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Contribution à l'étude de la qualité bactériologique de ... - BEEP

Contribution à l'étude de la qualité bactériologique de ... - BEEP

- 62-2.4.2.3.

- 62-2.4.2.3. Dénombrement des anaérobies sulfito-réducteurs(A.S.R.)a - Milieux de cultureDeux milieux peuvent être utilisés :- Gélose trypticase sulfite néomycine (T.S.N.)- Gélose trypticase sulfite cyclosérine (T.S.C.)Le milieu sulfite polymyxine sulfadiazine est également signalé dans la littératurepour le dénombrement des germes. Pour notre étude, nous avons utilisé le TSN.b - Mode opératoireA la différence des recherches précédentes, l'ensemencement des milieuxpour la recherche des ASR se fait en tube. Le milieu est réparti en tubes à raisonde 10 ml par tube. Au moment de leur emploi, il est fondu au bain-marie àIOOoe puis ramené à 45-50°C. L'ensemencement des tubes se fait avec 1 ml desolution mère revivifiée. Après homogénéisation et solidification du milieu, le tubeest incubé à l'étuve 46°C en anaérobiose pendant 48 à 72 heures..c - LectureLes colonies sont noires floconneuses avec un diamètre supérieur à 1mm et la coloration ne diffëre pas dans la gélose.2.4.2.4. Dénombrement des staphylocoques présumés pathogènesa - Milieux de cultureStaphylococcus aureus est isolé sur la gélose de Baird-Parker (BP)additionnée de jaune d'œufet de tellurite de potassium.b - Mode opératoireLe mélange gélose Baird-Parker, jaune d'œufet tellurite de potassiumest coulé en boîte de pétri. Après solidification, il est ensemencé en surface avec0,1 ml de la solution mère. L'inoculum est ensuite étalé à l'aide d'un étaleur enverre ou en plastique. L'incubation se fait à 37°C pendant 48 heures.c - LectureLa présence de staphylococcus aureus se traduit par l'apparition decolonies, brillantes, bombées. Leur diamètre est compris entre 0,5 et 2 mm; Pourconfirmer la pathogénicité des staphylocoques, nous avons effectué le test de lacatalase et le test à la coagulase ou ce dernier test seul.

- 63 -- Le test de la cata1ase : Une colonie suspecte prélevée à l'oëse est déposée surune goutte d'eau oxygénée posée sur une lame. S'il y a dégagement de bulles,le test est catalase positive.- Le test à la coagulase : Prélever un nombre représentatifde chaque type morphologiquede colonies caractéristiques et ensemencer des tubes contenant un .bouillon de culture (ici bouillon cœur cervelle B.C.C.). Incuber les tubes à 37°Cpendant 12 à 24 heures. Mélanger ensuite dans un tube à hémolyse stérilè 0,5ml de la culture obtenue avec 0,5 ml de plasma de lapin. Incuber à 37°C pendant24 heures. La réaction est positive lorsque le plasma est coagulé et lorsqu'onpeut retourner le tube même si cela s'accompagne d'un léger écoulement.Des réactions faiblement positives peuvent être obtenues.Les staphylocoques présumés pathogènes sont catalase +, coagulase +.2.4.2.5. Recherche des salmonellesa - Milieux de cultureIls varient en fonction du but visé. Ils se répartissent en :- milieux d'enrichissement- milieux d'isolement- milieux d'identificationa-l - Milieu d'enrichissementDeux milieux ont été utilisés pour ce travail:- milieu Rappaport - Vassiliadis- bouillon au sélénite (B.S.) »a-2 - Milieux d'isolement utilisés- gélose au vert brillant (G.V.B.)- gélose HektoënCes milieux ont la propriété de favoriser la croissance des salmonelleset de limiter celle des autres germes de la famille des entérobactéries.a-3 - Milieu d'identification- Milieu Clark-Lubs (C.L.)- Milieu Urée-Indole- Milieu Kligler Hajna- Milieu Lysine Fer- Gélose Triple Sugar Iron agar (T.S.I.)- Milieu Lysine Décarboxylase (L.D.C.)- Milieu ArgÏnjne Déhydrolase (A.D.H.)- Milieu mannitol mobilité- Milieu citrate de sodium ou de Simmons- Méthode rapide avec galerie API 20B

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