L. Galmiche.pdf - AFIAP

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Figure 6 : Schéma de l’appareillage d’électrophysiologie : les 2 microélectrodes (1) qui
empalent l’ovocyte sont reliées à l’amplificateur (2), lui-même connecté à l’enregistreur (3) ;
le boîtier de commande (4) permet de contrôler le système de perfusion (5).
Concrètement, l’ovocyte est placé dans une chambrette où il est maintenu en place par un
système d’aspiration, relié à une pompe à vide (figure 6). Un système de perfusion contrôlé à
distance (électrovannes) permet de modifier la composition du bain dans lequel se trouve
l'ovocyte. Le débit de perfusion et d’aspiration sont identiques. Le bain est totalement changé
en moins d’1 seconde. Dans ce travail, les ovocytes ont ainsi été perfusés par une solution de
Ringer adaptée à l’amphibien en alternance avec une solution de Pi 1 mM.
Les microélectrodes introduites dans l'ovocyte sont formées de tubes de verre borosilicate
munis d’une fibre interne (Clark Electromedical Instruments) dont le diamètre externe est de
2 mm, étirés par l’étireuse Narishige. Elles sont ensuite remplies de KCl 3 M et connectées à
des électrodes Ag/AgCl, elles mêmes reliées à un amplificateur Axoclamp 2A (Axon
instrument). Leur résistance est voisine de 5 mégohms. Les différents paramètres (ddp
transmembranaire en circuit ouvert, puis Vc et courant) sont enregistrés par un enregistreur
Arc-En-Ciel (Sefram, Servofram, France).
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