Biodisponibilidad de los flavonoides de la ... - Cerveza y Salud

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d o s 2.1.1. REACTIVOS MATERIALES Y MÉTODOS Los reactivos para las soluciones tamponadas, enzimas, coenzimas, DNA de timo de ternera, 8-Hydroxydeoxyguanosina (8-OHdG), ácido L-ascórbico, ácido gálico, catequina 6-hydroy-2,5,7,8, -tetramethylchroman-2-carboxylic acid (Trolox) son proporcionados por Sigma Chemical Co (St Louis, MO, USA). La adriamicina fue suministrada por Pharmacia-Upjohn (Milan, Italia), el N, N-dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride (DMPD) de Fluka (Seelze, Germany), la agarosa de Bio-Rad (Richmond, CA, USA), disolventes y otros reactivos de ScharLau (Barcelona, España) y Merck (Darmstadt, Germany). Los kits de antioxidantes totales son de Randox (United Kingdom, BT29 4QY), los de la 8-OHdG y MDA+ HAE son de OXIS, (OXIS Health Products, Inc. 6040 N Cutter Circle, Suite 317 Portland, OR 97217-3935 USA) y los de la LDL oxidada son de Biomédica Medizinprodukte (GMBH and Co KGA-1210, Wien). El agua utilizada en todas las determinaciones es de grado Milli-Q (Millipore). 2.1.2. ANIMALES Se utilizan ratas Wistar hembras de 3-4 meses de edad y peso comprendido entre 250- 300 g, instaladas en jaulas individuales y condiciones apropiadas del animalario (ciclos de 12h/12h luz y oscuridad a temperatura de 22ºC), alimentadas con dieta estándar IPM R-20 comercializada por Panlab (Barcelona, España) y agua ad libitum. 2.1.3. CERVEZA Las cervezas que empleamos, tanto rubia como sin alcohol, están comercializadas en España. Se mantienen refrigeradas hasta su utilización, e inmediata- 44 2.1. MATERIALES
mente, antes de ella, se procede a su análisis para prevenir una posible oxidación de los fenoles. Las muestras que se usaron como suplemento dietético se obtienen a partir de una concentración en vacío a una temperatura inferior a 35ºC (10 veces concentradas de la cerveza original). 2.2. MÉTODOS 2.2.1. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LAS CERVEZAS SEGÚN EL MÉTODO QUÍMICO DMPD Se utiliza el método de Fogliano et al. (1999). Este método se basa en la capacidad que tienen los polifenoles de reaccionar con los radicales libres. Se usa el N,N-dimetil-p-fenilendiamina (DMPD) como reactivo, compuesto que, en presencia de un agente oxidante, da lugar al radical DMPD con una coloración púrpura (medible a 505 nm). La adición de un agente antioxidante capaz de transferir hidrógeno provoca una decoloración de la solución. De este modo, la decoloración del medio es proporcional a la cantidad de agente antioxidante presente en él. Se toma 1mL de cromóforo y se añade 50 µL de muestra o de patrón (vitamina C o Trolox). La reacción tiene lugar a 25ºC, manteniéndose en agitación continua durante 10 minutos. Tras este tiempo se procede a la medida del valor de la absorbancia a 505 nm (Af), determinándose además el valor de absorbancia del cromóforo inicial (Ao). A partir de estos valores de absorbancia se define un parámetro que es el porcentaje de inhibición: % Inhibición 505 nm = (1-A f /A o )*100 Las curvas de calibrado se calculan con soluciones estándar de Trolox (un análogo de α-tocoferol), en un rango de concentraciones de 0,2 a 6 µg, y de vitamina C des- 45 d o s
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50 Hollman, P. C. and Katan, M. B.
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75 Piendl, A. (1990). The role of b
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99 Van Acker, S., Boven, E., Kuiper
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