
del 50% de agua del lixiviado, se redujo el
crecimiento micelial y la tasa de crecimiento en un
95%, y en 100% la esporulación y germinación del
hongo, efecto similar al de benomil. Dichos resultados
coinciden con los obtenidos por Mogollón
& Castaño-Zapata (2010) quienes al evaluar in vitro
lixiviados de raquis de plátano Dominico Hartón con
el 70% y 90% de agua evaporada sobre Paracercospora
fi jiensis (Morelet) Deighton, hallaron disminuciones
signifi cativas en el número y tamaño de colonias,
esporulación y porcentaje de germinación conidial,
encontrando la mayor inhibición del hongo en la
medida que se concentraba el lixiviado, efectos estadísticamente
similares al de propiconazole.
CONCLUsiONes
• El lixiviado con el 50% de agua evaporada disminuyó
signifi cativamente el crecimiento micelial
y la tasa de crecimiento de Fusarium oxysporum, la
esporulación y por consiguiente la germinación,
fueron inhibidas por completo.
• El efecto del lixiviado con el 50% de agua evaporada
fue similar estadísticamente al de benomil
con todas las dosis evaluadas, las cuales inhibieron
completamente el desarrollo de F. oxysporum.
• Captan con todas las dosis evaluadas no fue efectivo
para el manejo in vitro del hongo, en algunos
casos teniendo un comportamiento similar al
lixiviado sin evaporar y al testigo.

agron. 20(1): 17 - 25, 2012
Efi cacia in-vitro de lixiviados de plátano sobre Fusarium oxysporum Schlecht...
Figura 1. Crecimiento micelial de Fusarium oxysporum 21 días después de la siembra en PDA modifi cado con cada tratamiento. T1.
Lixiviado de raquis de plátano sin evaporar. T2. Lixiviado de raquis de plátano con el 50% de agua evaporada. T3. Captan
2,5g . L -1 T4. Captan 1,25g . L -1 .T 5. Captan 5g . L -1 .T 6. Benomil 0,6g . L -1 . T 7. Benomil 0,3g . L -1 .T 8. Benomil 1,2g . L -1 .
T9. Testigo absoluto.
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Luz Adriana Osorio Gutiérrez, Jairo Castaño Zapata, Luis Bernardo Gutiérrez Ríos
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