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COURS chromatographie liquide
http://ead.univ-angers.fr/~jaspard/Page2/COURS/6CoursDEUST/CHROMATOGRAPHIE/1Chro...
la polarité
et/ou
l'hydrophobicité
polarité de phase inversée
ou phase reverse
interactions hydrophobes
protéines
polypeptides
acides aminés
acides nucléiques
sucres
acides gras
protéines
Cependant, si un type de chromatographie repose sur une caractéristique physico-chimique donnée, la séparation peut être influencée de
manière "secondaire" par d'autres caractéristiques. Par exemple :
un échangeur d'ions comportant un groupement hydrophobe, comme le noyau phényl du " DOWEX ", interagit aussi par
second interactions lieu la hydrophobes séparation de : ainsi ces molécules pour 2 acides ; aminés de charge identique, l'hydrophobicité de la chaîne latérale influencera en
un gel de filtration "Sephadex" peut être utilisé comme gel d'affinité pour les protéines qui fixent les dérivés du glucose tel que le
dextran.
3. Tableau résumé des différents types de chromatographie.
phase
principe de
catatéristiques de
principe de la fixation
stationnaire
liquide
solide
séparation
partage
adsorption
adsorption
(phase inverse)
échange d'ions
exclusion
(filtration sur gel)
affinité
la phase stationnaire
liquide fixé sur un support inerte (papier,
silice...)
adsorbant solide polaire
molécules hydrophobes greffées sur de la silice
résine (polymères d'oses) porteuse de
groupements chargés négativement ou
positivement
solide poreux
support sur lequel est greffée une molécule (le
ligand) spécifiquement reconnue par un des
composants de l'échantillon à analyser
et de l'élution
distribution des composants du mélange à
séparer dans les deux phases liquides selon leur
coefficient de partage
phénomène de surface : formation de liaisons
spécifiques entre les composants et la surface
adsorbante
interactions hydrophobes et élution par
diminution de la polarité de la phase mobile
interactions électrostatiques avec les composants
de charge opposée
les composants de diamètre supérieur à celui des
billes du support sont "exclus" et ceux de
diamètre inférieur y diffusent et sont freinés
déplacement de l'équilibre de liaison [molécule -
ligand greffé] en faveur de l'équilibre [molécule -
tierce molécule]
4. Les supports ou matrices pour phases stationnaires.
Le support ou matrice utilisé pour constituer la phase stationnaire s'appelle un gel de résine. Ce gel se présente souvent sous la forme de
billes (sphériques ou, plus rarement, de forme irrégulière). Ces billes sont elles mêmes des polymères de différents types de molécules, par
exemple :
de styrène - divinylbenzène pour certaines résines d'échange d'ions ;
de polyholosides pour les gels de filtration ;
de silice pour la chromatographie en phase reverse.
Différents traitements ou modifications de ces différentes résines permettent d'obtenir tel type de phase stationnaire ou tel autre type.
II. Chromatographie d'échange d'ions.
1. Les différents types d'échangeurs d'ions.
Les échangeurs d'ions sont des billes qui portent des groupements ionisables dont la charge est :
positive : résines échangeuses d'anions
négative : résines échangeuses de cations
qui fixent des molécules chargées négativement : ---R+ ...M -
nature de la fonction ionisable : ---R+
qui fixent des molécules chargées positivement : ---R- ...M +
nature de la fonction ionisable : ---Rbase
forte base faible acide fort acide faible
ammonium quaternaire : ---NR + 3
exemple : triméthylammonium
---N(CH 3 ) + 3
forme protonnée d'une amine I, II ou III
:
---NHR + 2
exemple : diéthylaminoéthylammonium
exemple : sulfonate
---SO - 3
exemple : carboxyméthyl
---O-CH 2 -CO - 2
2. Principe.
Voir un schéma de l'ionisation de la diéthylaminoéthylammonium et carboxyméthyl en fonction du pH
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