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Contribution à l'étude de la qualité bactériologique de ... - BEEP

Contribution à l'étude de la qualité bactériologique de ... - BEEP

- 66-- Gélose T.S.I.

- 66-- Gélose T.S.I. (Gélose glucose -Lactose - Saccharose - H 2 S) :La gélose T.S.I. est un milieu d'identification rapide pour les entérobactéries.Ce milieupennet de mettre en évidence la fennentation duglucose (avec ou sans dégagement gazeux), du lactose, du saccharoseet la production d'hydrogène sulfuré. Le mode d'ensemencement etd'incubation sont identiques que précédemment. Après lecture, onobtient les résultats suivants :SalmonellaPenteLactose et/ouSaccharoseCulotGazH 2 S+ (-)-typhi- -- S.G.ill(Arizona)- + +- autres - +- Milieu Urée-indole : Ce milieu synthétique permet de rechercher simultanémentl'uréase, la production d'indole. Le milieu Urée-indole,réparti en tubes à hémolyse à raison de 4 à 6 gouttes/tube, est ensemencéavec des colonies prélevées de la culture sur Kligler-Hajna.L'incubation est faite à 37°C pendant 24 heures. Le virage du milieuau rouge, suite à une alcalinisation, traduit l'activité uréasique. Leréactifde KOVACS, ajouté à ce tube à hémolyse, pennet de visualiserla production d'indole. Cette dernière se manifeste par un anneaurouge ou violet à la surface du mélange.- Milieu Clark et Lubs : Ce milieu sert à l'étude de deux réactions :- Réaction de rouge de méthyle (R.M.)- Réaction de Voges Proskauer (V.P.)Elles sont utilisées dans la différenciation des entérobactéries. Semela dernière réaction a été utilisée dans cette étude.Mettre 5 ml de milieu dans un tube à essai et ensemencer avec descolonies prélevées de la culture sur Kligler Hajna puis incuber à37°C.Après 2 jours d'incubation, 1 ml de suspension est additionné de 0,5ml d'une solution 6 % d'alpha-naphtol dans l'alcool à 90° et de 0,5

- 67-ml d'une solution aqueuse de soude 16 p.lOO (4 N). On agite et onattend 15 mn.Si la souche étudiée produit de l'acétyl-méthylcarbinol (acétoïne), laprésence de ce métabolite se manifeste par l'apparition d'une couleurrouge en surface, pouvant diffuser dans le milieu (VP+). Salmonella(y compris S. arizonae) est (V.P.-).- Recherche de la beta-galactosidase : Le test de l'ONPG (Orthonitrophénylgalactosidase) permet de confirmer la présence de salmonelles.Une suspension bactérienne épaisse est prélevée sur la pente dumilieu Kligler-Hajna, mélangée à 0,5 ml d'eau distillée. Un disqueONPG est plongé dans la solution qui est ensuite incubée à 37°C. Levirage au rouge survient au bout de 30 mn (ONPG +).·En résumé, les salmonelles sont :- Glucose (+)Lactose (-)Saccharose (-)SH 2 (±)Uréase (-)Indole (-)ONPG(-)VP(-)2.4.3. Normes microbiologiquesLa méthode utilisée pour analyser les résultats est basée sur les critèresfixées par des normes françaises. Ces critères d'appréciation sont définis parl'arrêté ministériel du 21 décembre 1979 et publié aujoumal officiel du 10 janvier1980. Ces normes sont appliquées au Sénégal (33).Pour les plats cuisinés et le lait caillé, les critères microbiologjques figurentrespectivement sur les tableaux X et XI.

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