DIAGNOSI DELLE INFEZIONI FUNGINE - Sezione di Microbiologia

Microbiology UpdateOE VarnierRicerca microscopica nei materiali patologici: per materialimolto fluidi può essere sufficiente l’osservazione diretta, imateriali densi e compatti (squame, unghie, peli, tessuto)devono essere trattati al calore consoluzioni di KOH al 10%,per sciogliere la cheratina e rendere visibile gli elementifungini. Sezioni istologiche: I comuni metodi di colorazione(ematossilina-eosina) non sem-pre riescono ad evidenziare lecellule fungine, si utilizza il reattivo di Schiff (acido fucsinsolforoso)che permette di evidenziare le cellule fungine inrosso magenta, oppure la colorazione di Gomori-Grocott cheevidenzia il contorno dei talli fungini colorandone in nero latunica. La ricerca microscopica non fornisce elementi certi perl’identificazione.Esame colturale: terreni nutritivi agarizzati (Agar Sabouraud)dispensati in piastre di Petri o provette di vetro a becco diclarino provviste di tappo a vite per rallentare l’essicamento delterreno, con aggiunta di antibiotici antibatterici in grado dicontrastare lo sviluppo di batteri con-taminanti oppure dicicloeximide (actidione) antifungino attivo sulla maggior partedelle muffe contaminanti (l’actidione inibisce la crescita di C.neoformans, quindi non deve essere utilizzato indiscriminatamente!),incubazione in termostato a 25º e/o 32º C, per unperiodo che va da una a quattro settimane.DIAGNOSI DELLE INFEZIONI FUNGINEIdentificazione♦ Miceti lievitiformi vengono identificati mediante unsistema commerciale (API 32C) costituito da un terrenosemisolido nel quale viene messo in sospensione il lievitoe da una galleria composta da 32 cupole contenenticiascuna un substrato di carbonio disidratato. Dopo averinocu-lato la galleria si effettua una incubazione a 30ºCper 24-48h, l’eventuale crescita nelle cupole vienevalutata con sistemi automatici.♦ Miceti filamentosi e Dermatofiti: l’identifi-cazione èbasata sulla velocità di crescita, sulle caratteristichemorfologiche macrosco-piche (aspetto, colore, forma econsistenza) della colonia e della retrocolonia. L’esamemicroscopico viene eseguito mediante la tecnica delnastro adesivo (stripping) utilizzando un colorante vitale(lattofenolo blue cotton), che permette di evidenziare lastrut-tura del tallo e dell’apparato fruttifero e, nel caso deidermatofiti, la presenza di macro e microconidi.Indagini sierologiche1. la ricerca a scopo diagnostico degli anticorpi specifici èostacolata dalla frequenza di rea-zioni crociate a causa distrette correlazioni antigeniche fra molti miceti patogeni.L’utilità della sierodiagnosi risulta evidente nelle mico-siopportunistiche, dove a causa del frequentecommensalismo dei miceti responsabili, il loro isolamentodai materiali patologici non per-mette di formulare ladiagnosi, a meno che i materiali non provengano dacavità chiuse (sangue, liquor…). La dimostrazione di unelevato titolo anticorpale sierico in aumento (sononecessari almeno due campioni prele-vati a congruadistanza di tempo) può risul-tare significativo ai fini delladiagnostica. (pper la ricerca di anticorpi nell’aspergillosi ilsaggio di immunodiffusione risulta assolutamentespecifico)2. antigeni fungini: utilizzata la ricerca nei liquidi organici,soprattutto nel liquor, per esempio saggio diagglutinazione su lattice per individuare la presenza diC.neoformans (esistono 4 tipi sierologici di distinguibili inbase al rapporto fra i diversi componenti polisaccaridicidella capsula, la ricerca riguarda il sierotipo A, che nellamaggior parte dei casi è la causa delle infezioni).MICETI LEVITIFORMI DI INTERESSE MEDICO:♦ Pitirosporum ovale: è l’agente eziologico della “pitiriasiversicolor“, micosi lieve e molto comune dello stratocorneo della epidermide, nelle squame ottenute pergrattamento si possono osservare blastosporerotondeggianti e corte ife settate (ha valore diagnostico).♦ Trichosporon beigelii: è l’agente eziologico della “piedrablanca“, micosi endemica del Sud America caratteriz-zatadalla formazione di granuli biancastri e mollicci lungo ilfusto dei peli (barba, ascelle, di rado capillizio), pato-genoopportunista di varie localizzazioni extra-cutanee, ancheviscerali.♦ Candida albicans e Candida spp.: molte specie sonocommensali delle cavità naturali dell’uo-mo e, quando vi1

Microbiology UpdateOE Varniersiano condizioni predispo-nenti, con meccanismoendogeno, provocano affezioni morbose. Le lesioniinteressano mucose (mughetto, vulvovaginiti), la cute(inter-trigine), le unghie (onicomicosi, soprattutto localizzataalle unghie delle mani), raramente gli organiprofondi con quadri clinici gravissimi. Altre specie diCandida possono talvolta essere considerate patogene:C.tropicalis, C.krusei, C.pseudotropicalis, C. guilliermondiie C.parapsilosis.♦Cryptococcus neoformans: saprofita fra i più diffusi, sisviluppa facilmente nelle feci di piccioni (presenza dicreatinina). L’infezione avviene per via aerogena o, piùraramente, per via digestiva; il micete ha uno spiccatotropismo per il sistema nervoso centrale e può causaremeningoencefaliti subacute o croni-che, più rare lemanifestazioni cliniche a livello polmonare (frequenti incorso di AIDS). Le colonie, inizialmente cremose,possono assumere un aspetto vischioso o gelatinoso,legato allo sviluppo di una capsula mucopoli-saccaridicaattorno alle blastospore, visibile al microscopio neipreparati a fresco solo dopo colorazione di contrasto coninchiostro di china.Appartengono a tre generi: Microsporum, Epider-mophyton eTrichophyton, nell’uomo provocano lesioni tipiche eritematodesquamativecon mar-gini circolari sulla cute glabra (tineacorporis o tinea cruris a livello delle pieghe inguinali), fenomenidi macerazione e fissurazione interdigitale conipercheratosi soprattutto plantare (tinea pedis o piede d’atleta),alopecie zonali del capillizio (tinea capitis), alterazionidistrofiche delle unghie delle mani o dei piedi (tinea unguium).I dermatofiti sono antropofili, zoofili (spesso sono trasmessiall’uomo da gatti o cani che ne sono affetti) e geofili, siriproducono asessualmente per mezzo di macroconidi (paretesottile e liscia in Epidermophyton e Trichophyton, oppurespessa e rugosa o spinosa in Microsporum) e microconidi(assenti in Epidermophyton, rotondi, ovali o piriformi negli altridue generi).MICETI FILAMENTOSI (MUFFE)Dermatofiti: capaci di metabolizzare la chera-tina,responsabili di quelle particolari affezioni della cute, dei capellie delle unghie dette dermatofizie o tigne (detti cheratinofili).2

Microbiology UpdateOE VarnierAspergilli: saprofiti diffusi in ogni ambiente, causanoinfezioni opportunistiche soprattutto in pazienti leucemici,trapiantati, malati di AIDS. Particolare modalità di riproduzioneconidiale: fialoconidi in colonne emergono da fialidi in serieunica, prodotti a loro volta dalla vescicola terminale di lunghiconidiofori. Per l’identifica-zione si sfruttano caratteristichecolturali sia macroscopiche (morfologia, colore, velocità disviluppo) che microscopiche (morfologia delle teste conidiali,forma e dimensioni dei conidi). I ceppi patogeni appartengonoal 90% al gruppo A.fumigatus, con sindromi polmonari osistemi-che, otomicosi e micosi della cornea; in particolaricondizioni dell’ospite altri gruppi appartenenti al genereAspergillus possono occasionalmente cau-sare malattie:A.niger, A.flavus, terreus.Agenti etiologici della maduromicosi o miceto-mamicetico, prevalentemente diffuso nelle regioni tropicali esubtropicali, ora presente anche in Italia. Malattia provocataper via percutanea da un gruppo di muffe saprofite del suolo(Pseudo-allescheria boydii, Madurella mycetomatis), localizzataal piede (piede di Madura) ad evoluzione lenta, contendenza alla suppurazione con fistolizzazione e presenza digranuli nel pus.Agenti etiologici della cromomicosi: cromobla-stomicosiesclusivamente cutanea e feoifomicosi sia cutanea cheviscerale, causata da miceti sa-profiti dell’ambientecaratterizzati dalla pigmenta-zione melaninica della tunica(famiglia Dematia-ceae, classe Hyphomycetes) che li rendevisibili nelle sezioni istologiche di tessuto parassitato noncolorate.Miceti dimorfi: sono responsabili di alcune im-portanti micosiprimitive, sottocutanee e viscerali contraddistinte da areeendemiche definite, in rapporto con la distribuzione ambientaledelle muffe saprofite corrispondenti, la via di infezione èpercutanea nella sporotricosi, aerogena con tappa polmonareiniziale e successiva diffusione meta-statica del micete, nellealtre micosi.3

Microbiology UpdateOE VarnierMICROSPORUM EPIDEMOPHYTON TRICHOPHYTONMACROCONIDInumerosi numerosi RariParete Spessa, rugosa o spinosa Sottile e liscia Sottile e lisciaMICROrariNumerosi/rariAssentiCONIDIForma piriformi Rotondi, ovali o piriformiAggiornato 13 novembre 20064