MICOBATTERI - Sezione di Microbiologia

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NUOVI VACCINI HOSPITAL ALLI CAUSAI Negli ultimi anni, anche grazie a un rinnovato investimento nella ricerca sulla TB, abbiamo assistito allo sviluppo di nuovi vaccini sperimentali. Sono state implementate diverse strategie di vaccinazione: vaccini a subunità, costituiti da due o più antigeni ricombinanti e purifi cati di M. tuberculosis, somministrati con sostanze adiuvanti; ceppi di Vaccinia virus ricombinanti che esprimono antigeni dominanti di M. tuberculosis; ceppi di BCG ricombinanti che iperesprimono antigeni dominanti o che sono stati modifi cati per renderli più immunogenici. I risultati ottenuti con alcuni di questi vaccini sono buoni in modelli preclinici animali e si spera che gli studi clinici possano a breve fornire una valida alternativa al vaccino BCG. 37 38 DIAGNOSI PROMOZIONE E ASSISTENZA COMUNITARIA La diagnosi di infezione da M. tuberculosis, così come per gli altri agenti di infezione, viene classicamente distinta in diagnosi microbiologica o diretta e in diagnosi immunologica o indiretta. La prima viene utilizzata per evidenziare soggetti con TB attiva, mentre la seconda viene utilizzata per evidenziare i soggetti infettati con M. tuberculosis, ma non è in grado di distinguere tra soggetti sani (infezione latente) e soggetti malati (infezione attiva). 39 40 10
RISULTATI TB DIAGNOSI DIRETTA 15 comunitá sotto controllo 2400 persone monitorate 2169 PPD (Mantoux) letti 408 Bacilloscopie realizzate 380 Colture Lowenstein realizzate 21 Pazienti tratatti CAMPIONI: la diagnosi microbiologica si basa normalmente sulla ricerca di M. tuberculosis nel campione biologico (espettorato, lavaggio bronco alveolare, urine, linfonodo ecc.). DECONTAMINAZIONE: i campioni biologici polimicrobici, quali ad esempio espettorati, devono essere decontaminati mediante trattamento con soluzioni contenenti idrossido di sodio, cui il bacillo è resistente, per eliminare la flora microbica presente e concentrati per incrementare le possibilità di isolare il bacillo. PAUCIBACILLARE: è infatti importante ricordare che pazienti con TB attiva possono eliminare anche solo pochi bacilli, che moltiplicandosi molto lentamente nei terreni di coltura, verrebbero rapidamente sopraffatti dalla presenza di altri batteri nel campione biologico. Anche per tali motivi, la diagnosi microbiologica viene normalmente eseguita, laddove possibile, su almeno tre campioni consecutivi di espettora to e sulle urine del mattino raccolte per tre giorni consecutivi. 41 42 DIAGNOSI DIRETTA: ESAME MICROSCOPICO Il campione viene analizzat0 al microscopio previa colorazione con Ziehl-Nielsen. La presenza di batteri AAR è indicativa di una infezione attiva causata da micobatteri patogeni, sebbene sia necessario identificare i micobatteri e distinguerli da altri batteri acido-alcol resistenti (actinomiceti, nocardie). I micobatteri si presentano al microscopio come dei bacilli rossi su sfondo blu, allungati (A) e nel caso di M. tuberculosis spesso organizzati in piccoli gruppi di 3-10 bacilli (aggregati, B). L’analisi microscopica presenta importanti vantaggi: 1) semplicità, 2) rapidità di esecuzione, 3) il basso costo e 4) permette di evidenziare i soggetti contagiosi. È stato calcolato che nei Paesi ad alta endemia di TB, l’analisi microscopica consenta di evidenziare circa il 60% dei pazienti con TB attiva. DIAGNOSI DIRETTA: ESAME COLTURALE Il metodo diagnostico più sensibile è rappresentato dalla coltura. Per tali motivi, nei laboratori opportunamente attrezzati, una seconda aliquota di campione viene utilizzata per allestire le colture. Si procede normalmente all’inoculo di un terreno solido (Lowestein- Jensen), costituito da tuorlo d’uovo, glicerolo e verde di malachite come inibitore della crescita di altri batteri (B). La crescita dei micobatteri e in particolare di M. tuberculosis è molto lenta, e possono essere necessari fino a 45 giorni di incubazione prima di evidenziare colonie nel terreno (D). 43 44 11
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