1 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL FACULTAD DE ...
1 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL FACULTAD DE ...
1 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL FACULTAD DE ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
<strong>UNIVERSIDAD</strong> <strong>NACIONAL</strong> <strong><strong>DE</strong>L</strong> <strong>LITORAL</strong><br />
<strong>FACULTAD</strong> <strong>DE</strong> CIENCIAS VETERINARIAS<br />
CÁTEDRA <strong>DE</strong> TERIOGENOLOGIA<br />
Trabajo Práctico N° 10<br />
Tema: RECOLECCIÓN <strong>DE</strong> SEMEN E INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN<br />
EQUINOS<br />
Objetivos<br />
Que el alumno logre:<br />
- reconocer las utilidades de la técnica de IA en equinos.<br />
- comprender ventajas y desventajas de la técnica.<br />
- identificar las distintas formas de utilización del semen equino.<br />
- identificar y enumerar cronológicamente los pasos a seguir durante el<br />
recolección de semen equino.<br />
- identificar y enumerar cronológicamente los pasos a seguir en los distintos<br />
métodos de inseminación artificial en yeguas.<br />
- conocer las perspectivas futuras de la técnica.<br />
Recursos auxiliares<br />
Tizas, pizarrón, proyector de multimedia, diapositivas.<br />
Materiales<br />
Padrillo entero para realizar extracción. Yegua en celo. Potro de salto. Vagina artificial.<br />
Jeringa con émbolo de plástico (el émbolo de goma mata los espermatozoide). Pipetas de<br />
IA. Botas. Guantes obstétricos. Guardapolvo u overol.<br />
Contenidos<br />
1.- Introducción<br />
2.- Recolección, evaluación y procesamiento del semen<br />
2.1.- Recolección<br />
2.2.- Evaluación<br />
2.3.- Factores que afectan la conservación<br />
2.4.- Procesamiento<br />
3.- Inseminación artificial en equinos<br />
3.1.- Selección de yeguas<br />
3.2.- Manejo de la inseminación<br />
3.3.- Momento de la inseminación<br />
3.4.- Técnica de inseminación<br />
3.5.- Perspectivas futuras<br />
4.- Bibliografía<br />
1
1.- INTRODUCCIÓN<br />
La IA consiste en recolectar semen de un padrillo y depositarlo en el útero de la yegua, sin<br />
la intervención del macho. Como toda técnica presenta ventajas y desventajas.<br />
Entre las ventajas se incluyen mejor aprovechamiento de los reproductores para servir<br />
mayor número de yeguas, incluso a aquellas con alteraciones músculo-esqueléticas<br />
adquiridas, de temperamento difícil o susceptibles a endometritis, además de favorecer el<br />
control de las enfermedades venéreas. Otra ventaja es el aumento de la mejora genética en<br />
la crianza. La interrupción de las carreras o la participación en las exposiciones no es<br />
necesaria. Con ésta técnica se dispone de semen de buena calidad en zonas alejadas de<br />
donde se localizan los donantes, ello evita el traslado de la yegua con o sin potrillo al pié<br />
hasta el reproductor, permitiendo de ésta forma extender la temporada de servicio a otro<br />
hemisferio. Permite la detección precoz de eventuales problemas del semen. Además,<br />
ayuda a mejorar la fertilidad y facilita los programas de selección. En la especie equina es<br />
un buen método de control del estrés sexual, que no es tan deseado en el “celo del potro” y<br />
en yeguas “vírgenes” y, aunque también tiene desventajas y limitaciones, éstas se reducen<br />
al mínimo si es practicada por personal cualificado y adiestrado.<br />
Por otro lado, es una técnica que tiene una vertiente terapéutica y está indicada en<br />
determinados casos de infertilidad; por ejemplo en algunas yeguas viejas y/o con<br />
deficiencias uterinas, en las que es contraproducente la cubrición, ya que son incapaces de<br />
eliminar la contaminación post coito que induce toda cubrición en un tiempo prudencial<br />
para la viabilidad del embrión. En estos animales se recomienda la inseminación, ya que se<br />
reduce la intensidad de la respuesta inflamatoria del útero poscubricion, incrementándose<br />
así las posibilidades de gestación.<br />
Entre las desventajas atribuidas a la IAE se incluyen la reducción del pool de genes, mayor<br />
oportunidad de fraudes, riego para las personas que realizan la recolección de semen, y la<br />
variación significativa de la calidad del semen disponible. Muchas de estas desventajas<br />
pueden ser eliminadas con medidas simples.<br />
Uno de los factores que ha influido, entre otros, en el rechazo a inseminar a las yeguas es la<br />
creencia de que es menos eficaz que la monta del caballo porque se tiene aún la idea de<br />
que, cuanto más cubra el caballo a la yegua, con más seguridad se queda ésta preñada. Otro<br />
error muy frecuente es comparar la eficacia de la IA en la especie equina con la de vacuno;<br />
así, se cree que el semen congelado del caballo es similar al del toro en cuanto a fertilidad<br />
y rendimiento espermático. Sin embargo, en la especie equina la fertilidad del semen<br />
congelado es muy inferior a la del toro, ya que los espermatozoides son más sensibles a la<br />
congelación-descongelación. Esto, unido a que el eyaculado de un caballo fértil no alcanza<br />
la concentración y porcentaje de espermatozoides móviles normales de un toro, provoca<br />
que el rendimiento de un caballo que congele bien sea muy inferior al de un toro.<br />
Así mismo, existen claras diferencias entre los machos en la respuesta a la congelacióndescongelación,<br />
de tal modo que aproximadamente sólo un 25-30% de los sementales<br />
producen esperma que tiene a la descongelación una aceptable capacidad fecundante,<br />
mientras que en el resto se pueden diferenciar los que tienen “congelabilidad” moderada y<br />
mala. Esto, unido a que cada yegua necesita al menos entre dos a tres dosis, según la<br />
frecuencia a la que se le someta a exploraciones ecográficas, se comprende que la<br />
rentabilidad de la técnica no es tan importante como en vacuno. Sin embargo, con los<br />
nuevos métodos de inseminación uterina profunda se está consiguiendo buena fertilidad<br />
con dosis que llevan menos cantidad de espermatozoides, con lo cual se pueden inseminar<br />
más yeguas por eyaculado.<br />
2
2.- RECOLECCIÓN, EVALUACIÓN Y PROCESAMIENTO <strong><strong>DE</strong>L</strong> SEMEN<br />
2.1.- Recolección<br />
La recolección de semen se lleva a cabo mediante diferentes técnicas, entre las cuales se<br />
encuentran la estimulación manual, vagina artificial (VA) e inducción farmacológica,<br />
siendo la VA el método más utilizado.<br />
VAGINA ARTIFICIAL: existen varios modelos, todos tratan de imitar las condiciones de<br />
temperatura y presión de la vagina de la yegua, estímulos necesarios para desencadenar la<br />
eyaculación.<br />
-Modelos: Hannover, Missouri, Nishikawa, Cambridge y el polaco.<br />
Figura 1: Partes de una vagina artificial Missouri<br />
Para la recolección de semen es necesaria la presencia de una yegua en celo (o no), con<br />
quistes ováricos o tumores de la granulosa, ovariectomizadas con o sin tratamiento<br />
estrogénico. Los padrillos pueden ser entrenados para saltar sobre un maniquí,<br />
minimizando el riesgo de accidentes y evitando muchas veces la presencia de la yegua en<br />
celo. La recolección puede realizarse tanto en un área cubierta como al aire libre. La monta<br />
del macho responde a una cadena de reflejos copulatorios, por lo cual se debe imitar el acto<br />
de la monta natural.<br />
Pasos a seguir:<br />
El primer paso, es el lavado del pene con solución fisiológica (o agua) tibia y<br />
posterior secado.<br />
Luego, se realiza la excitación previa del macho, acercándolo a la hembra fijada<br />
con maneas y protegida. El salto sólo se permite después de la completa erección<br />
del pene.<br />
El operador se aproxima con la VA, toma el pene y lo desvía ligeramente,<br />
permitiendo de esta forma que el macho introduzca el pene en la VA, la cual se<br />
debe mantener firme simulando el comportamiento de la yegua. La mano del<br />
operador colocada en la base del pene permite reconocer el momento de la<br />
eyaculación.<br />
Luego del descenso, el pene debe ser higienizado con agua o solución fisiológica<br />
tibia.<br />
Inmediatamente después de la recolección, el semen es llevado al laboratorio.<br />
2.2.- Evaluación<br />
Examen macroscópico:<br />
- Volumen<br />
- Color<br />
3
- Consistencia<br />
- Olor<br />
- pH<br />
Examen microscópico:<br />
- Motilidad<br />
- Concentración<br />
- N° total de EZ<br />
- Relación vivos/muertos<br />
- Morfología<br />
- Hipo-ósmosis<br />
2.3.- Factores que afectan la conservación<br />
Shock térmico<br />
Es el conjunto de alteraciones que sufren los espermatozoides cuando son sometidos a un<br />
enfriamiento rápido de 20°C a 5°C. Incluyen: alteración y pérdida de la motilidad,<br />
reducción del metabolismo, lesión del acrosoma y de la membrana plasmática, y pérdida<br />
de componentes intracelulares.<br />
Estos efectos son más evidentes en el congelamiento, y pueden ser reducidos controlando<br />
los intervalos críticos de temperatura entre 19°C y 8°C, y por medio de la adición de<br />
lípidos o proteínas al diluyente del semen.<br />
Plasma seminal<br />
A pesar de poseer diversas funciones (modula la inflamación inducida por la monta, inhibe<br />
la quimiotaxis y la fagocitosis de polimorfonucleares, protegiendo los EZ en el útero de la<br />
yegua) el plasma seminal no es el medio ideal para almacenar EZ, al tener un efecto<br />
negativo en la motilidad durante la conservación prolongada a bajas temperaturas. La<br />
proporción del plasma puede ser reducida mediante dilución, centrifugación o recolección<br />
fraccionada del eyaculado con una VA abierta.<br />
Centrifugación<br />
Método utilizado para separar el plasma seminal de la fase rica en espermatozoides, puede<br />
producir una pérdida del 10-20% de EZ en el sobrenadante, reducir la motilidad o<br />
aumentar el número de alteraciones morfológicas.<br />
Para reducir dichos efectos se puede disminuir la fuerza centrífuga, acortar el tiempo o usar<br />
diluyentes en la centrifugación.<br />
Diluyentes<br />
Contiene componentes protectores que permiten la supervivencia espermática, y aumentan<br />
el volumen de la dosis inseminante, pero no deben usarse para compensar la falta de<br />
higiene en la recolección o procesamiento del semen.<br />
2.4.- Procesamiento<br />
Semen fresco<br />
Utilizado para la IA debe emplearse antes de los 30 minutos de recolectado. Si la IA se<br />
realiza hasta 2 horas después de la recolección, se aconseja una dilución de 1:1 o 1:2,<br />
generalmente con diluyente a base de leche descremada en polvo.<br />
4
Semen refrigerado<br />
Actualmente, es la técnica más rentable. Entre las dificultades se encuentran la longevidad<br />
relativamente corta del semen (24-48hs), y no todos los padrillos producen semen que<br />
toleran la refrigeración y conservación.<br />
El semen debe ser mezclado con el diluyente pre-calentado (37°C) 2 a 5 minutos después<br />
de la eyaculación, en una relación 1:1 o 1:2. La concentración final de 25 a 50 x 10 6 EZ/ml<br />
favorece la supervivencia. Una vez diluido, puede ser enfriado de 37°C hasta la<br />
temperatura de almacenamiento que varía entre 6°C y 4°C, mediante el uso de unidades de<br />
refrigeración (ejemplo: Equitaner R , mantiene la temperatura 4°C a 6°C por 36hs aprox.).<br />
Para IA se emplea entre 10 y 25 ml de semen refrigerado (dosis de 250 a 500 x 10 6 EZ con<br />
movimiento progresivo).<br />
Semen congelado<br />
La criopreservación del semen implica almacenarlo por debajo de 0°C, utilizando<br />
normalmente al nitrógeno líquido (-196°C). El problema, es la sobrevivencia espermática<br />
después de la descongelación, que está limitada al 50%. Sumado a esto, otro factor es la<br />
variación en la congelabilidad del semen entre padrillos.<br />
La dilución del semen a ser congelado es 1:1 o 1:2, y sigue los mismos criterios utilizados<br />
para refrigerar. Para la IA está indicada una dosis de 250 x 10 6 EZ motiles en pajuelas de<br />
0,5ml, pero existen diversas opiniones utilizando dosis entre 400 y 800 x 10 6 EZ/ml.<br />
3.- INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN EQUINOS<br />
3.1.- Selección de yeguas<br />
Se indica un examen ginecológico a toda yegua destinada a la IA, con el fin de valorar la<br />
integridad anatómica y funcional del aparato reproductor, descartando aquellas que<br />
presenten alteraciones que reduzcan la fertilidad, o tratándolas cuando sea necesario, para<br />
mejorar las perspectivas de concepción.<br />
3.2.- Manejo en la Inseminación<br />
Cuando se emplea la inseminación artificial es necesario contar con especialistas en<br />
reproducción equina que determinen si la yegua es apta para ser inseminada y, si lo fuera,<br />
deberán determinar el momento óptimo, coordinando la inseminación con la petición del<br />
esperma al centro correspondiente o elaborando la dosis de esperma refrigerado. Si se<br />
emplea esperma congelado no es necesaria esta última fase, ya que las dosis sólo se<br />
descongelan en el momento de su utilización.<br />
3.3.- Momento de la Inseminación<br />
El manejo reproductivo de la yegua que va a ser inseminada es diferente al de hembras de<br />
otras especies, ya que tiene características propias en su actividad ovárica y sexual que<br />
determinan un celo muy largo, con máxima fertilidad al final del mismo.<br />
La inseminación debe ser realizada durante el estro, lo más próximo posible a la ovulación,<br />
con celo natural o inducido con análogos de la prostaglandina.<br />
La exploración rectal mediante ecografía de sus ovarios y útero, repetida durante el tiempo<br />
del celo, es necesaria para determinar el momento más indicado de la IA, valorando el<br />
aspecto del folículo preovulatorio, midiendo su tamaño y forma, grosor de sus paredes y<br />
ecogenicidad del sedimento del líquido folicular. Cuando se emplea esperma congelado, se<br />
5
es aún más estricto en la selección y manejo de la yegua, llegando a someterla a<br />
exploraciones ecográficas seriadas cada seis horas.<br />
Además, el momento para realizar la inseminación artificial dependerá del tipo de esperma.<br />
Con refrigerado se realiza normalmente por exploración rectal ecográfica del aparato<br />
reproductor para identificar en un ovario la presencia de un folículo preovulatorio (FP), de<br />
tal manera que si está en celo y/o tiene un FP se insemina por primera vez y se repite a las<br />
24 horas hasta que termine el celo (Palma, G.: 24hs antes a 12hs después de la ovulación).<br />
El porcentaje medio de fertilidad obtenido es del 60% o mayor. Sin embargo, cuando se<br />
quiere inseminar con esperma congelado conviene que la dosis se deposite en el útero entre<br />
las 6-8 horas anteriores a la ovulación o las 6 posteriores (Palma, G.: 12hs antes a 12hs<br />
después de la ovulación). Para poder predecir el momento de la misma es imprescindible el<br />
examen ecográfico seriado del ovario activo. La fertilidad del congelado varía mucho entre<br />
donantes (20-100%) y está influido por la hembra y la técnica de inseminación.<br />
3.4.- Técnica de Inseminación<br />
Preparación de la yegua: debe ser fijada, la cola vendada y desviada. La región perineal<br />
debe limpiarse y secarse.<br />
Preparación del semen: El semen fresco, refrigerado o descongelado se coloca en una<br />
jeringa con émbolo plástico (la goma puede ser tóxica para los espermatozoides). La<br />
jeringa es fijada a una pipeta de IA.<br />
Métodos:<br />
a) IA con control manual (rectovaginal): el operador introduce una mano en la vagina, la<br />
cual conduce y protege la pipeta, y la otra mano colocada vía rectal sirve como guía.<br />
La mano con guante y lubricada se introduce (luego de separar los labios vulvares) a<br />
través del vestíbulo; en la extremidad craneal de la vagina se localiza el cérvix, se<br />
introduce el dedo índice, y sobre éste se dirige la pipeta hacia el interior del útero,<br />
depositando la dosis seminal en el cuerpo o preferentemente en el cuerno del útero.<br />
b) Inseminación bajo control visual: mediante la ayuda de un especulo de<br />
Polansky y una pinza de Albrechtsen.<br />
Tradicionalmente, al inseminar se deja la dosis de semen en el cuerpo del útero. Sin<br />
embargo, actualmente, la tendencia es realizar la inseminación intrauterina profunda,<br />
porque permite incrementar los porcentajes de fertilidad y reducir la concentración de<br />
espermatozoides de la dosis. Esta variante está más indicada cuando se emplea esperma<br />
congelado (con menos capacidad fecundante).<br />
Resumiendo: Inseminar solo yeguas con muy buena condición corporal bien alimentadas,<br />
realizar los chequeos periódicos conforme al protocolo, verificar que el útero tenga algo de<br />
edema y crecimiento endometrial, inseminar la yegua cuando el folículo se encuentre entre<br />
35mm y 42 mm. Chequear siempre ovulación y a los 15 días realizar la ecografía para<br />
hacer el diagnostico de gestación.<br />
3.5.- Perspectivas futuras<br />
Bajas dosis<br />
El uso de pequeñas dosis inseminantes es importante cuando el número de<br />
espermatozoides es reducido, como es el caso de padrillos subfértiles, semen<br />
criopreservado o sexado, y tal vez para reducir la incidencia de endometritis pos-servicio.<br />
6
Para mejorar la tasa de preñez, se deposita cerca a la papila útero-tubárica del cuerno<br />
ipsilateral al ovario que contiene el folículo pre-ovulatorio.<br />
Existen 2 técnicas:<br />
1) Inseminación histeroscópica: con la ayuda de un videoscopio.<br />
2) Inseminación con pipeta flexible.<br />
Con 1 a 25 x 10 6 EZ con movimiento progresivo en volúmenes entre 20μm a 1000μm (20-<br />
200μm semen fresco y 250-500μm semen congelado) se obtuvieron buenas tasas de<br />
gestación.<br />
Inseminación artificial con espermatozoides del epidídimo<br />
Esta técnica resulta útil a la hora de preservar el material genético de machos valiosos que<br />
mueren o deben ser castrados. También es importante para las especies en vías de<br />
extinción, asegurando la variabilidad genética en cautiverios cerrados.<br />
El factor limitante es que el volumen total de espermatozoides almacenados en el<br />
epidídimo es frecuentemente bajo para inseminar.<br />
En las 2 colas del epidídimo de un padrillo normal es posible obtener 50 a 60 x 10 9 EZ.<br />
Los epidídimos pueden ser transportados en los testículos a 4°C durante 72hs a 96hs postmortem,<br />
con poca o ninguna pérdida de la motilidad y/o viabilidad.<br />
La recolección se realiza mediante un lavado retrógrado del epidídimo con 10 ml de<br />
diluyente; la adición de plasma seminal mejoró la motilidad progresiva inicial, pero no<br />
hubo cambios pasadas las 6 hs.<br />
Los espermatozoides de la cola pueden ser congelados. A pesar de que hubo una<br />
disminución de la motilidad después de descongelados, fue semejante a la observada en el<br />
semen eyaculado.<br />
3.6.- Cuidar las yeguas luego de inseminadas<br />
Una yegua puede quedar preñada con 2 ecografías y una inseminación, siempre que se<br />
manejen muy bien las variables, condición corporal, manejo y alimentación. Algunos<br />
aspectos a tener en cuenta luego de inseminar las yeguas son:<br />
- Alimentación: pasturas, sales, suplementos vitamínicos.<br />
- Instalaciones: utilizar cercas eléctricas, los límites de linderos deben ser de madera.<br />
- Operarios: realizar periódicos chequeos de rutia en los potreros y linderos.<br />
5.- BIBLIOGRAFÍA<br />
- ALONSO, A.; PINTO, M.; GAMBAROTTA, M; MIRAGAYA, M. (2007). Obtención<br />
de Preñeces en Equinos por Primoinseminación utilizando Semen Congelado-<br />
Descongelado a Dosis. Premio Dirección de Actividades Hípicas 2007<br />
Investigación en Reproducción Equina.<br />
http://argos.portalveterinaria.com/noticia/4662<br />
http://www.minagri.gob.ar/SAGPyA/ganaderia/actividades_hipicas/03-informes/<br />
- PALMA, G.A. (2008). Biotecnología de la Reproducción. Segunda Edición. Ed. Repro<br />
Biotec, Mar del Plata, Argentina.<br />
- Portal de consulta web: http://www.equine-reproduction.com/articles/index.shtml<br />
- RODRIGUEZ ARTILES, I. (2009). Inseminación Artificial o monta dirigida en la<br />
yegua. Profesora Titular de Universidad Departamento de Medicina y Cirugía Animal,<br />
Hospital Clínico Veterinario de la Universidad de Córdoba.<br />
7