XLI Congreso Anual de la Asociación Española para el Estudio del Hígado

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34 XLI Congreso Anual de la Asociación Española para el Estudio del Hígado

de la enoxaparina sobre la fibrosis y la hemodinámica hepática en

varios modelos experimentales de cirrosis.

Métodos: Utilizamos tres protocolos de cirrosis experimental en

ratas Sprague-Dawley macho: 1) CCl4 oral; 2) CCl4 inhalado; 3) Ligadura

del colédoco (LC). Los grupos (n = 8-15/grupo) recibieron tratamiento

diario con suero salino o con diferentes protocolos de enoxaparina

sc: a) 40 U/Kg de peso corporal desde la 8ª semana de

administración de CCl4, b) 180 U/Kg desde la 1ª u 8ª semana de CCl4,

y c) 180 U/Kg desde la 2a semana tras la LC. Se realizaron las siguientes

mediciones: 1) presión portal (vena ileocólica), 2) fibrosis

hepática (tinción de rojo Sirio y expresión de los genes Col1a1, Acta2

y Timp1 en hígado), 3) infección de líquido ascítico (cultivo en tioglicolato),

4) respuesta inflamatoria sistémica (niveles circulantes de

IL-6), y 5) disfunción endotelial (estudios de perfusión hepática exvivo

en ratas con cirrosis inducida por inhalación de CCl4).

Resultados: En comparación con los grupos control, las ratas con

cirrosis inducida por la administración orogástrica de CCl4 mostraron

una tendencia a una menor supervivencia y menor ganancia de

peso corporal, las cuales fueron agravadas por el tratamiento con

enoxaparina a dosis de 180 UI/kg (p < 0,01). La administración de

CCl4 oral también resultó en la alteración de diversos parámetros

analíticos (elevación de INR, AST, ALT, bilirrubina y disminución de

albúmina, glucosa y plaquetas), la cual no fue prevenida por el

tratamiento con enoxaparina. La administración de enoxaparina no

atenuó el aumento de presión portal en las ratas con cirrosis inducida

por la administración oral de CCl4 o por la LC respecto a sus

correspondientes controles (p < 0,001). El desarrollo de fibrosis, la

infección del líquido ascítico y los niveles circulantes de IL-6 tampoco

fueron influidos por la enoxaparina en ninguno de los modelos.

No se observaron efectos de la enoxaparina sobre la reactividad

vascular hepática salvo en aquellas ratas que recibieron

enoxaparina a dosis de 180 UI/Kg desde el inicio de la administración

de CCl4, las cuales presentaron valores más elevados de resistencia

venosa hepática con la exposición a dosis crecientes de acetilcolina

y de S-nitroso acetilpenicilamina (SNAP, ambos p < 0,05),

y un incremento de la resistencia sinusoidal tras la adición de SNAP

(p < 0,05).

Conclusiones: La administración crónica de enoxaparina no mejoró

la fibrosis hepática, la hipertensión portal o la disfunción endotelial

en diversos modelos experimentales de cirrosis hepática

avanzada en rata.

P-12. LA MELATONINA REDUCE LA RESPUESTA

INFLAMATORIA Y MODULA LA RESPUESTA INMUNE

Y LA VÍA DE LOS ESFINGOLÍPIDOS EN UN MODELO ANIMAL

DE FIBROSIS HEPÁTICA

B. González-Fernández a , B. San Miguel a , I. Crespo a , D.I. Sánchez a ,

J. Ortiz de Urbina b , M. Álvarez c , J. González-Gallego a

y M.J. Tuñón a

a

CIBEREHD, Instituto de Biomedicina, Universidad de León.

b

Servicio de Farmacia, Complejo Asistencial Universitario de

León. c Departamento de Sanidad Animal, Universidad de León.

Introducción: La fibrosis hepática es un proceso dinámico que se

desencadena en respuesta a la lesión hepatocelular crónica provocada

por diversas causas. Estudios recientes han indicado que la

respuesta inflamatoria e inmune, junto con la vía de los esfingolípidos

son mecanismos esenciales en la regulación del desarrollo de

la fibrogénesis hepática. La melatonina ha mostrado efectos protectores

en diversos modelos de daño hepático. El objetivo de este

estudio ha sido comprobar el papel de la melatonina sobre los mecanismos

implicados en la respuesta inflamatoria, inmune y en la

vía de los esfingolípidos en un modelo murino de fibrosis hepática.

Métodos: La fibrosis hepática fue inducida en ratones C57BL/6J

macho mediante la administración i.p. de CCl4 dos veces por semana

durante 4 y 6 semanas. Se administró MLT a dos dosis (5 y 10 mg/

Kg) i.p. diariamente a partir de la segunda semana de administración

del CCl4. Tras el sacrificio a las 4 y 6 semanas, se determinaron

los niveles de ARNm de citoquinas proinflamatorias (IL-6, IL-

1beta y TNF-alfa) y el complejo NLRP3 constituyente principal del

inflamasoma. Se determinó mediante western blot la expresión del

receptor Toll 4 (TLR4) implicado en el desarrollo de fibrosis hepática

en respuesta a la inflamación y daño hepático. Con relación a la

vía de los esfingolípidos, se evaluó mediante western blot la expresión

de SphK1, SphK2 y CERK puesto que se ha demostrado recientemente

su importancia en la progresión y desarrollo de la fibrosis,

junto con un marcador de inmunidad relacionado con esta vía

(NKG2D).

Resultados: Tanto a las 4 como a las 6 semanas de la administración

de CCl4 se observó un incremento en la expresión de IL-6,

TNF-alfa y TLR4. Estos niveles disminuyeron significativamente en

los animales que recibieron MLT. En el periodo de 4 semanas se

produjo un incremento en la expresión de IL-1beta y NLRP3 que

disminuyó con la MLT. La expresión de SphK1 y SphK2 aumentó significativamente

tras la administración de CCl4 tanto a las 4 como a

las 6 semanas, disminuyendo por el tratamiento con MLT. Por otro

lado, la reducción de la expresión de CERK producida tras la administración

de CCl4, tanto a las 4 como a las 6 semanas, no se produjo

en el grupo tratado con MLT. La expresión del NKG2D disminuyó

en los animales que recibieron CCl4, si bien tras el tratamiento

con MLT se recuperaban valores similares a los del grupo control de

forma significativa y dependiente de la dosis.

Conclusiones: El potencial antifibrótico de la melatonina se asocia

a su capacidad anti-inflamatoria, inmunomoduladora e inhibidora

de la vía de las esfingoquinasas que se produce desde las primeras

etapas de la inducción del daño hepático.

Financiado por la Junta de Castilla y León (LE337U14)

P-13. EL FÁRMACO ANTIRRETROVIRAL EFAVIRENZ ALTERA

LA DINÁMICA MITOCONDRIAL EN CÉLULAS HEPÁTICAS

HUMANAS

M. Polo a,b , F. Alegre a,b , A. Martí-Rodrigo a , A. Blas-García a,b,c ,

J.V. Esplugues a,b,c y N. Apostolova a,c,d

a

Departamento de Farmacología, Facultad de Medicina,

Universidad de Valencia. b FISABIO-Hospital Universitario Dr.

Peset, Valencia. c CIBERehd, Valencia. d Facultad de Ciencias de la

Salud, Universidad Jaime I, Castellón.

Introducción: La terapia combinada que actualmente se emplea

para el tratamiento de la infección por VIH-1 se ha asociado con

toxicidad hepática y alteraciones metabólicas. Aunque los mecanismos

implicados no están claros, existen evidencias que indican

una acción mitocondrial específica de algunos fármacos como el

inhibidor de la transcriptasa inversa no análogo de nucleósidos efavirenz

(EFV). Nuestro grupo ha descrito un mecanismo de mitotoxicidad

que se observa en células hepáticas humanas tratadas a corto

plazo (24h) con concentraciones clínicamente relevantes de EFV,

comprometiendo la función mitocondrial, activando la autofagia

(especialmente la mitofagia como un mecanismo de supervivencia

celular) e induciendo estrés de retículo endoplasmático (RE) y la

respuesta a proteínas mal plegadas (UPR).

Objetivos: Analizar la dinámica mitocondrial (mecanismos de

fusión y fisión) en células hepáticas tratadas con EFV y comparar su

efecto con otros agentes mitotóxicos como el inhibidor clásico del

complejo I, rotenona (Rot), el inductor de estrés de RE tapsigargina

(TG) cuya acción afecta también a la mitocondria y el desacoplador

de la cadena de transporte de electrones carbonilcianuro-m-clorofenilhidrazona

(CCCP).

Métodos: Se empleó la línea celular de hepatoma humano Hep3B

y el tratamiento se realizó con concentraciones clínicamente rele-

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