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Lactopress Diciembre 2017

CIENCIA Y TECNOLOGÍA

CIENCIA Y TECNOLOGÍA MÉTODOS Determinación de la tasa máxima de crecimiento y la máxima acidificación de cepas de Bifidobacterium spp. en MRSL 22 Se inocularon cepas de Bifidobacterium spp. (1% v / v) y se cultivaron en caldo MRSL (Man Rogosa Sharpe) (Oxoid, Basingstoke, RU) suplementado con lactosa al 5% (p / v) (Win Lab, Gemini House, Middlesex, Hab 7ET, Reino Unido) y 0.05% (p / v) de L-cisteína- HCL (Merck, Alemania) a 37 °C en condiciones anaeróbicas (BBL Gas Pak, Becton Dickinson, Cockeysville MA, EE. UU.). El crecimiento bacteriano se controló midiendo la absorbancia con un espectrofotómetro (DU 800, Beckman Coulter, EE. UU.) A 660 nm. Además, el pH se determinó usando un medidor de pH (MP 220, Metler Toledo, Greifensee, Suiza). La tasa de acidificación máxima se informó de acuerdo con [13].

Tolerancia a las sales biliares de Bifidobacterium spp. De acuerdo con [14] las cepas de Bifidobacterium spp. se inocularon en caldo MRSL añadido a 0.3% (p / v) de polvo de bilis de buey (Merck, Alemania) y se incubaron a 37 °C en condiciones anaeróbicas durante 24 horas. El crecimiento bacteriano se controló midiendo la absorbancia con un espectrofotómetro a 660 nm después de 24 horas. Los valores de absorbancia obtenidos se representaron frente al tiempo de incubación. La cepa inoculada en caldo MRSL sin polvo de billis de buey se tomó como control. La correlación entre todos los resultados de la resistencia de Bifidobacterium spp. a las sales biliares se determinó mediante el análisis del componente principal (PCA) utilizando el software XLSTAT. Cálculo de la tasa de supervivencia en sales biliares La tasa de supervivencia se calculó utilizando la siguiente fórmula informada por [15]: (1) log N es la absorbancia del cultivo en caldo MRSL que contiene 0.3% de sales biliares. 1 Log N es la absorbancia del cultivo en caldo MRSL sin sales biliares. 0 Adherencia de Bifidobacterium spp. a las células epiteliales intestinales De acuerdo con [13] para el ensayo de adherencia, cinco cepas de Bifidobacterium spp. se probaron para la adherencia a las células epiteliales. La cepas de Bifidobacterium spp. se inocularon en caldo MRSL y se incubaron durante la noche a 37 °C en condiciones anaeróbicas. Los cultivos se 8 ajustaron durante la noche a 1.5 × 10 UFC / ml y luego a 10 ml de cultivo de Bifidobacterium spp. se eliminaron y centrifugaron a 4000 × g RPM durante 12 min. El sobrenadante se descartó y se añadieron 10 ml de PBS (pH 7.2) y se mezcló usando vortex. El raspado del cultivo de las células epiteliales se preparó desechando el epitelio del duodeno de conejo con el borde de un portaobjetos de microscopio, se lavó con solución salina tamponada con fosfato y se suspendió en tampón (pH 7.2). Además, los cultivos celulares se lavaron cinco veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) estéril (pH 7.2). A continuación, se añadieron 0.4 ml de suspensión de células epiteliales a 0,1 ml 23

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