Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
▼B<br />
1. PRINCIPIO DEL METODO<br />
1.1. Metodo di riferimento<br />
18. ACIDO LATTICO<br />
L'acido lattico totale (L-lattato e D-lattato) viene ossidato, in presenza<br />
di nicotinammide-adenina-dinucleotide (NAD), a piruvato mediante<br />
una reazione catalizzata dalla L-lattato deidrogenasi (L-LDH) e dalla<br />
D-lattato deidrogenasi (D-LDH).<br />
L'equilibrio della reazione è spostato verso il lattato. L'eliminazione del<br />
piruvato dal mezzo di reazione sposta l'equilibrio della reazione nel<br />
verso della formazione di piruvato. In presenza di L-glutammato, il<br />
piruvato è trasformato in L-alanina con una reazione catalizzata dal<br />
glutammato-piruvato-transaminasi (GPT)<br />
(1) L-lattato + NAD + piruvato + NADH + H +<br />
(2) D-lattato + NAD + piruvato + NADH + H +<br />
(3) Piruvato + L-glutammato L-alanina + α-chetoglutarato<br />
La formazione di NADH, misurata dall'aumento di assorbanza alla<br />
lunghezza d'onda di 340 nm, è proporzionale alla quantità di lattato<br />
presente.<br />
Nota:<br />
L'acido L-lattico può essere determinato singolarmente mediante le<br />
reazioni (1) e (3).<br />
L'acido D-lattico può essere determinato singolarmente mediante le<br />
reazioni (2) e (3).<br />
1.2. Metodo usuale<br />
L'acido lattico, separato su colonna di resina scambiatrice di anioni<br />
viene ossidato a etanale e dosato per colorimetria dopo reazione con<br />
nitroprussiato di sodio e piperidina.<br />
2. METODO DI RIFERIMENTO<br />
2.1. Reattivi<br />
2.1.1. Soluzione tampone a pH 10 (glicilglicina a 0,6 mole/l; L-glutammato a<br />
0,1 mole/l).<br />
Sciogliere in circa 50 ml di acqua bidistillata 4,75 g di glicilglicina, e<br />
0,88 g di acido L-glutammico; portare a pH 10 con alcuni ml di<br />
soluzione di idrossido di sodio a 10 M e portare a 60 ml con acqua<br />
bidistillata.<br />
Alla temperatura di 4 °C la soluzione si mantiene stabile per almeno<br />
12 settimane.<br />
2.1.2. Soluzione di nicotinammide-adenina-dinucleotide (NAD) a circa 40 ∙<br />
10 − 3 M; sciogliere in 30 ml di acqua bidistillata 900 mg di NAD.<br />
Alla temperatura di 4 °C la soluzione si mantiene stabile per almeno<br />
4 settimane.<br />
2.1.3. Sospensione di glutammato-piruvato-transaminasi (GPT) a 20 mg/ml.<br />
Alla temperatura di 4 °C la sospensione si mantiene stabile per<br />
almeno 1 anno.<br />
2.1.4. Sospensione di L-lattato-deidrogenasi (L-LDH) a 5 mg/ml. Alla<br />
temperatura di 4 °C la sospensione si mantiene stabile per almeno 1<br />
anno.<br />
2.1.5. Sospensione di D-lattato-deidrogenasi (D-LDH) a 5 mg/ml. Alla<br />
temperatura di 4 °C la sospensione si mantiene stabile per almeno 1<br />
anno.<br />
Prima del dosaggio si raccomanda di procedere alla verifica dell'attività<br />
dell'enzima.<br />
Nota:<br />
Il complesso dei reattivi necessari è reperibile in commercio.<br />
1990R2676 — IT — 13.08.2005 — 011.001 — 104
Change language