marcatori autoanticorpali per la diagnosi del diabete tipo i - Simel

MARCATORI AUTOANTICORPALI PER LA
DIAGNOSI DEL DIABETE TIPO I:
CONSIDERAZIONI METODOLOGICHE E
APPLICAZIONI CLINICHE
E. Tonutti (Udine)

10
42
L’incidenza di DT1 in
Europa ed in altri Paesi
del Mediterraneo.
(età 0-14 anni)
Rischio elevato
Rischio moderato
Rischio basso
7
19
14
15 12 11
17
20
16
8 8
36
13
10
12
7
22
13
14
12
10
21
8
9.8
8
7 6
9
26
6
6
12
7
9
7
36
6
9
10
7
6
15
7
5
6
15
8
5

Stages in Development of Type 1 Diabetes
GENETICALLY AT RISK
BETA CELL MASS
GENETIC
PREDISPOSITI
ON
INSULITIS
BETA CELL INJURY
MULTIPLE ANTIBODY
POSITIVE
LOSS OF FIRST PHASE
INSULIN RESPONSE
“PRE”-
DIABETES
DIABETES
J. Skyler
TIME
NEWLY DIAGNOSED DIABETES

Gestational Diabetes: Risk at 2 years Type 1
Diabetes by Autoantibodies
ICA, GAD65, ICA512(IA-2)
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 Ab >=1 Ab 1 Ab 2 Ab 3 Ab
Sensitivity GAD=63%; Sensitivity 3 Abs=82%
Ziegler et al. Diabetes 1997: 46:1459-67, N=437

Sensitivity
Comment
Insulin 49-92% Higher levels young children
GAD (Glutamic acid
Decarboxylase)
84%
ICA512/IA-2 74%
IA-2β/Phogrin 61%
Carboxypeptidase H 10% Infrequent
Higher sensitivity adult onset
type 1A
Tyrosine Phosphatase like
molecule
Tyrosine Phosphatase like
molecule
GLIMA38 14-38% Not yet sequenced
GM2-1
ICA69
ICA12

DIABETE TIPO I E MARCATORI
IMMUNOLOGICI
•Oltre agli anti-insula (ICA in IFI) l’orientamento diagnostico
attuale prevede la determinazione di IAA, GADA, IA-2 utilizzando
antigeni ottenuti con tecniche ricombinanti:
IAA: più frequenti nei primi anni di vita. Rapida scomparsa.
GADA: prolungata persistenza dopo l’esordio.
IA-2: rapida evoluzione verso DT1.

ICA NEL PAZIENTE DIABETICO
Il maggiore ingrandimento mette in evidenza positività
verso le cellule β: si osserva una fluorescenza di tipo
granulare nel citoplasma di una parte delle cellule insulari.
Cellule β
Cellule α,δ,
PP negative

RIA-EIA a-GAD N=51 r = 0,944
CORRELAZIONE ANTI-GAD RIA ADALTIS-ELISA EUROIMMUN r = 0,944
60
55
50
RIA ANTI-GAD U/ml
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
1 10 100 1000 10000
ELISA ANTI-GAD IU/ml

RIA-EIA a-IA2 N=56 r = 0,915
CORRELAZIONE ANTI-IA2 RIA ADALTIS-ELISA EUROIMMUN r =0,915
60
55
50
45
RIA ANTI-IA2 U/ml
40
35
30
25
20
15
10
5
0
1 10 100 1000 10000
ELISA ANTI-IA2 IU/ml

OBBIETTIVO
• Valutare le performance diagnostiche dei nuovi
test ELISA per anti-GAD e anti-IA2 DiaMetra-
Menarini
• Comparazione con i test ELISA attualmente in
uso
• Valutazione dei test anti-GAD e anti-IA2
DiaMetra-Menarini su una popolazioni di 175
pazienti con diabete tipo I del Nord-Africa
(Tripoli-Libia)
• Studio della prevalenza di anti-GAD, IA2, antitireoperossidasi
(a-TPO), anti-tireoglobulina (a-
TG) e anti-transglutaminasi (a-tTG) nella
popolazione diabetica

EIA-EIA a-GAD N=60 r = 0,995
CORRELAZIONE ANTI-GAD EIA EUROIMMUN-EIA DIA METRA
MENARINI
r = 0,995
EIA DIA METRA MENARINI ANTI-GAD
IU/ml
275
250
225
200
175
150
125
100
75
50
25
0
0 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275
EIA EUROIMMUN ANTI-GAD IU/ml

EIA-EIA a-IA2 N=53 r = 0,991
CORRELAZIONE ANTI-IA2 EIA EUROIMMUN-EIA DIA METRA-
MENARINI
r = 0,991
EIA DIA METRA-MENARINI ANTI-IA2
IU/ml
450
400
350
300
250
200
150
100
50
0
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450
EIA EUROIMMUN ANTI-IA2IU/ml

Pazienti arruolati: n° 175 pazienti con diabete
tipo I (102 F/73 M)
Età media: 9.9 anni
Media dalla data di insorgenza del diabete: 6.5
anni
Pazienti che afferiscono al Tripoli Medical
Center (Prof. Suleiman Abusrewil) (Libia)

1 2 3 4 5 6
PERCENTUALE DI POSITIVITA' AUTOANTICORPI IN 175
PAZIENTI PEDIATRICI CON T1DM
80
74,3
70
60
50
40
30
20
10
0
23,4
TPO
8 9,7 9,4
EMA
tTG
TIR
33,1
a-TPO a-TIR a-tTG EMA a-GAD a-IA2
GAD
IA2

175 pazienti con
diabete tipo I
% di positività per a-GAD e/o a-IA2 = 80%
56.3
16.8 4.7
2.2
4.6
0 2.8
% di positività per a-
TPO e/o a-TG = 23.6%
% di positività per
a-tTG = 9.7%
% di copresenza dei diversi autoanticorpi associati a
diabete tipo I, tiroidite autoimmune e celiachia

175 pazienti con
diabete tipo I
% di positività per a-GAD e/o a-IA2 = 80%
56.3
16.8 4.7
2.2
4.6
0 2.8
% di positività per a-
TPO e/o a-TG = 23.6%
% di positività per
a-tTG = 9.7%
% di copresenza dei diversi autoanticorpi associati a
diabete tipo I, tiroidite autoimmune e celiachia

Il rischio cumulativo di
sviluppare anticorpi anti-TPO è
del 20.3% dopo 14 anni.

•Gli anticorpi anti-TPO compaiono in
soggetti anti-GAD positivi, ma non si
associano con positività per anti-IA2 o antiinsulina.
Nella maggioranza dei bambini con
positività per anti-GAD e anti-TPO gli anti-
GAD compaiono prima degli anti-TPO.
•Il rischio di sviluppare anti-TPO è più
elevato nel sesso femminile, in bambini con
ambedue i genitori diabetici e si associa al
genotipo HLA DRB1*03/DRB1*04-
DQB1*0302.

Barker, J. M. et al. J Clin Endocrinol
Metab 2004
• Su 162 bambini con almeno 1 anticorpo positivo
(GAD, IA2 e IAA) e monitorati per un periodo
medio di 4.06 anni si è evidenziato che:
• Nel 31% era un falso positivo
• Nel 31% era una positività transitoria
• Nel 36% era una persistente positività
• Qualora alla prima visita era presente più di un
anticorpo in associazione al genotipo HLA DR3/4
DQ8 la persistente positività era certa
• Solo la presenza del genotipo HLA DR3/4 DQ8 era
predittivo di progressione in diabete tipo I

TAKE HOME MESSAGES
• Il metodo ELISA è assolutamente affidabile per
la ricerca di autoanticorpi associati al diabete
• I test DiaMetra-Menarini offrono performance
eccellenti
• La ricerca di anticorpi anti-GAD, anti-IA2, antiinsula
e anti-insulina hanno un elevato valore
predittivo per diabete
• I pazienti con diabete tipo I presentano un
rischio elevato di sviluppare celiachia e
patologie tiroidee autoimmuni

TAKE HOME MESSAGES
• La determinazione di anticorpi anti-GAD
risulta importante in tutti i pazienti diabetici.
• I diabetici anti-GAD positivi sono più a
rischio dei pazienti anti-GAD negativi di
sviluppare celiachia e tiroiditi autoimmuni.
• I pazienti diabetici devono essere monitorati
eseguendo i test per a-tTG e anti-TPO/anti-
TG (e TSH)