solutyyppien tunnistaminen immunohistokemiallisin menetelmin

Tärkeimpien solutyyppien tunnistaminen kudosleikkeissäimmunohistokemiallisilla värjäyksilläMikael Niku 28.2.2006Kuvissa on naudan kudoksia, joita on värjätty immunohistokemialla erilaisia vasta­aineita käyttäen.Primäärivasta­aine tunnistaa tietyn kudoksessa olevan proteiinin, jota vastaan se on alun perintuotettu immunisoimalla hiiri tai kani. Primäärivasta­aineeseen kiinnittyy sekundäärivasta­aine,johon on liitetty merkkiaineeksi biotiini. Biotiiniin liitetään rykelmä peroksidaasientsyymejä, jotkamuuttavat värittömän substraatin ruskeaksi sakaksi kudokseen. Kuvissa ruskea väri siis osoittaasolut, joihin primäärivasta­aine on sitoutunut.Muutamissa tapauksissa on vasta­aineiden sijaan käytetty lektiinejä, jolloin puhutaanlektiinihistokemiasta. Ne ovat kasvien proteiineja, jotka tarttuvat tiettyihin solujen pintasokereihin.Lektiinikin on tässä merkitty biotiinilla, ja se saadaan näkyväksi samaan tapaan kuin vastaaineetkin.Taulukossa mainitaan värjätty kudos, proteiini, jonka vasta­aine tunnistaa, sekä vasta­aineen nimi.Värjäykset on tehty eläinlääketieteellisen tiedekunnan anatomian osastolla.

Epiteelit (ja endoteelit)Iho: suuren molekyylipainon sytokeratiini(klooni 34E12)Kaikki ihon epiteelirakenteet värjäytyvät.Kuvassa nähdään ihon kerrostunuttalevyepiteeliä, karvatuppia ja niihin liittyviätalirauhasia.Ohutsuoli: pan­keratiini (kloonitAE1+AE3)Tämä paljon käytetty vasta­ainesekoitus värjäälähes kaikki epiteelit. Kuvassa on suolenlimakalvon epiteelin kuopakkeita.Maksa: pan­keratiini (klooni Lu­5)Hepatosyytit ja sappitiehyiden epiteelisolutvärjäytyvät.2

Munuainen: Griffonia simplicifolia lektiiniI­B4Tämä lektiini värjää kaikki endoteelit ja joitakinmuitakin solutyyppejä. Kuvassa nähdään kaksimunuaiskerästä, valtimo sekä munuaisenpienempiä verisuonia.TukikudosIho: tyypin I prokollageeni (klooni SP1.D8)Kollageenia tuottavat sidekudossolut värjäytyvätverinahassa.Iho: vimentiini (klooni V9)Vimentiini on solun tukirangan proteiini, jotaesiintyy monenlaisissa sidekudossoluissa.Kuvassa on verinahan sidekudosta.3

LihaskudosSuoli: lihasaktiini (klooni HHF35)Vasta­aine värjää kaikki lihasten aktiinityypit.Kuvassa nähdään suolen lihaskerroksia, sisempirengasmainen kerros ja tässä poikkileikkauksenaulompi pitkittäinen kerros.Suoli: sileälihasaktiini (klooni 1A4)Tämä vasta­aine värjää vain tietynlihasaktiinityypin. Suolen seinämässä sisempirengasmainen kerros ei värjäydy, koska siinä eiole tätä aktiinityyppiä. Ulompi pitkittäinenkerros sen sijaan värjäytyy, samoin verisuontenseinämien lihaskerrokset.Suoli: desmiini (D33)Desmiini on kaikissa lihaksissa esiintyväproteiini. Kuvassa nähdään jälleen suolenseinämän lihaskerroksia sekä verisuonia.4

HermokudosAivokurkiainen: CNPaasi (klooni 11­5B)Vasta­aine värjää oligodendrosyytit. Tässänähdään oligodendrosyyttien haarakkeidenympäröimiä hermosäikeitä sekä niiden seassapyöreitä oligodendrosyyttien solukeskuksia.Thalamus: GFAP (polyklonaalinen, Zymed)GFAP (glial fibrillary acidic protein) onastrosyyteissä esiintyvä proteiini.Isoaivo: NeuN (klooni A60)Tämä vasta­aine värjää lähes kaikki hermosolut.5

Isot aivot: neurofilamentti 160/200 kD(klooni RMdO­20)Vasta­aine värjää osan neuroneissa esiintyvistäneurofilamentti­tukirankaproteiineista. Osaneuroneista värjäytyy.Isot aivot: S100 (polyklonaalinen, Dako)S100 on melko yleinen merkkiproteiini, jota onesimerkiksi useissa erityyppisissä gliasoluissa.Pikkuaivot: Tubuliini III (klooni TU­20)Vasta­aine värjää suurimman osanhermosoluista, mm. tässä nähtävät Purkinjensolut.6

Isot aivot: mistelin lektiini ITämä lektiini värjää mikrogliasolut ja myös osanverisuonten endoteeleistä. Kuvassa nähdäänpieniä haarakkeisia mikroglasoluja sekä aivojenhiussuonia.ValkosolutSuoli: CD11a/18 (klooni MUC76A)Useita eri valkosolutyyppejä värjäävä vasta­aine.Tässä nähdään suolen limakalvolla oleviavalkosoluja.Suoli: CD11b (klooni MM10A)CD11b on myeloidisten solujen merkkiproteiini,eli se värjää lähinnä monosyyttejä jagranulosyyttejä. Tässä nähdään näitä solujasuolen limakalvolla.7

Suoli: CD3 (polyklonaalinen, Dako)CD3 on T­solujen merkkiproteiini. Kuvassanähdään T­soluja suolen seinämässä sijaitsevanB­solukeräsen ympärillä.Suoli: CD45 (klooni CACTB51A)CD45 on kaikissa valkosoluissa esiintyväproteiini. Kuvasta nähdään, kuinka valtavastivalkosoluja suolen seinämässä on. Vasemallapuolella on limakalvon epiteeliä, keskellälimakalvon sidekudosta, ja oikeassa reunassapilkottaa B­solukeränen.Arpikudos: CD68 (klooni EBM11)CD68 on makrofagien merkkiproteiini. Tässäkuvassa on selluloosasieneen muodostunuttaarpikudosta. Isot ruskeat kohteet ovatvierasesinejättisoluja, monien makrofagienyhteenliittymiä.8

Suoli: CD79cy (klooni HM57)Tämä vasta­aine värjää kypsät B­solut. Kuvassanähdään kaksi B­solukerästä ja yksittäisiä B­soluja suolen limakalvolla.Suoli: IgA (polyklonaalinen, Bethyl)Tämä vasta­aine värjää tietynimmunoglobuliinityypin, jota esiintyypitemmälle erikoistuneissa B­soluissa. Tässänähdään IgA­positiivisia B­soluja suolenlimakalvolla.Suoli: IgM (polyklonaalinen, Bethyl)Tämäkin vasta­aine värjää varhaisimman B­soluissa esiintyvän immunoglobuliinityypin.Kuvassa on suolen seinämässä oleva B­solukeränen ja yksittäisiä IgM­positiivisia B­soluja suolen limakalvolla.9

Suoli: lysotsyymi (polyklonaalinen,Bethesda)Lysotsyymi on bakteereita hajottava entsyymi,jota tuottavat mm. makrofagit. Kuvassa onlysotsyymipositiivisia soluja suolen limakalvonepiteelin joukossa.Solun tilaa kuvaavat vasta­aineetSuoli: pilkkoutunut kaspaasi 3(polyklonaalinen, Cell SignalingTechnology)Tämä on apoptoosin eli ohjelmoidunsolukuoleman merkkiproteiini. Kuvassa onsuolen seinämän B­solukeränen, jossa nautatuottaa uusia B­soluja. Suurin osa soluista kuoleeapoptoosissa. Se on kuitenkin hyvin nopeatapahtuma, joten kerralla nähdään vain pienehkömäärä apoptoottisia soluja.Suoli: Ki67­antigeeni (klooni MIB­1)Vasta­aine värjää jakautumassa olevat solut.Suolen limakalvon epiteeli uusiutuu jatkuvastinopeasti. Solut jakautuvat kuopakkeiden pohjientuntumassa ja kulkeutuvat sieltä ylöspäin.10