S1238(0903) - BD

More documents

Recommendations

Info

S1238(0903).qxd 10/27/2003 2:03 PM Page 5 Tableau 1. Résultat de test USR quantitatif sur l'échantillon. Si la dilution au 1/32 est réactive, diluer plus encore par dilution sériée au demi avec du sérum physiologique à 0,9 % (1/64, 1/128 et 1/256) et tester de nouveau selon la méthode d'analyse quantitative. Dilutions sériques Non dilué (1:1) 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 Rapport R FR N N N N Réactif, non dilué R R FR N N N Reactive, dilution au 1:2 R R R FR N N Reactive, dilution au 1:4 FR FR R R FR N Reactive, dilution au 1:8 N (estimé) FR R R R N Reactive, dilution au 1:16 FR N N N N N Faiblement réactif , non dilué INTERPRETATION DES RESULTATS Si les contrôles ne donnent pas les résultats attendus, les résultats obtenus sur les échantillons cliniques ne doivent pas être pris en considération. 1. Les résultats du test USR sur le sérum doivent être confirmés par un test tréponémique. 2. Le diagnostic de syphilis dépend des résultats du test USR, du test de confirmation tréponémique, des signes et des symptômes cliniques, ainsi que des facteurs de risque. 3. Un test USR positif (sérum réactif) peut indiquer une infection passée ou présente par un tréponème pathogène. Cependant, il peut s'agir d'un faux positif. Un faux positif est révélé par un test de confirmation tréponémique négatif. 4. Un test USR négatif (sérum non réactif) associé à un tableau clinique de syphilis peut indiquer une syphilis primaire précoce, un effet prozone d'une syphilis en phase secondaire, ou une syphilis tardive. 5. Un test USR négatif (sérum non réactif) sans tableau clinique évocateur de syphilis indique une absence d'infection, une infection traitée avec succès ou une syphilis latente. 6. Un test USR quantitatif détecte les variations de titre de réagine. Par conséquent, un titre sérique multiplié par quatre peut indiquer une infection, une réinfection ou l'échec d'un traitement. De même, un titre sérique divisé par quatre en cours de traitement indique un traitement adéquat de la syphilis. LIMITES DE LA PROCEDURE 1. Un résultat positif obtenu avec l'USR Antigen ne doit pas être interprété comme un diagnostic de syphilis. Inversement, un test USR négatif (sérum non réactif) ne permet pas à lui seul d'écarter un diagnostic de syphilis. 2. Un effet prozone peut expliquer la non réactivité d'un sérum non dilué positif vrai. L'effet prozone aboutit souvent à des résultats faiblement positifs (sérum faiblement réactif) ou négatifs (sérum non réactif) " estimés ". Les échantillons qui présentent de tels résultats négatifs (sérum non réactif) doivent être analysés quantitativement. 3. Des faux positifs peuvent être obtenus avec des tests non tréponémiques chez les toxicomanes et en cas de lupus érythémateux, mononucléose, malaria, lèpre ou pneumonie virale, ou chez les individus récemment vaccinés. 12 4. L'exposition prolongée des réactifs à des températures autres que les températures spécifiées a un effet adverse sur ceux-ci. 5. La sensibilité du test décroît si la température de la zone de test, des échantillons ou des réactifs est inférieure à 23 °C. Si la température est supérieure à 29 °C, la sensibilité du test est accrue. 12 6. Les résultats du test sont imprévisibles avec des échantillons hémolysés, contaminés ou présentant une turbidité très importante. 7. Les résultats de tests peuvent être erronés si la vitesse ou la durée de rotation ne sont pas conformes. CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES13,14 Les performances du test USR sur lame ont été comparées à celles du test à la réagine plasmatique rapide (RPR) sur carte et du test VDRL sur lame dans une étude menée par Pettit, Larsen, Pope, Perryman et Adams. 13 Des analyses quantitatives ont été réalisées sur 664 sérums syphilitiques provenant de patients traités et non traités à différents stades de la maladie. L'étude portait également sur 95 sérums faux positifs et 36 sérums provenant de donneurs sains. Le test VDRL sur lame et le test RPR sur carte ont servi de base de comparaison avec le test USR. Les résultats obtenus avec les tests USR quantitatifs étaient similaires à ceux des tests VDRL et RPR avec environ 84 % de concordance. 13 Dans une seconde étude menée par Saxena et Ghosh, 14 les performances du test USR sur lame ont été comparées à celles du test VDRL standard sur lame et du test de fixation du complément (CF). Les tests ont été effectués sur 476 échantillons sanguins. Les résultats obtenus sont récapitulés dans le tableau ci-dessous et montrent que le test USR détecte 93 % des sérums réactifs syphilitiques. Quantités de sérums Résultats du test USR Résultats du test VDRL Résultats du test CF 43 + + + 2 - + - 1 + - - 430 - - - CONDITIONNEMENT Nº réf. Description 224051 Difco USR Antigen, 6 x 3 mL 235161 Difco USR Test Control Serum Set, 1 jeu Le jeu contient : Sérum réactif à l'antigène non tréponémique, 3 mL Sérum faiblement réactif à l'antigène USR, 3 mL Sérum non réactif à l'antigène non tréponémique, 3 mL Flacons pour aliquoter, 3 flacons REFERENCES : Voir la section « References » dans la notice en anglais. !Difco USR Antigen Difco USR Test Control Serum Set Deutsch VERWENDUNGSZWECK Das Difco USR Antigen für Reagintests mit nicht wärmebehandeltem Serum Reagin (Unheated Serum Reagin = USR) wird empfohlen zur Verwendung beim USR-Test zum Nachweis von Reagin (einer antikörperähnlichen Substanz) mittels qualitativer und quantitativer Objektträger-Flockungstests sowie als Hilfsmittel für die Diagnostizierung von Syphilis. Der USR Test Control Serum Set (USR-Test-Kontrollserumsatz) besteht aus standardisierten Humanseren, die als Kontrollen für den USR-Test herangezogen werden. ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG Treponema pallidum ist der Erreger von Syphilis. Syphilis ist eine chronische Infektionskrankheit mit klinischen Manifestationen, die in verschiedenen Stadien auftreten. Für den Nachweis der Erkrankung in den einzelnen Stadien werden spezifische Labortests empfohlen. Während des Primärstadiums liegen Treponemen in der charakteristischen Läsion, dem Schanker, vor und sind mittels mikroskopischer1 Dunkelfelduntersuchung oder direktem Fluoreszenz-Antikörper-Test auf T. pallidum (DFA-TP-Test) nachweisbar. Im Verlauf des Sekundärstadiums sind die meisten serologischen Tests auf Syphilis reaktiv, und Treponemen sind mittels mikroskopischer Dunkelfelduntersuchung in den Läsionen nachweisbar. Die asymptomatische Latenzphase kann Jahre anhalten. Serologische Tests sind in der frühen Latenzphase gewöhnlich reaktiv, jedoch nimmt die Reaktivität von Nicht-Treponema-Tests im Verlauf der späten Latenzphase ab. Symptome des Tertiärstadiums, der sogenannten Spätsyphilis, können 10 - 20 Jahre nach der Erstinfektion auftreten. Circa 71 % der Patienten im Tertiärstadium der Syphilis zeigen reaktive Nicht-Treponema-Tests. 2,3 Im Tertiärstadium sind Treponema-Tests gewöhnlich reaktiv und die einzige Basis für eine Diagnose. Die Läsionen im Syphilis-Tertiärstadium enthalten nur wenige Treponemen. Neurosyphilis und kardiovaskuläre Spätsyphilis sind Komplikationen des Syphilis-Tertiärstadiums. Da die klinischen Manifestationen von Syphilis mit anderen infektiösen oder nicht infektiösen Zuständen verwechselt werden können, muss eine korrekte Diagnose die mikroskopische Untersuchung von Läsionsmaterial sowie serologische Ergebnisse einschließen. 2 Difco USR Antigen ist ein Nicht-Treponema-Antigen und besteht aus Cardiolipin, Cholesterin und Lecithin. Das Antigen ist eine Modifizierung der VDRL-Antigen-Emulsion des Venereal Disease Research Laboratory (VDRL) in einer USR-Suspensionslösung. Die Antigensuspension enthält Cholinchlorid zur Förderung der Reaktivität des Reagins im nicht wärmebehandelten Serum. 4 Der USR-Test eignet sich sowohl für qualitative als auch für quantitative Bestimmungen. Nicht-Treponema-Tests dienen zur Bestimmung von Reagin, einer in syphilitischem Serum nachweisbaren antikörperähnlichen Substanz. Reagin ist mitunter auch im Serum von Personen mit anderen akuten oder chronischen Erkrankungen nachweisbar. Reaktive Nicht- Treponema-Tests unterstützen die Diagnose von latenter subklinischer Syphilis und sind wirksame Hilfsmittel zum Fallnachweis im Rahmen epidemiologischer Untersuchungen. Im Hinblick auf die Beobachtung des Ansprechens der Therapie sind Nicht-Treponema-Tests den Treponema-Tests überlegen. 2 Nicht-Treponema-Antigentests sind nicht vollkommen syphilis-spezifisch und zeigen auch nicht in allen Stadien der Syphilis eine zufriedenstellende Empfindlichkeit. Wenn die Ergebnisse eines Nicht-Treponema-Antigentests nicht mit dem klinischen Erscheinungsbild übereinstimmen, ist ein Treponema-Antigentest, wie bspw. der Fluoreszenz-Treponema-Antikörper-Absorptionstest (FTA-ABS-Test) 2,3 durchzuführen. Nicht- Treponema-Tests, wie der USR-Test, dienen zum Screening von Patientenserum und erbringen nur einen präsumtiven Syphilis-Nachweis. Treponema-Tests, wie der FTA-ABS-Test dienen zur Bestätigung. Die Wahrscheinlichkeit eines reaktiven USR-Testergebnisses in den verschiedenen Stadien einer unbehandelten Syphilis wird folgendermaßen angegeben: 3 Stadium der unbehandelten Syphilis Reaktiv (%) Primär 80 Sekundär 100 Latenzphase 95 5
S1238(0903).qxd 10/27/2003 2:03 PM Page 6 VERFAHRENSGRUNDLAGEN Beim USR-Test wird nicht wärmebehandeltes Patientenserum mit einer gepufferten USR- Antigen-Kochsalzlösungssuspension vermischt, die Cardiolipin, Lecithin und Cholesterin enthält. Beim Kombinieren von Reagin und USR-Antigen bilden sich mikroskopische Klümpchen, was als Flockenbildung bezeichnet wird. REAGENZIEN USR Antigen besteht aus 0,03 % Cardiolipin und 0,9 % Cholesterin, in absolutem Alkohol gelöst, mit einer ausreichenden Menge Lecithin (ca. 0,2 %) zur Erzielung einer standardmäßigen Reaktivität. Das Antigen wird in einer Lösung suspendiert, die EDTA, Cholinchlorid und Phosphat mit 0,2 % Thimerosal als Konservierungsmittel enthält. 5,6 USR Test Control Serum Set enthält je 3 mL der folgenden lyophilisierten Humanseren mit 0,02 % Thimerosal als Konservierungsmittel: Nontreponemal Antigen Reactive Serum USR Weakly Reactive Serum Nontreponemal Antigen Nonreactive Serum Diese Reagenzien sind standardisiert, um beim Testen mit dem USR-Testverfahren reaktive, schwach reaktive bzw. nicht reaktive Bestimmungsergebnisse zu erbringen. Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen 1. In-vitro-Diagnostikum. 2. WARNUNG! POTENZIELL BIOGEFÄHRLICHE REAGENZIEN. Alle zur Herstellung des USR Test Control Serum Set herangezogenen Spendereinheiten wurden mit einer von der USamerikanischen Gesundheitsbehörde FDA zugelassenen Methode auf das Vorliegen von Antikörpern gegen das HI-Virus (HIV) und das Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HbsAg) getestet und für negativ befunden (nicht wiederholt reaktiv). 3. Da keines der gegenwärtig bekannten Testverfahren das Vorhandensein von HIV, Hepatitis B und anderen infektiöser Erreger vollständig ausschließen kann, sollten Proben und Kontrolllösungen als potenziell infektiös gehandhabt werden. Beim Umgang mit allen mit Blut oder anderen Körperflüssigkeiten kontaminierten Artikeln sind die "Allgemeinen Vorsichtsmaßnahmen" 7-10 sowie die einschlägigen Institutionsrichtlinien zu beachten. 4. USR Test Control Serum Set Die Verpackung dieses Produkts enthält Naturkautschuk (getrocknet). Aufbewahrung: USR Antigen bei 2 - 8 °C lagern. Sollte die ursprüngliche Menge von 3 mL den Bedarf für einen Testzeitraum übersteigen, die Reste vom ersten Anwendungstag in ein oder mehrere Aufbewahrungsröhrchen transferieren und bei 2 - 8 °C lagern. Die lyophilisierten Seren des USR Test Control Serum Set bei 2 - 8 °C lagern. Die rekonstituierten Kontrollseren bei 2 - 8 °C lagern oder in ausreichende Aliquote für einen Testtag aufteilen und bei -20 °C lagern. Nach dem Auftauen nicht erneut einfrieren. Werden die Reagenzien längere Zeit anderen Temperaturen ausgesetzt als vorgeschrieben, ist dies den Produkten abträglich. Haltbarkeit des Produkts: Das Verfallsdatum gilt für das im unversehrten Behälter aufbewahrte Produkt bei Einhaltung der Lagervorschriften. Zusammenklebendes, verfärbtes oder sonstige Verfallsanzeichen aufweisendes Produkt nicht verwenden. PROBENENTNAHME UND -VORBEREITUNG Mittels aseptischer Venenpunktion eine Blutprobe in ein sauberes, trockenes Röhrchen ohne Antikoagulans entnehmen. Die Probe nach ihrer Gerinnung 5 min lang bei 1500 - 2000 U/min zentrifugieren, um Serum für die Testdurchführung zu gewinnen. Serumproben maximal 4 h lang bei Raumtemperatur aufbewahren. Eine längere Lagerung ist bei 2 - 8 °C möglich (bis zu 5 Tage) bzw. bei Temperaturen unterhalb -20 °C. Serumproben müssen klar und hämolysefrei sein und dürfen keine sichtbaren Anzeichen von Bakterienkontamination, wie Trübung oder Partikel, aufweisen. Zusätzliche Informationen zur Probenentnahme sind der einschlägigen Literatur zu entnehmen. 2,11,12 VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial: Difco USR Antigen, Difco USR Test Control Serum Set. Benötigtes, jedoch nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial: 0,9%ige Kochsalzlösung, wiederverwendbare Glasspritze (1 - 2 mL), wiederverwendbare kalibrierte 18-G-Kanülen ohne Anschrägung, Mikropipette (50 µL), bis zur Spitze skalierte Serologiepipetten (1,0 mL mit 1/100-mL-Skalierung; 5,0 mL mit 1/10-mL-Skalierung; 10,0 mL mit 1/10-mL-Skalierung). Objektträger (5,08 x 7,62 cm) mit Paraffin- oder Keramikringen von ca. 14 mm Durchmesser und ausreichender Höhe zur Verhütung von Flüssigkeitsaustritt während des Rotierens. Objekthalter für Objektträger von 5,08 x 7,62 cm. Auf 180 ± 2 U/min einstellbarer mechanischer Rotationsarm, der einen horizontalen Kreis von 19 mm Durchmesser beschreibt. Lichtmikroskop mit 10X-Okular und 10X-Objektiv, steriles destilliertes Wasser, absoluter Alkohol, Azeton, Zeitgeber, Applikatorstäbchen. Vorbereitung der Reagenzien: Vor der Testdurchführung alle Materialien Raumtemperatur (23 - 29 °C) erreichen lassen. Sicherstellen, dass alle gläsernen Utensilien und Pipetten sauber sind und keine Reinigungsmittelrückstände aufweisen. USR Antigen ist gebrauchsfertig. USR Test Control Serum Set: Zum Rekonstituieren der Kontrollseren 3 mL steriles, destilliertes Wasser zugeben und behutsam rotieren, bis der Inhalt vollständig gelöst ist. Vorbereitung spezifischer Glasutensilien: Spritzen mit Kanülen: 1. Mit Leitungswasser vorspülen. 2. In einer Reinigungslösung für Glasutensilien einweichen und von Hand gründlich waschen. 3. Mit Leitungswasser 6 - 8 Mal spülen. 4. Mit frischem destilliertem Wasser spülen. 5. Mit absolutem Alkohol spülen. 6. Mit Azeton spülen. 7. An der Luft trocknen lassen, bis der Azetongeruch vollständig verschwunden ist. 8. Vor dem Verwahren die Kanülen von den Spritzen entfernen. Objektträger mit Keramikringen: 1. Mit Leitungswasser vorspülen. 2. Mit einer Reinigungslösung für Glasutensilien waschen. Objektträger mit Keramikringen nicht längere Zeit in der Reinigungslösung einweichen, da dies zum Brüchigwerden und Absplittern der Keramikringe führt. 3. Mit Leitungswasser 3 - 4 Mal spülen. 4. Mit frischem destilliertem Wasser spülen. 5. Mit einem sauberen fusselfreien Tuch abtrocknen. Lässt sich das Serum auf gereinigten Objektträgern nicht gleichmäßig im Inneren des Kreises verteilen, folgendermaßen vorgehen. 6. Die Objektträger mit einem nicht scheuernden Reinigungsmittel schrubben. 7. Abspülen und mit einem sauberen fusselfreien Tuch abtrocknen und polieren. Genauigkeitsprüfung für die Antigensuspensionskanüle 1. Die Genauigkeit des Tests ist abhängig von der verwendeten Menge Antigensuspension. Die Kalibrierung der Kanüle ist in regelmäßigen Abständen zu überprüfen, um sicherzustellen, dass das korrekte Volumen an USR Antigen-Suspension abgegeben wird. 2. Für qualitative und quantitative Serumtests die Antigensuspension aus einer Spritze mit 18-G-Kanüle ohne Anschrägung abgeben, die 45 ± 1 Tropfen Antigensuspension pro mL dispensiert, wenn sie senkrecht gehalten wird. 3. Die Kanüle an einer 1-mL-Spritze montieren. Die Spritze mit 0,5 mL USR Antigen- Suspension füllen. Die Spritze senkrecht halten und die Anzahl der abgegebenen Tropfen in 0,5 mL zählen. Die Kanüle ist dann korrekt kalibriert, wenn 0,5 mL in 22 - 23 Tropfen abgegeben werden. 4. Die Kanüle einstellen oder ersetzen, falls diese Spezifikation nicht eingehalten wird. Die Kalibrierung für die neue bzw. eingestellte Kanüle wiederholen. 5. Nach jedem Anwendungstag die Dispensierkanüle, Flasche und Spritze reinigen; dazu Wasser, Alkohol und Azeton verwenden (in dieser Reihenfolge). Die Kanüle nach der Reinigung von der Spritze entfernen. Qualitativer USR-Objektträger-Serumtest Zur Erzielung zuverlässiger und reproduzierbarer Testergebnisse müssen die USR Antigen- Suspension, Kontrollen und Testproben bei der Testdurchführung eine Temperatur von 23 - 29 °C aufweisen. 1. Unter Zuhilfenahme einer Sicherheitspipette 50 µL nicht wärmebehandeltes Serum in einen Ring eines Objektträgers mit Paraffin- oder Keramikringen pipettieren. Keine gläsernen Objektträger mit Kavitäten, Vertiefungen, oder Glasringen verwenden. Das Serum mit einer kreisförmigen Bewegung der Pipettenspitze verteilen, so dass das Serum die gesamte Innenfläche des Paraffin- oder Keramikrings bedeckt. 2. Behutsam schwenken, um das USR Antigen wieder zu suspendieren, und die gewünschte Menge mit Hilfe einer Spritze und Kanüle aufnehmen. 3. Die Spritze und Kanüle mit der USR Antigen-Suspension senkrecht halten. Mehrere Tropfen abgeben, um die Luft aus der Kanüle zu entfernen. Exakt 1 frei fallenden Tropfen (22 µL) Antigensuspension in jeden Kreis mit Serum hinzugeben. Die Kanüle darf das Serum nicht berühren. 4. Den Objektträger auf dem mechanischen Rotationsarm platzieren. Den Objektträger 4 min lang bei 180 ± 2 U/min rotieren lassen. Bei trockenen Umgebungsbedingungen die Objektträger während des Rotierens mit einer feuchten und feuchtigkeitsspendenden Abdeckung versehen, um übermäßiges Verdunsten zu vermeiden. 5. Den Objektträger unmittelbar nach dem Rotieren vom Rotationsarm nehmen, und die Testergebnisse unter Verwendung eines 10X-Okulars und eines 10X-Objektivs mikroskopisch ablesen. Quantitativer USR-Serumtest 1. Zur quantitativen Bestimmung eines Endtiters für Serumproben auf dem Objektträger Serumverdünnungen von 1:1, 1:2, 1:4 und 1:8 herstellen, wie im Folgenden beschrieben. 2. In die Kreise 2 - 4 50 µL 0,9%ige Kochsalzlösung abgeben. Die Kochsalzlösung nicht verteilen. 3. In die Kreise 1 und 2 50 µL Serum abgeben. 4. Die Kochsalzlösung und das Serum in Kreis Nr. 2 vermischen; dazu das Gemisch ca. 8 Mal mit der Pipette aufnehmen und wieder abgeben. Behutsam mischen, um Blasenbildung zu vermeiden. 5. Aus Kreis 2 (1:2) 50 µL in Kreis 3 transferieren und mischen. 6. Aus Kreis 3 (1:4) 50 µL in Kreis 4 (1:8) transferieren, vermischen, und anschließend 50 µL aus Kreis 4 verwerfen. 6
Page 1 and 2: Revisions Rev From Rev To ECO # Dat
Page 3 and 4: S1238(0903).qxd 10/27/2003 2:03 PM
Page 5: S1238(0903).qxd 10/27/2003 2:03 PM
Page 9 and 10: S1238(0903).qxd 10/27/2003 2:03 PM
Page 11 and 12: S1238(0903).qxd 10/27/2003 2:03 PM
Page 13: S1238(0903).qxd 10/27/2003 2:03 PM

S1238(0903) - BD

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?