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(SLP): aplicación del FISH en LLC y MM

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unUniversidad de NavarraDiagnóstico citogenéticogenético de LLC y MMII REUNIONANUAL


unUniversidad de Navarra1. Establecer un protocolo de trabajo para el estudio genético demuestras de LLC al diagnóstico• determinar el tipo de muestra óptimo para el cultivo• desarrollar un ensayo multi-FISH• optimizar la técnica de detección de mutaciones en losgenes IgV H


CariotiposSPSP + TPAMOMO + TPA50,0%23,5%32,5%3,0%NuloNormalAlteradounUniversidad de Navarra


unUniversidad de NavarraB.Ensayo Multi-FISHCEP 12 DNA Probe KitRP11-199F11 y RP11-241D13(TP53)(ATM)LSI D13S25


Trisomía 12 del(11)(q22.3) del(13)(q14.3)ABCD E FunUniversidad de Navarra


unUniversidad de NavarraC.Hipermutación somática1. Obtención de cDNA2. Amplificación genes IgV H3. Purificación PCRVH3+4. Secuenciación 5. Identificación del segmento reordenado yanálisishttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast98% de homología


unUniversidad de NavarraANALISIS GENETICO EN PACIENTES CON LLCEn la práctica……...


unUniversidad de NavarraNUEVA MUESTRA AL DIAGNÓSTICOMuestra de SP recogidasobre heparinaMuestra de SP recogidasobre EDTACULTIVO DE SPESTIMULADO CON TPAEXTRACCIÓN DE PBLsCARIOTIPODETECCIÓN DE HIPERMUTACIÓNSOMÁTICA GENES IgV HMULTI-FISH EN CÉLULAS FIJADASDEL CULTIVO ESTIMULADO


unUniversidad de NavarraINFORME FISHSONDAS UTILIZADAS:p53 (17p13.1) (Sonda no comercial)ATM (11q22.3) (Sonda no comercial)CEP 12 (centrómero12) (Vysis)LSI D13S25 (13q14.3) (Vysis)RESULTADOS:200 núcleos en interfase de muestra del paciente,para cada sonda,del(17)(p13) negativodel(11)(q22.3) 57% con delecióntrisomía 12 negativodel(13)(q14) x2 44% deleción homocigóticadel(13)(q14) 46,5% deleción heterocigótica


unUniversidad de NavarraINFORME HIPERMUTACIÓNTÉCNICA:(Hamblin, et al Blood.1999; 94:1848-1854)RESULTADO:MONOCLONALFamilia: 3Segmento: 09Porcentaje: 100% de homologíaNO MUTADO


unUniversidad de NavarraINFORME HIPERMUTACIÓNTÉCNICA:(Hamblin, et al Blood.1999; 94:1848-1854)RESULTADO:MONOCLONALFamilia: 4Segmento: 04Porcentaje: 90,63% de homologíaMUTADO


unUniversidad de NavarraDiagnóstico genético delMM


El curso clínico está determinado por eventosgenéticos de las células tumorales……….unUniversidad de NavarraDiagnóstico genético delMM(por el momento utilizamoscariotipo y/o FISH)El diagnóstico con arraystodavía no es utilizado en larutina


Diagnóstico citogenético del MMMOHeparinaCariotipounUniversidad de Navarra


unUniversidad de NavarraConventional Chromosome Analysisin Multiple Myeloma


Conventional Chromosome Analysisin Multiple Myeloma70%Normal karyotypeDepartment ofGeneticsUniversity ofNavarraInstitut fürHumangenetikunUniversitätsklinikumKielUniversidad de Navarra


un Universidad de Navarra


unUniversidad de NavarraRecommendations for FISH in multiple myelomaLondon on March 11th 2005• It is recommended that all labs should test for deletion 13, t(11;14)and t(4;14) and include p53 deletion wherever possible.• The use of the Abbott/Vysis 5, 9, 15 probe set is encouraged to detecthyperdiploidy.


Diagnóstico citogenético del MMMOHeparinaCariotipoSegún % CPCP >15-20%FISH MM13qTP53IGH5, 9, 15 probeunUniversidad de Navarra


Diagnóstico citogenético del MMMOHeparinaCariotipoSegún % CPCP >15-20%FISH MMt(11;14)(q13;q32) CCND1t(4;14)(p36;q32) FGFR3/MMSETt(14;16)(q32;q23) MAFt(14;20)(q11;q32) MAFBt(6;14)(p21;q32) CCND3t(6;14)(p25;q32) IRF4negativonegativopositivo13qTP53IGH5, 9, 15 probet(8;14)(q24;q32) MYCunUniversidad de Navarra


un Universidad de Navarra


CariotipoDiagnóstico citogenético del MMMOHeparinaSegún % CPMOEDTAMACS CPCP 15-20%FICTIONMACSHiperdiploidiaFISH MM13qTP53t(11;14)(q13;q32) CCND1t(4;14)(p36;q32) FGFR3/MMSETt(14;16)(q32;q23) MAFt(14;20)(q11;q32) MAFBt(6;14)(p21;q32) CCND3t(6;14)(p25;q32) IRF4negativopositivoIGH5, 9, 15 probet(8;14)(q24;q32) MYCunUniversidad de Navarra


MACS - magnetic cell sortingunUniversidad de NavarraCD138 (Syndecan-1)MicroBeadsfor Plasma CellIsolation


unUniversidad de NavarraDefinir pacientes alto riesgo: cariotipo, FISH, GEF,aCGH, B2m, PCLI,)2008 cambio, realismo ?? FUTUROINMEDIATO (definir pacientes dealto riesgo estimado en un 25% depacientes) Clínica Mayo•FISH t(4;14),t(14;16) ydel(17p)•Cariotipo paramonosomia/del 13q ehipodiploidia


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