P40 P41 - CRN2M - Université de la Méditerranée

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Implication du récepteur à la ghréline (GHS-R) dans la pathologie des adénomes hypophysaires humains
Mear Yves * , Mechioukhi Yasmine * , Germanetti Anne-Laure # , Enjalbert Alain *# , Barlier Anne *# , Thirion Sylvie *
* : CRN2M, dpt NE-NI, équipe "Physiopathologie tumorale hypophysaire"
# : laboratoire de Biochimie Biologie Moléculaire, Hôpital de la conception
Les adénomes hypophysaires sont les tumeurs intracérébrales les plus fréquentes. Ces adénomes sont aujourd’hui traités
par traitement pharmacologique et/ou par exérèse chirurgicale. Actuellement, les moyens thérapeutiques des adénomes
somatotropes se basent sur l’utilisation d’agonistes des récepteurs à la somatostatine tels que l’octréotide. Néanmoins de
nombreuses tumeurs restent résistantes à ces traitements. La ghréline, secrétée au niveau de l’hypothalamus et de
l’hypophyse, est connue pour favoriser la libération de GH via son récepteur (GHS-R). Le GHS-R possède une forte
activité constitutive (indépendante de la liaison du ligand) dont le rôle physiologique reste à déterminer. Nos travaux
consistent à évaluer l’impact d’un agoniste inverse, bloquant l’activité constitutive de ce récepteur, (la Substance P
Analogue ou SPA), d’une part sur la sécrétion de GH et d’autre part sur l’expression des transcrits des récepteurs à la
somatostatine (SSTR).
Nos résultats confirment la forte expression du GHS-R dans les adénomes hypophysaires et montrent pour la
première fois sa localisation subcellulaire, essentiellement membranaire. Nous montrons, grâce à l’inhibition de la
sécrétion de GH induite par le SPA, que ce récepteur peut jouer un rôle important dans la production massive et
dérégulée de GH observée chez les patients acromégales. Cette régulation pourrait faire intervenir la voie
somatostatinergique, puisque le SPA augmente l’expression des SSTR2 et SSTR5 dans les cellules somatolactotropes
tumorales de rat. Notre objectif à court terme sera d’effectuer les mêmes approches sur une cohorte de patients résistants
aux agonistes somatostatinergiques. L’inhibition de l’activité constitutive du GHS-R pourrait à terme représenter une
nouvelle piste thérapeutique des adénomes somatotropes résistants à la pharmacologie actuellement disponible.
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Développement de modèles de barrière hémato-encéphalique (BHE) et hémato-médullaire (BME) in vitro :
analyse comparative de leurs réponses à des agents pro-inflammatoires
Yves Molino 1 , Françoise Jabès 1 , Marion David 1 , Aude Fortoul 1 , Karima Bakloul 1 , Patrick Vlieghe 1
Khrestchatisky
et Michel
NICN, UMR 6184, Faculté de Médecine Nord, Bd Pierre Dramard, 13916 Marseille Cedex 20
1- Société VECT-HORUS SAS, Faculté de Médecine Nord, Bd Pierre Dramard, 13916 Marseille Cedex 20.
Les cellules endothéliales qui sont les constituants majoritaires du système vasculaire cérébral et médullaire (système
nerveux central, SNC) établissent entre elles des jonctions serrées qui empêchent le passage para- cellulaire de la plupart
des molécules, du système sanguin vers le parenchyme nerveux. Le passage de ces barrières constitue un objectif
important pour l’industrie pharmaceutique sachant que de nombreux principes actifs et médicaments potentiels pour
traiter des pathologies du SNC sont abandonnés après des développements souvent coûteux en raison d’un passage
insuffisant. Différents modèles de BHE ont été développés par plusieurs laboratoires, préparés avec des cellules
endothéliales cérébrales primaires isolées de tissu nerveux de différentes espèces. Nous avons mis en place et validé un
modèle de BHE in vitro à partir de cellules endothéliales primaires de rat. Ce modèle est utilisé pour évaluer les
propriétés de molécules vecteurs susceptibles de passer la BHE, et qui sont en cours de développement dans notre
équipe. Dans le cadre d’un projet sur les lésions médullaires, nous avons également développé un modèle de BME chez
le rat. Nous comparons les propriétés des cellules endothéliales cérébrales et médullaires, notamment en situation
inflammatoire, sachant que les processus lésionnels et pathologiques dans le tissu nerveux sont associés à l’inflammation
des barrières. Cette inflammation a des conséquences sur leurs propriétés, notamment une baisse de leur imperméabilité
et un profil d’expression différentiel de nombreux gènes. Une analyse comparative des profils d’expression de gènes est
en cours afin de mieux caractériser les propriétés des cellules endothéliales cérébrales et médullaires et les réponses de
ces deux catégories de cellules à des agents pro-inflammatoires.

P42
Recherche d’un nouveau partenaire protéique endogène de l’acétylcholinesterase et des neuroligines dans le
cerveau de rat/souris.
Mondielli Grégoire CRN2M Département Signalisation Neuronale Equipe ToxCiM
Gregoire.mondielli@univmed.fr phone: 33 491 69 88 56 Directeur de thèse : Drocteur Pascale Marchot
L’enzyme acetylcholinesterase (AChE) hydrolyse le neurotransmetteur acétylcholine dans les systèmes nerveux central
et périphériques. De nombreuses données expérimentales suggèrent que l’AChE aurait aussi des fonctions non
catalytiques, associées à la synaptogénèse ou impliquées dans des maladies neurodégénératives, et impliquant la
participation de ligands encore non identifiés. Le but de ce projet de thèse est d’extraire, à partir de fractions protéiques
soluble ou solubilisées de cerveaux de rat/souris, de purifier et de caractériser en utilisant une combinaison de techniques
biochimiques et protéomique un ou des ligands protéiques endogènes susceptibles d’être partenaire(s) hétérologue(s) de
l’AChE. Actuellement, en dépit de quelques pistes trouvées par resonance plasmonique de surface (SPR) et/ou par
chromatographie d’affinité, nos résultats ne permettent pas d’affirmer que nous avons identifié un tel ligand.
En contraste, les neuroligines (NLs), initialement choisies comme des contrôles négatifs de l’AChE dans les essais de
SPR, se sont révélées lier « quelque chose » présent dans une fraction de cerveau de rat. Les NLs sont des protéines postsynaptiques
appartenant à la même famille structurale que l’AChE, mais dépourvues d’activité catalytique. Par leur
interaction avec les neurexines pré-synaptiques, les NLs contribuent au fonctionnement et à l’architecture de la synapse.
Nos résultats suggèrent la présence, dans le cerveau de rongeur, d’un ligand endogène différent des neurexines. Pour
purifier et identifier ce nouveau ligand nous utilisons les stratégies mises au point pour le projet initial ciblant l’AChE.
L’identification d’un nouveau partenaire des NLs documentera les mécanismes d’adhésion à la synapse. De plus, des
mutations de gènes codant pour les NLs seraient liées à l’autisme. L’identification d’un nouveau ligand pourra aussi
fournir des indices sur l’effet des mutations des NLs.
P43
Restauration de l’apprentissage et de la mémoire après greffe de cellules souches olfactives humaines dans
l’hippocampe lésé de souris
Emmanuel Nivet 1,2 , Michel Vignes 3 , Stéphane Girard 1,2 , Caroline Pierrisnard 2 , Nathalie Baril 2 , Arnaud Devèze 4 , Jacques
Magnan 4 , Fabien Lanté 3 , Michel Khrestchatisky 1 , François S. Roman 2* , François Féron 1,5*
1 Neurobiologie des Interactions Cellulaire et Neurophysiopathologie, CNRS UMR-6184, Faculté de Médecine, Aix-
Marseille Université; IFR Jean Roche, 51, Bd Pierre Dramard - 13916 Marseille Cedex 20, France
2 Laboratoire de Neurobiologie des Processus Mnésiques, CNRS UMR-6149, Aix-Marseille Université; IFR Sciences du
Cerveau et de la Cognition, Pôle 3C, 3, place Victor Hugo - 13331 Marseille cedex 03, France
3 Stress Oxydant et Neuroprotection, CNRS UMR-5247, Université de Montpellier 1 et 2; IBMM, Place E. Bataillon -
34095Montpellier cedex 05, France
4 Département ORL, Hôpital Universitaire Nord, AP-HM, Bd Pierre Dramard - 13916 Marseille, France
5 Centre d'Investigations Cliniques en Biothérapie CIC-BT 510, AP-HM - Institut Paoli Calmettes - Inserm, Aix-
Marseille Université, 232 Bd de Sainte Marguerite - 13273 Marseille cedex 09, France
* Co-superviseurs
La transplantation de cellules souches a été proposée comme un traitement potentiel pour un nombre varié de désordres
nerveux. Parmi les candidats potentiels, figurent les cellules souches de la lamina propria, située dans la cavité nasale
humaine. Récemment, nous avons caractérisé ces cellules qui appartiennent à la famille des cellules souches
mésenchymateuses. Elles sont multipotentes et se distinguent des cellules de la moelle osseuse par une prolifération
élevée et des propriétés neurogéniques. Au cours de l’étude présentée ici, nous avons greffé des cellules humaines
olfactives dans l’hippocampe de souris, préalablement lésé avec un agoniste glutamatergique, l’acide iboténique. Nous
avons observé que i) les cellules exogènes migrent vers les zones lésées de l’hippocampe où elles se différencient en
neurones mais jamais en astrocytes et ii) stimulent la neurogenèse endogène dans le gyrus dentelé. Par ailleurs, des
enregistrements électrophysiologiques, réalisés ex vivo avec des puces multi-électrodes, nous ont permis de démontrer
que les cellules souches olfactives induisent un rétablissement de la transmission synaptique hippocampique et
améliorent la potentialisaton à long terme (LTP). Enfin, à l’aide de tests de comportement basés sur des tâches
hippocampo-dépendantes, nous avons mis en évidence une restauration des capacités d’apprentissage et de
mémorisation. L’ensemble des ces améliorations ont également été observées lorsque les cellules souches ont été
greffées dans le liquide céphalo-rachidien et non pas dans la zone lésée. Ces résultats encourageants laissent augurer
d’un possible essai clinique basé sur la transplantation autologue de cellules souches olfactives nasales chez des patients
souffrant de pertes mnésiques après un traumatisme crânien.

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Les courants TTX-résistants des neurones myentériques de souris
Nancy Osorio*, Marcel Crest*, Nadine Clerc*, Sergiy Korogod § et Patrick Delmas*
* CRN2M, UnivMed-CNRS UMR6231, § University of Dniepropetrovsk, Ukraine
Nous avons montré précédemment que les canaux sodium résistants à la tetrotoxine (TTX-R) de type Nav1.9 sont
exprimés dans les neurones myentériques de rats et de cochons d’Inde (Rugiero et al, 2003; Coste et al, 2004; Padilla et
al, 2007; Maingret et al, 2008). Pour tenter d’élucider le rôle particulier de Nav1.9 dans ces neurones, nous avons utilisé
une lignée de souris dont le gène Scn11a (codant pour Nav1.9) a été inactivé (Nav1.9 KO).
Par patch-clamp sur des neurones myentériques in situ, nous avons montré l’existence de deux courants TTX-R : 1/ un
courant transitoire I NaT possédant un seuil d’activation relativement élevé (-40 mV) et 2/ un courant I NaL aux cinétiques
d’activation et d’inactivation lentes, ayant une composante persistante importante et un seuil d’activation assez bas (-60
mV). Ces deux courants TTX-R se distribuent de manière différente dans la population des neurones myentériques : I NaT
est enregistré dans presque tous les neurones (95%) alors que I NaL est restreint à une sous-population. Des
immunomarquages avec un anticorps anti-Nav1.9 montrent que cette sous-population est constituée de neurones larges,
identifiés comme les neurones sensoriels intrinsèques du plexus myentérique. L’utilisation d’un anticorps anti-Nav1.5
nous a permis de montrer que le canal sodium TTX-R Nav1.5 est exprimé par la plupart des neurones myentériques.
Dans les neurones myentériques issus de souris Nav1.9 KO, I NaL mais pas I NaT est absent.
Nous avons également montré que la présence de Nav1.9 dans les neurones myentériques est associée à un élargissement
du potentiel d’action et la présence de décharges répétitives. Ces données expérimentales sont soutenues par des
simulations numériques qui montrent que Nav1.9 est activé lors d’un potentiel d’action.
En conclusion, notre étude montre que Nav1.9 est le corrélat moléculaire du courant sodium TTX-R persistant des
neurones myentériques et suggère que Nav1.5 sous-tend le courant TTX-R transitoire.
Rugiero F,Mistry M,Sage D,Black JA,Waxman SG,Crest M,Clerc N,Delmas P, Gola M. J Neurosci. 2003; 23: 2715-25.
Coste B,Osorio N,Padilla F,Crest M,Delmas P. Mol Cell Neurosci. 2004, 26: 123-34.
PadillaF, CoubleML,Coste B,Maingret F,Clerc N,Crest M,Ritter AM,Magloire H,Delmas P. Mol Cell Neurosci. 2007,
35: 138-52.
Maingret F,Coste B,Padilla F,Clerc N,Crest M,Korogod S,Delmas P. J Gen Physiol. 2008; 131: 211-25.
P45
Les métalloprotéases matricielles (MMPs) sont exprimées par les cellules souches de la muqueuse olfactive et
contribuent à leur migration
Adlane Ould-yahoui, Oualid Sbai, Eliane Charrat, Yatma Gueye,
Emmanuel Fenouillet, Jean-Jacques Risso 1 , François Féron, Michel Khrestchatisky, Santiago Rivera.
NICN, UMR6184 CNRS-Université de la Méditerranée, Marseille.
1
Département de Recherche Marine et Subaquatique, IMNSSA, UMR MD2 PPCOE, Université de la Méditerranée,
Toulon Armées.
Les travaux de caractérisation des cellules souches de la muqueuse olfactive (CSO) au sein de notre laboratoire ont
permis de montrer sur un modèle de souris amnésiques que la greffe de ces cellules favorise la récupération des capacités
d’apprentissage et de mémorisation. Ces travaux ont mis en évidence la capacité des CSO à migrer jusqu’au site de
lésion et de se différencier en neurones après injection ipsilatérale ou controlatérale. En parallèle, une étude génomique
comparative a montrée que les CSO présentent un grand nombre de marqueurs en commun avec les cellules souches de
la moelle osseuse (CSM), mais de manière intéressante le niveau d’expression de MMP-1 et nettement supérieur à celui
trouvé dans les CSM. Ces travaux sont à mettre en relation avec des travaux précédents de notre équipe ayant démontré
le rôle fondamental des MMPs (notamment MMP-2) dans la motilité d’astrocytes et neurones. Pour cette raison nous
avons entrepris de caractériser les MMPs présentes dans les CSO en culture avant la greffe et d’étudier le rôle de ces
protéases dans leur migration. Les résultats obtenus montrent que : i) les CSO expriment au moins MMP-1, MMP-2,
MMP-9 et MT1-MMP, ii) MMP-2 est présente au niveau de la membrane cellulaire, du cytoplasme, du cytosquelette et
de manière surprenante au niveau du noyau, iii) MMP-1, MMP-9 et MT1-MMP se distribuent de manière préférentielle
dans le front de migration cellulaire; iv) l’inhibition sélective des MMPs réduit fortement la migration des CSO dans une
chambre de Boyden. En attendant de caractériser plus précisément le rôle de chacune de ces protéases, l’ensemble de ces
résultats suggère que les MMPs contribuent à la migration des CSO et en conséquence au potentiel régénérateur et
thérapeutique de ces cellules.

Proteome du canal sodium Nav1.9
PADILLA F. 1 BELGHAZI M. 2 DELMAS P. 1
1 CRN2M UMR 6231, , Faculté de médecine nord, 51 bd Dramard 13344 MARSEILLE Cedex 15
2 CAPM, IFR Jean Roche, Faculté de médecine nord, 51 bd Dramard, 13916 MARSEILLE cedex 20
Les neurones sensoriels des DRG expriment un répertoire unique de canaux ioniques. Parmi ces canaux, le canal sodium
Nav1.9 génère un courant persistant dépendant du voltage qui confère des propriétés électrophysiologiques très
particulières aux neurones sensoriels qui l’expriment aussi bien des DRG (Coste et al. 2004, 2007, Maingret et al 2008)
que des neurones myenteriques (Rugiero et al. 2003, Coste et al 2004). Ce courant est aussi impliqué dans les processus
d’allodynie et d’hyperalgie thermique et mécanique au cours de processus inflammatoires mais les mécanismes
moléculaires sousjascents sont encore inconnus. Afin d’identifier les partenaires moléculaires du canal Nav1.9 nous
avons réalisé des expériences de co-immunoprécipitation à l’aide un anticorps spécifique développé au laboratoire
(Padilla et al 2007), suivie d’une identification de par séquençage protéique sur la plateforme protéomique de l’IFR.
Les protéines identifiées sont de diverses nature : protéines du cytosquelette, vésicules de transport intra cellulaires, ou
encore des kinases phosphatases, ou protéines G mono- ou hétérotri-mérique. Nous étudions à présent comment ces
partenaires interagissent avec Nav1.9 au cours d’un processus inflammatoire.
Rugiero F, Mistry M, Sage D, Black JA, Waxman SG, Crest M, Clerc N, Delmas P, Gola M. Selective expression of a
persistent tetrodotoxin-resistant Na+ current and NaV1.9 subunit in myenteric sensory neurons. J Neurosci. 2003 Apr
1;23(7):2715-25
Coste B, Osorio N, Padilla F, Crest M, Delmas P.
Gating and modulation of presumptive NaV1.9 channels in enteric and spinal sensory neurons. Mol Cell Neurosci. 2004
May;26(1):123-34
Padilla F, Couble ML, Coste B, Maingret F, Clerc N, Crest M, Ritter AM, Magloire H, Delmas P.
Expression and localization of the Nav1.9 sodium channel in enteric neurons and in trigeminal sensory endings:
implication for intestinal reflex function and orofacial pain. Mol Cell Neurosci. 2007 May;35(1):138-52
Coste B, Crest M, Delmas P.
Pharmacological dissection and distribution of NaN/Nav1.9, T-type Ca2+ currents, and mechanically activated cation
currents in different populations of DRG neurons. J Gen Physiol. 2007 Jan;129(1):57-77
Maingret F, Coste B, Padilla F, Clerc N, Crest M, Korogod SM, Delmas P.
Inflammatory mediators increase Nav1.9 current and excitability in nociceptors through a coincident detection
mechanism. J Gen Physiol. 2008 Mar;131(3):211-25
P47
P46
La cascade des MAPKinases ERK1/2 joue un rôle central dans la physiopathologie somatotrope.
PERTUIT Morgane, ROMANO David✶, ENJALBERT Alain, BARLIER Anne, GERARD Corinne
CRN2M, UMR 6231 CNRS, Marseille✶Beatson Institute for Cancer Research, Glasgow, UK
Les adénomes hypophysaires somatotropes sont caractérisés par une hypersécrétion hormonale et des altérations de la
prolifération cellulaire. Dans ces tumeurs, la seule mutation fréquemment retrouvée est l’oncogène gsp (mutation
activatrice de la sous-unité α de la protéine Gs). Cependant il n’existe pas de différences claires entre le phénotype des
patients porteurs de tumeurs exprimant l’oncogène gsp (gsp+) ou non (gsp-).De plus, une surexpression de la protéine
Gsα sauvage a été observée dans un sous-groupe d’adénomes gsp-. Pour comprendre le rôle des altérations de Gsα dans
l’initiation et la progression des adénomes sécrétant l’hormone de croissance (GH), nous avons développé des lignées
GH4C1 stables d’expression conditionelle de l’oncogène gsp ou de surexpression de Gsα. Dans ces lignées, nous
montrons que l’induction de l’expression de l’oncogène gsp ou de la surexpression de Gsα, qui perturbe dans les deux
cas la voie de l’AMPc, induit une activation chronique de la cascade des MAPKinases ERK1/2. Dans les deux lignées,
cette hyperactivation de la voie ERK1/2 est impliquée dans l’activation soutenue des promoteurs humains de prolactine
(PRL) et de GH. Nos résultats sont en accord avec les observations cliniques et démontrent qu’une légère surexpression
de Gsα peut engendrer des désordres physiologiques analogues à ceux observés en présence de l’oncogène gsp. Un des
enjeux de notre travail est de déterminer les mécanismes moléculaires en aval de Gsα soutenant l’activation chronique de
ERK1/2. Dans les deux lignées cellulaires, nous montrons que les kinases Src sont impliquées dans l’hyperactivation de
cette voie. De plus des expériences de co-immunoprécipitation suggèrent un recrutement direct de Src par Gsα. Src
pourrait alors activer les petites protéines G Ras et Rap1 qui sont toutes deux activées dans les deux lignées et
contribuent à l’hyperactivation de ERK1/2. L’ensemble de ces résultats met en avant une nouvelle voie de signalisation
Gsα-Src-Ras/Rap1-ERK1/2 déterminante dans la physiopathologie somatotrope.

P48
PITX2 : une mutation de ce facteur comme outil pour éclaircir l'origine du lignage somatolactotrope.
Quentien MH 1 , Abitbol M 2 , Brue T 1,3 .
1 Centre de Recherche en Neurobiologie et Neurophysiologie de Marseille (CRN2M), UMR6231, Faculté de Médecine
Secteur Nord, Université de la Méditerranée, CS 80011, 13344 Marseille Cedex 15, France
2 Centre de Recherches Thérapeutiques en Ophtalmologie, équipe d'accueil 2502 MENRT, Université René Descartes
Paris V, Faculté de Médecine Necker-Enfants Malades, 156 rue de Vaugirard, Paris, France.
3 Service d'Endocrinologie, diabète et maladies métaboliques, et Centre de référence des maladies rares d'origibe
hypophysaire DEFHY, Hôpital de la Timone, Marseille, France.
Le lignage antéhypophysaire somatolactotrope génère les cellules lactotropes sécrétant la PRL et somatotropes
la GH. Nous nous sommes intéressés au facteur de transcription PITX2 dans la régulation des gènes humains de la PRL,
de la GH et du facteur de transcription POU1F1. L'approche utilisée est la caractérisation de mutations de PITX2 décrites
dans le syndrome d'Axenfeld-Rieger (dysmorphie cranio-facial, anomalies oculaires, dentaires et ombilicales, parfois
associés à des déficits en GH). Sur trois mutations étudiées, Y167X et E101X ont un codon stop précoce, tandis que la
troisième, F104L consiste en une substitution d'acide aminé. Par des approches de transcription/traduction in vitro, de gel
retard et de transfections transitoires, Y167X est apparu très intéressant : cette protéine tronquée est capable de se lier à
des sites spécifiques de l'ADN et a des propriétés de suractivation de l'expression de la hPRL et de POU1F1 tandis
qu'elle est inactive sur la hGH. Y167X est la première mutation décrite qui a un effet différentiel sur l'expression de la
hPRL et de la hGH. Ce mutant représente un outil intéressant car la question de l'origine des cellules lactotropes reste à
préciser. Elles pourraient provenir de précurseurs lactotropes purs ou de précurseurs PRL+/GH+ qui ensuite expriment
seulement la PRL. L'effet différentiel observé du mutant Y167X suppose que PITX2 interagit avec des facteurs de
transcription ou des cofacteurs différents selon qu'il intervient dans l'expression de la PRL ou de la GH. Des études
d'interactions protéines/protéines de PITX2 et du mutant Y167X nous permettront de mettre en évidence ces facteurs.
P49
Chemo- and mechano-sensitivities of cultured Madin Darby Canine Kidney (MDCK) cells.
Lise Rodat-Despoix & Patrick Delmas.
Centre de Recherche en Neurobiologie-Neurophysiologie de Marseille (CRN2M), CNRS UMR 6231, IFR Jean-Roche,
Université de la Méditerranée, Marseille.
Madin Darby Canine Kidney (MDCK) cells is a widely cell-line derived from the collecting duct of the kidney, which
exhibit a non motile solitary primary cilium after 7 days of culture. This microtubule-based nonmotile organelle is now
considered to serve as a versatile mechanosensor and chemosensor, and its loss or disability induces loss of mechanoand
chemo-sensitivity of cells. Here we demonstrate that 1-day cultured MDCK cells showed pH- and mechanosensitivities,
although they lacked primary cilium. Cells showed transient calcium increase upon exposure to pH
solutions varying from 6 to 3. Calcium responses were the largest with pH 3 solution and were composed of both extraand
intra-cellular components as removal of extracellular calcium or block of SERCA pumps by thapsigargin (1 µM)
decreased the amplitude of the response. Mechanosensitivity was tested by applying a puff of Kreb’s solution onto the
cells, from 4 to 30 psi. Maximum responses were obtained with the smallest stimulation (4 psi), which induced a
transient calcium increase. As for the pH stimulation, this mechano-induced calcium response involved calcium from
both intra- and extra-cellular stocks, as application of thapsigargin (1 µM) or a calcium free bathing solution reduced the
mechanically-induced calcium response. Finally, responses of MDCK cells to acidic and mechanical stimuli involved a
lanthanum-sensitive calcium permeable channel. Altogether, our results demonstrate that MDCK cells are chemo- and
mechano-sensitive, well before the formation of a mature primary cilium.