wizard protocole - Promega

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Wizard ® SV Gel and PCR Clean-Up System

INSTRUCTIONS POUR L’UTILISATION DES PRODUITS A9280, A9281, A9282

Rapide

PROTOCOLE

• Toutes les étapes se font à température ambiante.

• Compléter la solution de « Membrane Wash Solution » avec le volume d’éthanol à 95% requis.

(cf tableau 1)

Volume d’éthanol à 95% à ajouter à la « Membrane Wash Solution » pour chaque conditionnement.

tableau 1

Conditionnement Référence de la Membrane Wash Solution Volume d’éthanol à 95%

10 preps A929A 15 ml

50 preps A929B 75 ml

250 preps A929C 375 ml


1. Si vous partez d’un produit de PCR sur gel :

• Mettre la bande de gel excisée dans un tube 1,5 ml.

• Peser et ajouter 10 µl de « Membrane Binding Solution » par 10mg de gel.

• Vortexer et chauffer à 50-65°C jusqu’à dissolution complète de l’agarose.

Si vous partez d’un produit de PCR directement :

• Ajouter un volume de « Membrane Binding Solution » égal au volume

de la réaction de PCR.

2. Purification sous vide (à l’aide du Vac-Man ® )

Brancher le Vac-Man ® sur une trompe à eau ou une petite pompe de laboratoire.

2.1. Insérer la « Wizard ® SV Minicolumn » dans le « Vac-Man ® adaptater ».

2.2. Transférer le mélange précédent (point 1) dans la « Wizard ® SV Minicolumn »

et incuber 1 min.

2.3. Faire le vide et aspirer jusqu’à ce que tout le liquide soit passé au travers

de la colonne.

2.4. Ajouter 700 µl de « Membrane Wash Solution ». Aspirer.

2.5. Ajouter 500 µl de « Membrane Wash Solution ».

Aspirer pour bien sécher la colonne.

2.6. Transférer la « Wizard ® SV Minicolumn » sur le « Collection tube » et centrifuger

à 14000 rpm pendant 5 minutes de manière à éliminer toute trace de

tampon de lavage. Vider le « Collection tube ».

2.7. Centrifuger tube ouvert 5 minutes à 14000 rpm de manière à évaporer

toute trace d’éthanol résiduelle.

2.8. Transférer la « Wizard ® SV Minicolumn » dans un tube d’élution 1,5 ml propre.

2.9. Ajouter 50 µl de « Nuclease-Free Water » et incuber 1 min.

(pour concentrer l’ADN le volume d’élution peut être réduit : cf tableau 2)

2.10. Centrifuger à 14000 rpm pendant 1 min.

2.11. Jeter la « Wizard ® SV Minicolumn » et stocker l’ADN à 4°C ou à -20°C.

•••

••

•••••

••••

POUR TOUTE INFORMATION TECHNIQUE :

Hotline : 0800 488 000 – www.promega.com

Préparation du produit

de PCR (étape 1).

Liaison à la membrane.

Insérer la

«Wizard ® SV Minicolumn»

dans le

«Vac-Man ® adaptater»

Transférer le mélange de

l’étape 1.

Lavage par aspiration.

Transfert de la

«Wizard ® SV Minicolumn»

dans le «collection tube».

Elution.

Juillet 2005

Part#9FB077F

© 2004, 2005 Promega Corporation. All Rights Reserved.

3759MA07_2A


Wizard ® SV Gel and PCR Clean-Up System

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Rapide

PROTOCOLE

Pourcentage d’ADN récupéré par rapport au volume d’éthanol pour un fragment de 700bp,

directement purifié en triplicat et quantifié par marquage au bromure d’éthidium.

tableau 2

Volume d’élution % d’ADN récupéré par rapport à 50µl

10 µl 35 %

15 µl 98 %

25 µl 98 %

50 µl 100 %

75 µl 100 %

100 µl 100 %



•••

••

••••

3. Purification par centrifugation

3.1. Insérer la « Wizard ® SV minicolumn » dans le « Collection tube ».

3.2. Transférer le mélange précédent (point 1) dans la « Wizard ® SV Minicolumn »

et incuber 1 min.

3.3. Centrifuger à 14000 rpm pendant 1 min. Vider le « Collection tube ».

3.4. Ajouter 700 µl de « Membrane Wash Solution ». Centrifuger à 14000 rpm

pendant 1 min.

3.5. Ajouter 500 µl de « Membrane Wash Solution ». Centrifuger à 14000 rpm

pendant 5 min. Vider le « Collection tube ».

3.6. Centrifuger tube ouvert 5 minutes à 14000 rpm de manière à évaporer

toute trace d’éthanol résiduelle.

3.7. Transférer la « Wizard ® SV Minicolumn » dans un tube d’élution de 1,5 ml

propre.

3.8. Ajouter 50 µl de « Nuclease Free Water » et incuber 1 min.

(pour concentrer l’ADN le volume d’élution peut être réduit : cf tableau 2)

3.9. Centrifuger à 14000 rpm pendant 1 min.

3.10. Jeter la « Wizard ® SV Minicolumn » et stocker l’ADN à 4°C ou à -20°C.

•••••

POUR TOUTE INFORMATION TECHNIQUE :

Hotline : 0800 488 000 – www.promega.com

Préparation du produit

de PCR (étape 1).

Liaison à la membrane.

Insérer la

« Wizard ® SV Minicolumn »

dans le « collection tube ».

Transférer le mélange

de l’étape 1.

Lavage. Elimination de la

solution par centrifugation.

Elution.

Juillet 2005

Part#9FB077F

© 2004, 2005 Promega Corporation. All Rights Reserved.

3760MA07_2A

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