Patologia Clinica - Docente.unicas.it

Patologia Clinica
Lezione 3
Dott.ssa Samantha Messina
Modulo: Patologia clinica
Anno accademico 2011/2012
II° anno, I° semestre
CdL Infermieristica, Facoltà di Medicina e Chirurgia,
Università degli Studi del Molise

Introduzione ai gruppi
sanguigni

I GLOBULI ROSSI
• Piccoli dischi biconcavi
• Si privano di nucleo quando raggiungono completa
maturità
• L'emoglobina (Hb):
– proteina complessa contenuta nel citoplasma
– funzione e sintesi legate alla presenza di un radicale di Fe
– necessaria per il trasporto dell'ossigeno e dell'anidride
carbonica
• Quantità media di globuli rossi:
– sesso femminile: 4.500.000/ml
– sesso maschile: 5.000.000/ml

I gruppi sanguigni
I gruppi sanguigni vengono distinti in
base alla presenza o meno, sul globulo
rosso, di determinate sostanze dette
antigeni e di determinate agglutinine
plasmatiche

Le agglutinine
Le agglutinine sono anticorpi capaci di
distruggere in vitro e in vivo i globuli
rossi contenenti antigeni di gruppo
diverso tramite una reazione di
aggregazione detta agglutinazione

Gruppi AB0
I primi gruppi sanguigni identificati sono quelli del sistema noto
come sistema AB0 (A, B, Zero)
Ciascun globulo rosso può contenere:
• l'antigene A (gruppo A)
• oppure quello B (gruppo B)
• oppure entrambi (gruppo AB)
• oppure nessuno (chiamato per questo gruppo Zero)

Gruppi AB0
Inoltre il plasma sanguigno degli individui di:
• gruppo A contiene l'agglutinina beta (anti-B) capace di
distruggere i globuli rossi del sangue dei gruppi B e AB;
• gruppo B contiene l'agglutinina alfa (anti-A) capace di
distruggere i globuli rossi dei gruppi A e AB;
• gruppo 0 sono presenti entrambe le agglutinine;
• gruppo AB nessuna.

Gruppi AB0
Ciò ha enorme importanza nella pratica della
trasfusione:
il ricevente non deve avere anticorpi rivolti
contro i globuli rossi del donatore poichè
se ciò si verificasse, la vita stessa del
ricevente, sarebbe in pericolo.

Gruppi AB0
Il genere umano si differenzia in 4
gruppi in base alla presenza o
all'assenza di antigeni A e/o B nei
globuli rossi e degli anticorpi
contenuti nel siero

Il sangue viene
esaminato con reagenti
detti:
• “siero anti A”
• “siero anti B”
•Se non si verifica
nessuna reazione il
sangue in esame
appartiene al "gruppo
Zero" (0) donatore
universale
Gruppo 0

Se invece si ha reazione
solo col siero "anti A" il
sangue esaminato
appartiene al "gruppo A".
Gruppo A

Se la reazione si verifica
solo col siero "anti B" il
sangue esaminato
appartiene al "gruppo B".
Gruppo B

In presenza di reazione
sia con il siero "anti A"
che col siero "anti B" il
sangue esaminato
appartiene al "gruppo
AB". Ricevente universale
Gruppo AB

0
A
B
AB
Gli alleli multipli dei gruppi sanguigni del sistema AB0
Gruppi
sanguigni
(fenotipo)
Genotipi
ii
I A I A
I A i
I B I B
I B i
I A I B
Anticorpi
nel sangue
Anti-A
Anti-B
Anti-B
Anti-A
-
Reazione di
agglutinazione
O A B AB

Gruppo Rh
• Nel 1941 viene scoperto nei globuli rossi di una scimmia,
Macacus Rhesus, un nuovo antigene
• Dopo avere inoculato in alcune cavie e conigli campioni di
sangue della scimmia Macacus rhesus osservarono che il
siero dei conigli e delle cavie cosi immunizzati era in
grado di agglutinare l’85% dei globuli rossi umani
• Questo fattore agglutinogeno è presente sulle emazie
umane, "Rh" deriva dal nome della scimmia

Gruppo Rh
• Il gruppo Rh in realtà consta di tre distinte frazioni
• Rh0
• Rh‘
• Rh“
• Il gruppo Rh è capace di determinare la comparsa di agglutinine
specifiche nel sangue di altri individui

Gruppo Rh
• Come per gli antigeni del sistema AB0, la presenza o
l'assenza del fattore Rh è ereditaria ed in base ad
essa la popolazione viene suddivisa in due gruppi:
• Rh+ in cui è presente
• Rh- in cui manca

Gruppo Rh
• Tra gli altri sistemi trasmessi
geneticamente vi sono quindi:
– il fattore Rh
– i gruppi M e N; questi ultimi svolgono, talvolta, un
ruolo importante nelle controversie legali
relative all'accertamento della paternità

Gruppo Rh
• Gli antigeni che vengono genericamente denominati in
questo modo sono, in realtà, circa trenta
• Tra questi, il più importante risulta quello indicato
come antigene D
– in base alla sua presenza o assenza, permette di distinguere il
sangue rispettivamente in Rh-positivo e Rh-negativo
– è un antigene formato da una molecola di natura proteica

Incompatibilità Rh: MEN
• Il fattore Rh ha importanti riflessi in medicina. Un eventuale feto Rh+
avente madre Rh- e padre Rh+, provoca nel sangue della madre la
comparsa di anticorpi capaci di agglutinare le emazie Rh+
• Si parla di incompatibilità materno-fetale che si verifica in genere al
secondo parto o nei successivi
• Questa incompatibilità provoca la malattia emolitica del neonato (MEN)
(anche detta eritroblastosi fetale perché nel sangue del feto sono
presenti gli eritroblasti che sono i precursori midollari degli eritrociti)

Incompatibilità Rh: trasfusioni
• nel caso di eventuale trasfusione sanguigna, la
compatibilità del fattore Rh segue un andamento
analogo a quello del sistema AB0 poichè il ricevente
non deve sviluppare anticorpi contro il donatore
• Nei limiti del possibile, nella pratica clinica, al
ricevente viene trasfuso sangue di gruppo identico
al suo

Natura degli antigeni
L’attività antigenica A, B, H è determinata da
catene oligosaccaridiche presenti su due tipi di
molecole:
glicoproteine, nelle quali le catene
oligosaccaridiche sono legate mediante una
molecola di galattosamina
glicosfingolipidi nei quali le catene glicidiche sono
legate, mediante una catena di glucosio, ad un
lipide

Metodiche per la determinazione
del gruppo ABO
La determinazione del gruppo ABO deve necessariamente includere sia un
test eseguito sugli eritrociti che un’indagine sul siero dello stesso
soggetto; ciascuna delle due indagini rappresenta il controllo dell’altro.
I test vengono eseguiti a temperatura ambiente.
Le emazie devono essere cimentate con sieri anti-A e anti-B ed osservate
per rilevare la presenza o l’assenza di agglutinazione
I reagenti vengono solitamente preparati dal siero di soggetti immunizzati
con sostanze gruppo specifiche A o B in modo da indurre la produzione
di anticorpi ad alto titolo

Metodiche per la determinazione
del gruppo ABO
I test per la determinazione del gruppo ABO condotti
sugli eritrociti vengono definiti “test diretti”, e
possono essere eseguiti su vetrino, in provetta o su
micropiastre (ELISA).
I test eseguiti sul siero, che viene cimentato con emazie
di gruppo A e B, vengono definiti “test indiretti” o
“inversi”.

L’emocromo emocromo

IL SANGUE
Il sangue è formato da una sospensione di cellule (elementi
figurati) in un liquido chiamato plasma
Le cellule del sangue sono prodotte nel midollo osseo e negli
organi linfatici secondari (milza e linfonodi)
Il sangue svolge numerose ed importanti funzioni:
• trasporta l'ossigeno ai vari tessuti
• ne preleva l'anidride carbonica (CO 2 )
• trasporta sostanze nutritive (aminoacidi, zuccheri, sali
minerali) raccoglie le particelle escrete
• trasporta inoltre ormoni, enzimi e vitamine
• difesa dell'organismo

IL PLASMA
Il siero libero da cellule (plasma) può essere ottenuto per
centrifugazione. Il plasma (privato del fibrinogeno):
• è un fluido leggermente alcalino
• colore giallino
• costituito per il 90% da acqua
• Nove parti di questa sono costituite da sostanze organiche
(glucidi, lipidi (colesterolo, trigliceridi, fosfolipidi, lecitina,
grassi), proteine (globuline, albumine, fibrinogeno),
glicoproteine, ormoni (gonadotropine, eritropoietina,
trombopoietina), aminoacidi e vitamine
• Una parte è costituita da minerali (dissolte sotto forma
ionica, cioè dissociate in ioni positivi e negativi)

TIPI DI CELLULE CIRCOLANTI NEL
SANGUE
• ERITROCITI (GR)
• GRANULOCITI (WBC)
• LINFOCITI
• PIASTRINE (PLT)

Il sangue: 45% cellule; 55% plasma !

Emocromo
L'esame emocromocitometrico è, in realtà, un insieme di
test per valutare la parte corpuscolata del sangue e il
suo rapporto con la parte liquida
• Ci informa sulla quantità degli eritrociti e sulla loro
dimensione, forma e contenuto di emoglobina
• Sulla quantità totale e sui vari tipi di globuli bianchi o
leucociti
• Sulla quantità delle piastrine
• Sull'ematocrito, ovvero il rapporto tra la massa di
tutte queste cellule e il volume della parte liquida

Normal Hct Values:
adult man 42% - 52% *
adult woman 36% - 48% *
infant (3m) 30% - 36%
child (10y) 36% - 40%
* known approximate range
The Hct varies with age and sex.

Emocromo: Emocromo:
valori normali
Fornisce informazioni circa le tre filiere circolanti: circolanti:
Quantitative (numeriche) Morfologiche
CELLULE DIMENSIONI VALORE ASSOLUTO FORMULA
%
Eritrociti
Leucociti
PMN neutrofili
PMN eosinofili
PMN basofili
Monociti
Linfociti
7 – 8 µm 4.200.000-
5.400.000/mm 3
10-15 µm
10-15 µm
10-15 µm
10-15 µm
10-15 µm
4500 – 8500/mm3
2700-6000/mm3
45-260/mm3
20-85/mm3
135-510/mm3
900-3000/mm3
Piastrine 2-3 µm 200.000 – 400.000/mm3
55-70%
1-3%
0.5-1%
5-8%
20-35%

Emocromo VN
maschio femmina
Ematocrito (Hct Hct) 39-50% 39-5
36-47% -47%
Emoglobina
Eritrociti/µl
Eritrociti/
Leucociti /µl /
Piastrine/µl
Piastrine/
Vol corp medio (MCV)
Hb corp media (MCH)
13,5-18 g/dL g/dL
4,6-6,2 .10 3
4,5-11.10 3
150-450.10 3
83-9 -97 7 µm3 26-32 pg/cellula
12-16 g/dL
4,2-5,4.10 3
4,2-5,4.10
4,5-11.10 3
150-450.10 3
83-9 -97 7 µm3 26-32 pg/cellula

ERITROCITI:
ERITROCITI:
sono senza nucleo perché lo hanno espulso nei
processi maturativi midollari (hanno una emivita di 120 giorni)
GRANULOCITI:
GRANULOCITI:
hanno il nucleo, nucleo,
non si dividono e quindi non si
moltiplicano (spendono 10-12 ore in circolo poi passano ai tessuti
dove vivono da alcune ore ad alcuni giorni, svolgendo una funzione
antibatterica, senza più tornare nel torrente ematico (sono
compartimentalizzati)
compartimentalizzati
LINFOCITI:
LINFOCITI:
hanno il nucleo e si moltiplicano intensamente, vivono
da pochi giorni a molti anni, sono nel sangue, linfa e organi linfoidi. linfoidi
La permanenza in circolo è solo una parte della loro vita (sono
responsabili della competenza immunitaria)
PIASTRINE:
PIASTRINE:
sono senza nucleo e risultano dalla frammentazione
citoplasmatica dei precursori (hanno una emivita di 8-10 giorni e
sono nel circolo)

Eritrociti: cellule della respirazione (ematosi) in
quanto trasportano O 2 -Hb
Leucociti: cellule della difesa aspecifica e specifica:
•Granulociti: neutrofili, eosinofili, basofili
•Monociti (macrofagi)
•Linfociti B 15% con stimolo Ag si trasformano in
plasmacellule e producono Ig (Ab)
•Linfociti T 85% con stimolo Ag producono
mediatori dell’immunità cellulare
Piastrine: cellule del sistema emostatico-coagulativo
che funzionano in connessione con il sistema
endoteliale

ALTERAZIONI
1. Quantitative: aumento o diminuzione delle popolazioni
cellulari
2. Morfologiche
ALTERAZIONI QUANTITATIVE
VERE FALSE
Aumento= citosi -Errore di conta
-Mobilizzazione
compartimentale
Diminuzione=penia -Errore di conta
-da patologie o
meccanismi
interferenti

EMOCROMO ED ERITROCITI
• Numero degli eritrociti circolanti (GR)
• Emoglobina (Hb)
• Ematocrito (HCT)
• Parametri Corpuscolari Derivati:
– Volume corpuscolare medio (MCV)
– Emoglobina corpuscolare media (MCH)
– Concentrazione emoglobinica
corpuscolare media (MCHC).
• Variazioni quantitative:
– Riduzione Hb > ANEMIA
– Aumento Hb ed Hct >ERITROCITOSI
• Alterazioni morfologiche
– osservazione al microscopio ottico

EMATOCRITO (Hct)

EMATOCRITO (Hct)
L’esame dell’ematocrito misura il volume dei globuli rossi
(GR) centrifugati in un campione di sangue intero.
Per esempio, un Hct del 40% indica che un campione di
100 ml di sangue contiene 40 ml di GR concentrati
La concentrazione si ottiene centrifugando il sangue intero
trattato con anticoagulanti in un tubo capillare, in modo
che i GR siano ammassati strettamente senza che ci sia
emolisi
Scopo: aiutare nella diagnosi di policitemia, d’anemia, o di
stati anormali di idratazione

EMATOCRITO (Hct)
Un Hct basso suggerisce anemia, emodiluizione, o una
perdita importante di sangue
Un Hct alto indica policitemia od emoconcentrazione,
causata da disidratazione

INDICI ERITROCITARI
Gli indici dei globuli rossi (indici eritrocitari) ottenuti
usando i risultati del conteggio dei globuli rossi (GR)
e delle determinazioni dell’ematocrito (Hct),
forniscono informazioni importanti sulle dimensioni di
un GR medio e sul peso della sua Hb
MCV mean corpuscolar volume
MCH mean corpuscolar hemoglobin
MCHC mean corpuscolar hemoglobin concentration
Scopo: aiutare nella diagnosi e nella classificazione
delle anemie

INDICI ERITROCITARI
MCV rapporto tra Hct (volume delle cellule
ammassate) e numero dei GR, esprime le dimensioni
medie degli eritrociti ed indica se essi, rispetto alla
norma, hanno dimensioni minori (microciti), maggiori
(macrociti), o normali (normociti)
MCH rapporto tra Hb e GR, indica il peso
dell’emoglobina di un globulo rosso medio
MCHC rapporto tra peso dell’emoglobina e Hct,
definisce la concentrazione di Hb in 100 ml di GR
concentrati. Essa aiuta a distinguere i GR colorati
normalmente (normocromici) da quelli più pallidi
(ipocromici)

LE ANEMIE
RIDOTTA CONCENTRAZIONE DI Hb NEL SANGUE PERIFERICO
Hb < 12.5 g/dl NEL MASCHIO
< 11.5 g/dl NELLA FEMMINA
IL LIVELLO DI Hb DEFINISCE IL GRADO DI ANEMIA
> 10 g / dL 8-10 g / dL < 8 g / dL
EMATOCRITO, CONTA ERITROCITI, CONTA RETICOLOCITI E VOLUME
CORPUSCOLARE MEDIO (MCV) SERVONO PER IDENTIFICARE IL TIPO DI
ANEMIA.
Hct/GR =MCV 45%/ 5x10 6 =90 µm 3
MCV < 80 µm 3 MICROCITOSI
MCV > 95 µm 3 MACROCITOSI

MCV
MCH
MCHC
Confronto degli indici eritrocitari
Valori normali
(normocitica,
normocromica)
84-99 µm 3
26-32 pg/cellula
30-36 g/dl
nelle anemie
Anemia
sideropenica
(microcitica,
ipocromica)
60-80 µm 3
5-25 pg/cellula
20-30 g/dl
Anemia
perniciosa
(macrocitica,
normocromica)
96-150 µm 3
33-53 pg/cellula
33-38 g/dl

Osservazione di uno striscio di sangue
Un ingrandimento di 200 volte è sufficiente per
osservare e identificare i differenti tipi di cellula.
Tuttavia, un ingrandimento superiore vi permette di
osservare meglio le cellule nei loro dettagli. Potete
osservare subito lo striscio usando sia obiettivi a secco
che ad immersione.

ALTERAZIONI MORFOLOGICHE
da patologia extraematologica
(sferociti, drepanociti,ellissociti)
ALTERAZIONI MORFOLOGICHE
da patologia ematologica
(cheratocitie
cheratocitie e schistociti)
schistociti

ECHINOCITI
ACANTOCITI
STOMATOCITI
LEPTOCITI
SFEROCITI
ELLISSOCITI
DREPANOCITI
ALTERAZIONI MORFOLOGICHE
da patologia extraematologica
numerose spicule
regolari.
poche spicule grandi ed
irregolari
fissurazione centrale
Cellule sottili
Microciti iperemici
(cellule preemolitiche)
Ovali a sigaro
Cellule falciformi
(IRC, alcalosi, ipoalbuminemia,
ipokaliemia)
(epatopatia alcoolica, s. da
malassorbimento)
(epatopatia alcoolica)
A. Talassemiche
Sferocitosi ereditaria,
a. Emolitiche
Ellissocitosi ereditaria,
a. talassemiche,
a. megaloblastiche
drepanocitosi

Acantociti: le forme crenate dei GR dipendono dalla osmolarità
elevata del plasma che estrae acqua dalle cellule

CHERATOCITI E
SCHISTOCITI
DACRIOCITI
CODOCITI
ALTERAZIONI MORFOLOGICHE
da patologia ematologica
eritrociti
frammentati
a lacrima
a bersaglio
A. Emolitiche
A. Megaloblastiche
A. Talassemiche
A. Sideropeniche
Mielofibrosi
A. Talassemiche
Splenectomia
A. Sideropeniche
A. Talassemiche
Espressione
dieritropoiesi
inefficace
(fragilità
eritrocitaria)

FORMA
L’eritrocita normale ha forma rotondeggiante. La
variabilità di forma degli eritrociti definisce la
poichilocitosi che generalmente è espressione di
eritropoiesi “inefficace e fragile”
In genere si rileva che tanto maggiore è
l’anisocitosi tanto più è frequente la poichilocitosi
(aniso-poichilocitosi)
Quasi sempre nelle anemie vi è riscontro di un
certo grado di aniso-poichilocitosi.

COLORABILITA’
Generalmente esprime la quantità di Hb contenuta negli eritrociti.
Parametri da valutare
MCH = contenuto medio di Hb (VN 27 – 32 pg)
MCHC = concentrazione media di Hb (VN 33 – 38%)
HDW = indice di variabilità di cromia (emoglobinizzazione) (VN1.99 –
2.88 g/dl)
Anisocromia: disomogenea colorabilità della popolazione eritrocitaria
per differente contenuto di Hb negli eritrociti.
Ipocromia: diminuita colorabilità per riduzione di sintesi di Hb
Ipercromia ?
Policromatofilia: eritrociti con granulazioni basofile (residui di RNA)
che distinguono gli eritrociti più giovani (reticolociti). Esprime una
buona risposta midollare.

INCLUSIONI ERITROCITARIE
Sono visibili con colorazioni routinarie.
•Punteggiati Punteggiati basofili (siderociti): (
eritrociti con piccole punteggiature blu
citoplasmatiche (Fe++ non incorporato nell’Hb)
•Anelli di Cabot: residui del nucleo eritroblastico (fuso mitotico)
•Corpi di Howell-Jolly: granuli blu intenso (frammenti nucleari)
•Corpi di Heinz: inclusioni rosso-violetto riferibili ad aggregati di
Hb denaturata adesi alla membrana eritrocitaria.

DIAGNOSTICA DELLE ANEMIE
La classificazione cinetica delle anemie:
1° gruppo: ridotta formazione di eritroblasti
2° gruppo: ridotta formazione di eritrociti
3° gruppo: ridotta sintesi di Hb
4° gruppo: ridotta sopravvivenza degli eritrociti
Utile è associare a tali parametri i seguenti criteri:
Emoglobina Hb (g/100 ml) esprime l’entità dell’anemia
MCV < 80 µm 3 anemie microcitiche
> 80 µm 3 anemie non microcitiche

Anemia da carenza di B12

Anemia a cellule falciformi

Anemia da carenza di ferro

Queste diapositive sono state realizzate per il Corso Integrato di Farmacologia e
diagnostica di laboratorio, Modulo di Patologia clinica, CdL Infermieristica, Facoltà
di Medicina e Chirurgia, Università del Molise
Nel caso riscontraste errori o inesattezze potete inviare una e-mail all’indirizzo
s.messina@unicas.it Nel caso voleste utilizzare queste diapositive per i vostri corsi vi
saremmo molto grati se lo segnalaste allo stesso indirizzo di posta